花臉香蘑液體發(fā)酵液抗菌活性研究

張麗麗　王蘭英　唐萌

摘要：采用不同的有機(jī)溶劑對(duì)花臉香蘑（Lepista sordida）的發(fā)酵液進(jìn)行萃取，并進(jìn)行了花臉香蘑發(fā)酵液的抗菌活性試驗(yàn)。結(jié)果表明，花臉香蘑胞外小分子乙酸乙酯相對(duì)所選菌種的生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，且效果較好。而小分子的正丁醇相的抗菌效果不穩(wěn)定，花臉香蘑的胞外小分子對(duì)G+、G-均有一定的抑制作用，表明花臉香蘑具有廣泛的抗菌活性。

關(guān)鍵詞：花臉香蘑（Lepista sordida）；液體發(fā)酵；抗菌活性

中圖分類號(hào)：S646 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）18-3528-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.18.034

Abstract： Using different organic solvent extracting of Lepista sordida fermented liquid，and the fermented liquid of Lepista sordida antibacterial activity test. The results showed the extracelluar small moleules ethyl acetate phase extracted from Lepista sordoda has certain inhibition effect on the growth of the selected strains and the effect is relatively good. However，the antibacterial effect of the small molecules n-butyl alcohol phase is unstable. The extra cellular small molecule of the lepista sordida has certain inhinition effect on G+ and G-，which manifests Lepista sordida has a wide range of antibacterial activity.

Key words： Lepista sordida； liquid fermentation； antibiotic activity

花臉香蘑（Lepista sordida），又名紫香花臉蘑，隸屬于傘菌目（Agaricales）白蘑科（Tricholomataceae）香蘑屬（Lepista），其子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)豐富、風(fēng)味獨(dú)特，是一種具有較高開(kāi)發(fā)價(jià)值的食用菌[1-3]。但人工栽培的花臉香蘑存在子實(shí)體易碎、不易運(yùn)輸?shù)热毕荨；樝隳⒌陌l(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，極大地降低了花臉香蘑的生產(chǎn)成本、增大了產(chǎn)量，具有很高的市場(chǎng)潛力。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料 花臉香蘑，由吉林大學(xué)珠海學(xué)院化學(xué)與藥學(xué)系實(shí)驗(yàn)中心提供；牛肉膏，天津市福晨化學(xué)試劑廠；瓊脂粉，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；蛋白胨，廣州學(xué)友生物科技有限公司；無(wú)水乙醇、氫氧化鈉（分析純），廣東省精細(xì)化學(xué)品工程技術(shù)研究開(kāi)發(fā)中心；氯化鈉（分析純），天津市福晨化學(xué)試劑廠；供試菌，大腸埃希氏菌ATCC25922、枯草芽孢桿菌CMCC63501、地桿菌ATCC33117、黏質(zhì)沙雷氏菌ATCC43424、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞桿菌。

1.1.2 儀器 立式壓力蒸汽滅菌器，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；烘箱，DHG-9140A型，上?！憧茖W(xué)儀器有限公司；氣浴恒溫振蕩器，ZD-85型，金壇市醫(yī)療儀器廠；恒溫培養(yǎng)箱，HPX-9272MBE型，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

1.2 方法

1.2.1 指示菌的制備 大腸埃希氏菌ATCC25922、枯草芽孢桿菌CMCC63501、地桿菌ATCC33117、黏質(zhì)沙雷氏菌ATCC43424、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞桿菌采用LB培養(yǎng)基接種，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，涂布培養(yǎng)法測(cè)定其菌液濃度，用無(wú)菌生理鹽水稀釋成109 CFU/mL菌懸液。指示菌于4 ℃冰箱保存待用。

1.2.2 胞外小分子的制備 花臉香蘑胞外小分子的制備流程如圖1所示。將花臉香蘑接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，120 r/min搖床培養(yǎng)5 d。乙醇沉淀多糖后的發(fā)酵液上清液濃縮至原體積，1∶1分別加入乙酸乙酯及正丁醇，反復(fù)萃取3次，獲得小分子乙酸乙酯相及小分子正丁醇相濃縮10倍備用。

1.2.3 抗菌活性的測(cè)定[4-10] 將活化好的菌種懸液用移液槍取1 mL加入50 ℃左右未凝固的培養(yǎng)基中，混勻備用。定性濾紙片以打孔器制成直徑6 mm的圓形紙片，121 ℃、0.103 MPa 蒸汽滅菌20 min。用鑷子夾取浸透小分子乙酸乙酯相及小分子正丁醇相的6 mm圓形濾紙片放于培養(yǎng)基上，并將浸透乙酸乙酯及正丁醇試劑濾紙片作為空白對(duì)照放于培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)皿共放4片濾紙，各紙片中心相距應(yīng)大于24 mm，紙片中心距平板內(nèi)邊緣應(yīng)大于15 mm。避免鑷子觸碰培養(yǎng)基，以免造成交叉感染或培養(yǎng)基破損。將培養(yǎng)皿倒置，于32 ℃培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，取出并分別測(cè)量濾紙片抑菌圈的直徑大小、拍照并記錄試驗(yàn)結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

利用乙酸乙酯和正丁醇提取花臉香蘑發(fā)酵液抑菌物質(zhì)，以大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、地桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞桿菌作為指示菌，對(duì)花臉香蘑發(fā)酵液進(jìn)行抑菌作用研究。結(jié)果（圖2、表1）表明，提取的花臉香蘑胞外小分子乙酸乙酯相對(duì)所選菌種的生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，且效果較好，其中對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌（-）的抑制能力最強(qiáng)，抑菌圈達(dá)到12 mm，對(duì)銅綠假單胞桿菌（-）也有一定的抑制效果，抑菌圈達(dá)到10 mm。對(duì)金黃色葡萄球菌（+）和枯草芽孢桿菌（+）也有一定的抑制效果，抑菌圈都達(dá)到9 mm。對(duì)地桿菌和大腸埃希氏菌（-）有抑制效果，抑菌圈為8 mm。而花臉香蘑胞外子小分子的正丁醇相的抗菌效果不好，對(duì)大腸埃希氏菌（-）有一定的抑制效果，抑菌圈達(dá)到10 mm，對(duì)其他指示菌均無(wú)效果[11-14]。endprint

3 小結(jié)與討論

花臉香蘑胞外小分子乙酸乙酯相對(duì)大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、地桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞桿菌的生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，且效果較好，其中對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌（-）的抑制能力最強(qiáng)，抑菌圈達(dá)到12 mm，對(duì)銅綠假單胞菌（-）也有一定的抑制效果。而花臉香蘑胞外小分子正丁醇相的抗菌效果不好。花臉香蘑胞外小分子乙酸乙酯相能夠抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，而正丁醇相對(duì)金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用，可見(jiàn)不同溶劑的提取物，對(duì)同一細(xì)菌有不同的抑菌作用，說(shuō)明花臉香蘑中存在著不同溶解性的抑菌物質(zhì)，為進(jìn)一步的研究不同溶劑提取物的具體化學(xué)成分打下基礎(chǔ)[15-17]。

通過(guò)對(duì)花臉香蘑胞外小分子物質(zhì)的抗菌活性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：花臉香蘑的胞外小分子對(duì)G+、G-均有一定的抑制作用，說(shuō)明花臉香蘑具有廣泛的抗菌活性，這與張京良等[9]的花臉香蘑Lepista sordida LS7的鑒定及其發(fā)酵液抗菌活性分析的研究結(jié)果相吻合。說(shuō)明可以對(duì)花臉香蘑抑菌活性深入研究，開(kāi)發(fā)天然防腐劑。

花臉香蘑的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，極大地降低了花臉香蘑的生產(chǎn)成本、增大了產(chǎn)量，具有很高的市場(chǎng)潛力。花臉香蘑抑菌效果較好，具有廣泛的抗菌活性。綜上所述，花臉香蘑在體外具有良好的抑菌作用，以期為花臉香蘑的深入開(kāi)發(fā)利用提供一定的理論基礎(chǔ)。

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