HPLC測(cè)定夏枯草散結(jié)膠囊中熊果酸的含量

滕建良

（上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科中藥房，上海 201999）

HPLC測(cè)定夏枯草散結(jié)膠囊中熊果酸的含量

滕建良

（上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科中藥房，上海 201999）

目的 建立HPLC法測(cè)定夏枯草散結(jié)膠囊中熊果酸的含量。方法 采用C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相：甲醇-水(85∶12)，流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm的色譜條件測(cè)定熊果酸的含量。結(jié)果 熊果酸的線性范圍為0.252～1.258 μg，r=0.9997，平均回收率為98.17%，RSD=1.36%。結(jié)論 該方法靈敏度高、分離度好、重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

夏枯草散結(jié)膠囊；HPLC；熊果酸；中藥化學(xué)

夏枯草散結(jié)膠囊系臨床協(xié)定處方，由夏枯草、生牡蠣、當(dāng)歸、炮穿山甲、山慈菇、生山楂、半夏等15味中藥組成的復(fù)方制劑，具有清熱化痰、開郁散結(jié)的作用，臨床上用于治療甲狀腺結(jié)節(jié)。夏枯草（Prunella vulgaris L.）為唇形科夏枯草屬植物夏枯草的干燥果穗[1]。夏枯草含有豐富的三萜類、甾體類、黃酮類、多糖類、揮發(fā)油等化學(xué)成分，其中主要成分熊果酸具有抑制癌細(xì)胞增長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡等作用[2]?，F(xiàn)代臨床多用夏枯草治療甲狀腺腫大、淋巴結(jié)核、乳腺增生、高血壓、肺結(jié)核、急性黃疸型傳染性肝炎等疾病[3]。夏枯草為該處方中主要組成藥物，為了控制該制劑的質(zhì)量，采用HPLC測(cè)定該制劑中熊果酸的含量，該方法靈敏度高、分離度好、重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)便，能有效地控制該制劑的質(zhì)量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 Agilent高效液相色譜儀 (四元泵，DAD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器)，Agilent1200工作站；BP211D型電子分析天平 (德國(guó)Sartoius)；熊果酸對(duì)照品 (供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)742-200111)；夏枯草散結(jié)膠囊（系自制）；水為超純水，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

1.2 研究方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex Gemini C 18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水 (85∶12)；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量10 μL。在此條件下，熊果酸與其他色譜峰分離良好，理論板數(shù)以熊果酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取熊果酸對(duì)照品適量，精密稱取熊果酸對(duì)照品5.0324 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（50.32 μg/mL）[4]。

1.2.3 供試品溶液制備 取本品適量，研細(xì)，取5 g，精密稱定，置100 mL具塞三角錐形瓶中，加入50 mL甲醇，超聲提取30 min，過濾。藥渣加入50 mL甲醇超聲處理30 min，過濾，合并濾液，濾液水浴蒸干，殘?jiān)檬兔? mL浸泡2次，每次2 min，仔細(xì)傾去石油醚，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[5]。

1.2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn) 按處方取缺夏枯草的陰性對(duì)照藥，按供試品溶液制備方法，制得陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣，依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照液在相同位置處無與熊果酸相對(duì)應(yīng)的色譜峰，表明處方中其它藥材和輔料不干擾熊果酸的測(cè)定。

1.2.5 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25 μL進(jìn)樣，以峰面積 (Y)對(duì)進(jìn)樣量 (X)進(jìn)行回歸，熊果酸的回歸方程為Y=886.9X-312.5，r=0.9997，表明進(jìn)樣量在0.252～1.258 μg呈良好的線性關(guān)系。

1.2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定熊果酸峰面積值，計(jì)算熊果酸RSD為1.19%(n=5)，表明儀器精密度良好。

1.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0，2，4，8，24 h測(cè)定熊果酸峰面積，結(jié)果RSD為1.85%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批次的樣品6份，按照供試品溶液制備方法得到供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定熊果酸的含量，其RSD為1.94%，表明本方法重復(fù)性良好。

1.2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法測(cè)定，取已知含量的樣品（批號(hào)：170315） 研細(xì)，取約2.5 g，精密稱定，精密加入熊果酸對(duì)照品適量，制成各自的供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

1.2.10 樣品測(cè)定 取3批樣品，各取5 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，10 μL進(jìn)樣。結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

2 討論

本研究應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)夏枯草散結(jié)膠囊中熊果酸含量進(jìn)行測(cè)定，通過線性、回收率、重復(fù)性、以及精密度實(shí)驗(yàn)等及其數(shù)據(jù)分析，可以得出該測(cè)定方法具有良好的線性及回收率高，本分析方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于夏枯草散結(jié)膠囊質(zhì)量控制。

本研究考察了甲醇、乙醇提取溶劑，結(jié)果甲醇為提取溶劑時(shí)，熊果酸的峰面積最大，本研究確定提取溶劑為甲醇。本研究還考察了30 mL，40 mL，50 mL，60 mL四個(gè)體積甲醇，結(jié)果表明提取溶劑體積為50 ml時(shí)，提取樣品中熊果酸的效率最佳。另外，比較超聲與回流2種提取方法，結(jié)果表明超聲提取的效率要高于回流提取的提取率，故選擇超聲提取。還分別考察不同超聲時(shí)間15 min，30 min，45 min和60 min，最終確定超聲時(shí)間為30 min[6]。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.2010年版.一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：263.

[2]Kuttan G，Pratheeshkumar P，Manu KA，et al.Inhibition of tumor progression by naturally occurringterpenoids[J].Pharm Biol，2011，49(10):995-1007.

[3]鄧子煜，徐先祥，張小鴻，等.夏枯草藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)學(xué)，2012，33（7）：937-939.

[4]黃豪萬，常明泉，李玲，等.顛胃酸口服液中熊果酸的含量測(cè)定[J].實(shí)用藥物與臨床，2014，17（4）：469-471.

[5]鄭單萍.高效液相色譜法測(cè)定夏枯草中熊果酸的含量[J].海峽藥學(xué)，2012，24（9）：72-74.

[6]謝文劍，曹藝，柏玉冰，等.夏枯草中熊果酸含量的UPLC測(cè)定[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2014，21(28):11-13.

Determination of Ursolic Acid in Prunella Sanjie Capsule by HPLC

TENG Jianliang

(Department of Pharmacy,Baoshan District Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Shanghai 201999,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of ursolic acid in prunella Sanjie capsule Methods The procedure of HPLC was performed on the chromatographic column of C 18(250 mm x 4.6mm,5 μm),and the mobile phase was methanol-water(85:12).The flow velocity was l mL／min and detection wave length was 210 nm.Results Ursolic acid showed good linear relationship in the range of 0.252～1.258μg,and the average recovery rate was 98.17%,RSD=1.36%.Conclusion The method has high sensitivity,good separation and good reproducibility,and can be used as the quality control method of the preparation.

Prunella Sanjie capsule;HPLC;ursolic acid;chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.19.064

1672-2779（2017）-19-0145-02

2017-08-28）