根不同提取物降酶退黃作用研究

吳曉華，田素英 ，郭巧玲

（1.廣東省新興中藥學校，廣東肇慶527400；2.廣東藥科大學醫(yī)藥化工學院，廣東廣州510006；3.廣東省化妝品工程技術研究中心，廣東中山528458）

根不同提取物降酶退黃作用研究

吳曉華1，田素英2，3，郭巧玲1

（1.廣東省新興中藥學校，廣東肇慶527400；2.廣東藥科大學醫(yī)藥化工學院，廣東廣州510006；3.廣東省化妝品工程技術研究中心，廣東中山528458）

目的研究根不同溶劑提取物的降酶退黃作用。方法將小鼠隨機分為正常組、模型組、水提取物組、石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組、正丁醇提取物組和茵梔黃組，各10只。各治療組連續(xù)灌胃給藥12 d后，以 －萘異硫氰酸酯(ANIT)誘發(fā)黃疸模型，48 h后摘眼球取血，分離血清，以血清肝功能指標、肝臟指數(shù)為觀察指標。結果與模型組比較，水提取物組、正丁醇提取物組的丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬酸氨基轉移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、 －谷氨?；D移酶（GGT）肝臟指數(shù)均顯著下降(P＜0.01或P＜0.05)，且組間無顯著性差異(P＞0.05)。結論根可降低試驗性膽汁淤積大鼠血清膽紅素、轉氨酶，有較好的降酶退黃作用，且其活性成分多溶于極性較大的溶劑中。

根；降酶；退黃；提取物

隨著生活水平的提高，肥餐厚味導致的黃疸肝炎成為目前的常見病、多發(fā)病[1]，采用中醫(yī)藥治療可取得較好療效。根為蕓香科花椒屬植物Zanthoxylum avicennae Lam.DC.的干燥根，又名土花椒、鷹不泊、刺蒼根、鳥不宿等，在廣東、廣西、云南、海南、江西、湖南、貴州等地區(qū)廣泛分布，是我國南方地區(qū)習用藥，治療急、慢性肝炎及肝癌[2－3]療效好。其味苦辛，性溫，歸肝、胃、腎經(jīng)，具有祛風化濕、消腫通絡的功效[4－5]。研究證明，其治療慢性丙型肝炎的功效，其同屬植物兩面針也有較好的抗肝損傷作用[6－7]。近幾年，對根化學成分有所研究，但對其治療黃疸、肝癌等的作用機制尚未見報道。本研究中以α－萘異硫氰酸酯(ANIT)制備黃疸模型，探討了根不同溶劑提取物的降酶退黃作用，為進一步開發(fā)利用根提供參考。

1 儀器、材料與動物

1.1 儀器

TGL－16G型離心機（上海安平科學儀器有限公司）；7170A型自動生化分析儀（日本日立公司）；UV－265型紫外－可見分光光度計（日本島津公司）。

1.2 材料

根采自廣東省新興縣，經(jīng)廣東藥科大學田素英副教授鑒定為蕓香科植物Zanthoxylum avicennae Lam.DC.的干燥根，標本保存在廣東省新興中藥學校。250 g根粗粉，經(jīng)水煎煮濃縮至含藥材2.5 g/mL的藥液；500 g粗粉，經(jīng)90%乙醇回流提取，回收溶劑至無醇味得浸膏，依次加石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶解萃取浸膏，得各提取物，用時以蒸餾水溶解得混懸液。茵梔黃顆粒（魯南厚普制藥有限公司，批號為1610273）；α－萘異硫氰酸酯(北京恒業(yè)精細化學品有限公司，批號為080621)。

1.3 動物

KM小鼠70只，雌雄各半，體質量（20±2）g，購自廣東藥科大學實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號SCXK＜粵＞2013－0002。飼養(yǎng)條件為溫度(20±2)℃，相對濕度(60±5)%，正常飼養(yǎng)3 d后供試。

2 方法與結果

2.1 肉眼觀察實體

與試驗前比較，模型組小鼠活動頻率明顯減少，飲食、進水量均明顯減少，毛無光澤，尿液呈深黃色，肝臟普遍腫大，明顯黃染，表面有壞死斑，大小不等。水提取物、乙酸乙酯提取物組、正丁醇提取物組及茵梔黃組小鼠肝臟變化遠較模型組小，尿液色較淡，而正常組小鼠則未見異常。

2.2 降酶退黃試驗[8]

取小鼠70只，隨機分為正常組、模型組、水提取物組、石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組、正丁醇提取物組、茵梔黃組，各10只。除正常組和模型組外，其他組分別連續(xù)給藥15 d，1次/日，灌胃給藥(0.15 mL/10 g)。第13天給藥1 h后，正常組給予等量花生油，其他各組均灌胃給藥(0.10 mL/10 g)ANIT花生油溶液。第14天晚禁食不禁水12 h后，第15天給藥1 h后摘眼球取血，以4 000 r/min的速度離心5 min分離血清，測量丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬酸氨基轉移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨?；埔泼福℅GT）。并處死小鼠，迅速取肝臟，稱定質量，以肝臟質量與體質量的百分比對比為肝臟指數(shù)。數(shù)據(jù)以X±s表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行SNK方差分析。

與正常組比較，模型組小鼠血清ALT，AST，ALP，GGT活性均顯著升高(P＜0.01)，說明造模成功。與模型組比較，水提取物組、正丁醇提取物組能顯著降低ANIT所致膽汁淤積模型小鼠肝臟指數(shù)(P＜0.05)，降低ALT，AST，ALP，GGT活性(P＜0.01)；石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組中的各指標均低于模型組，但組間差異不顯著。表明根有較好的降酶退黃作用，但其作用略低于茵梔黃顆粒。結果見表1。

表1 各組小鼠血清指標及肝臟指數(shù)變化比較（，n＝10）

表1 各組小鼠血清指標及肝臟指數(shù)變化比較（，n＝10）

注：與模型組比較，aP＜0.01，bP＜0.05；與水提取物組比較，cP＜0.05。

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3 討論

中醫(yī)認為，黃疸為機體被濕熱疫毒所侵導致肝膽功能失調，膽液隨血外溢而致目黃、身黃、尿黃為主要臨床表現(xiàn)的肝膽病證。關于保肝的藥理作用，有多種試驗方法[9]。四氯化碳(CCl4)法是直接損傷肝細胞膜，大量Ca2＋涌入細胞并主要聚集在線粒體內致線粒體膜電勢喪失，呼吸鏈功能障礙，促進氧自由基的產(chǎn)生，同時肝細胞膜通透性增加[10]。而ANIT誘發(fā)的小鼠肝損傷的生物化學和發(fā)病機制類似于人體的膽汁淤積病變，一般均用于藥物的退黃降酶作用研究[11]，因此用ANIT造模。西醫(yī)認為，肝膽功能失調主要表現(xiàn)血清中膽紅素、轉氨酶升高[12]。本試驗中模型組與正常組比較，小鼠血清ALT，AST，ALP，GGT的酶活性、肝臟指數(shù)均顯著升高(P＜0.05)，提示造模成功。

根降酶退黃保肝作用早有應用。Huang等[13]通過嘗試不同方法提取根皮內的物質，并用包含該提取物質的藥物治療肝癌，最終提取到一種有效抗癌物質，能抑制肝癌細胞增殖和轉移，并誘導肝癌細胞凋亡。本試驗結果表明，根可明顯降低肝臟中ALT，AST，ALP，GGT的活性和肝臟指數(shù)，其提取物降酶保肝的活性從高到低依次為正丁醇＞水＞乙酸乙酯＞石油醚。說明根提取物可降低肝臟血清中因損傷、瘀阻等所致的ALT，AST，ALP，GGT含量，肝臟指數(shù)有所改變，說明不但可改善黃疸癥狀，對乙型肝炎、丙型肝炎、肝癌也有一定的輔助治療作用。

根活性成分多在極性大的溶劑中，根在民間有瘦肉煲湯治療乙型肝炎的用法，與民間用水煎煮

根治療黃疸提供了科學依據(jù)。的根皮和樹皮含有香豆素、生物堿、橙皮苷等[13－14]，均有較強的生物活性，其降酶保肝的活性與哪類成分呈正相關，還有待進一步研究。

李峙臻等[15]的研究表明，治療乙型肝炎多采用西藥，如恩替卡韋、阿德福韋酯片等，未進行辨證論治，經(jīng)濟性、安全性有待全面考慮。我國的傳統(tǒng)中醫(yī)藥有辨證施治、整體觀念的綜合考慮，有豐富的中藥資源。廣泛分布于嶺南地區(qū)，生長條件粗放，資源豐富，可進行充分開發(fā)利用。

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Reducing Enzyme and Jaundice Effects of Different Extracts from Radix Zanthoxylum Avicennae

Wu Xiaohua1,Tian Suying2,3,Guo Qiaoling1
(1.Guangdongsheng Xinxing Zhongyao Xuexiao，Zhaoqing，Guangdong，China527400；2.School of Chemistry and Chemical Engineering，Pharmaceutical University，Guangzhou,Guangdong，China 510006；3.Guangdong Cosmetics Engineering＆Technology Research Center，Zhongshan，Guangdong，China528458)

ObjectiveTo study reducing enzyme and jaundice effects of different extracts from Radix Zanthoxylum avicennae,in order to lay the foundation for further development and utilization.MethodsThe mice were randomly divided into normal group,model group,water extract group and petroleum ether extract group,ethyl acetate extract group,n－butanol extract group and Yinzhihuang group,10 cases in each group.After 12 d of intragastric administration,the jaundice model was induced by ANIT in each treatment group,after 48 h,blood was taken from eyeball and serum was separated,the indexes of serum liver function and liver index were taken as observation indexes.ResultsCompared with the model group,the liver index of ALT,AST,ALP and GGT decreased significantly in the water extract group and n－butanol extract group(P＜0.01 orP＜0.05),but there was no significant difference between the two groups(P＞0.05).ConclusionRadix Zanthoxylum avicennae can reduce the serum bilirubin and transaminase in mice with experimental cholestasis,it has a better effect of reducing enzyme and jaundice,and the active ingredients are dissolved in polar solvents.

Radix Zanthoxylum avicennae;reducing enzyme;reducing jaundice;extract

R285.5；R282.71

A

1006－4931(2017)21－0018－03

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.21.007

廣東省中醫(yī)藥管理局課題[20142169]。

吳曉華（1975－），女，大學本科，實驗師，主要從事藥理及中藥藥理教學與研究工作，（電子信箱）346204031＠qq.com。

田素英（1968－），女，碩士研究生，副教授，主要從事中藥應用教學與研究工作，（電子信箱）zsxqtsy＠126.com。

2017－05－23；

2017－08－01)