鴨瘟強(qiáng)毒人工感染雛鴨的顯微和超微病理學(xué)變化

劉忠偉　楊穎　江楠

摘要：為了解鴨瘟病毒（DPV）人工感染雛鴨后的組織器官病變規(guī)律、感染后病毒分布情況及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，試驗以 DPV GZ 強(qiáng)毒株人工感染 90羽15 日齡健康雛鴨，分別在感染后 3、6、10、18、30、48、72、96、108 h 剖殺，采用PCR技術(shù)進(jìn)行病原鑒定，并通過光學(xué)顯微鏡和透射電鏡進(jìn)行病理組織顯微和超微結(jié)構(gòu)觀察。結(jié)果顯示，人工感染 3 h 后即可通過PCR技術(shù)檢測出DPV核酸；透射電鏡觀察表明感染后10 h可在脾臟中首先觀察到少量的病毒，30 h 后胸腺開始發(fā)現(xiàn)病毒，病毒的數(shù)量隨感染時間增加逐漸增加；感染18 h后，中樞免疫器官胸腺表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞數(shù)量降低，組織間隙增大；脾臟組織病變嚴(yán)重，其余器官組織結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)程度較輕的組織損傷；感染后30 h，中樞免疫器官的淋巴細(xì)胞極度減少，器官組織結(jié)構(gòu)模糊不清，出血較為嚴(yán)重；一些器官則出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，腸道等器官組織也有細(xì)胞變性、出血等病理變化；在死亡鴨的肝臟、脾臟、十二指腸、胸腺發(fā)現(xiàn)數(shù)量極多的病毒。對照組鴨組織中未發(fā)現(xiàn)病理變化。這些研究結(jié)果可以為鴨瘟病毒的致病機(jī)制研究和鴨瘟的病理學(xué)診斷提供試驗依據(jù)。

關(guān)鍵詞：鴨瘟病毒；雛鴨；組織病理變化；超微結(jié)構(gòu)變化

中圖分類號： S8583253文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號：1002-1302（2017）16-0140-08

收稿日期：2016-07-02

基金項目：國家自然科學(xué)基金（編號：31260607、31560703）；貴州省科學(xué)技術(shù)基金（編號：黔科合 J 字號[2009]2137 號）。

作者簡介：劉忠偉（1980—），男，內(nèi)蒙古錫林郭勒人，高級實驗師，主要從事動物學(xué)研究。E-mail：zwliu @gzueducn。

通信作者：文明，博士，教授，主要從事獸醫(yī)免疫學(xué)研究。E-mail：asmwen@gzueducn。

鴨瘟又稱鴨病毒性腸炎，是由鴨瘟病毒（duck plague virus，DPV）引起的，多發(fā)于鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性熱性敗血性傳染病，其特征是血管損傷、體腔溢血、消化道出血壞死、淋巴器官受損和實質(zhì)器官退行性變化等，是危害養(yǎng)鴨業(yè)最為嚴(yán)重的疾病之一。鴨瘟的流行沒有明顯的季節(jié)性，一年四季皆有發(fā)生，當(dāng)鴨瘟傳入易感鴨群后，一般3～7 d開始出現(xiàn)零星病鴨，再經(jīng)3～5 d陸續(xù)出現(xiàn)大批病鴨，進(jìn)入流行發(fā)展期和流行盛期。鴨群整個流行過程一般為2～6周。如果鴨群中有免疫鴨或耐過鴨時，可延至2～3個月或更長。在試驗條件下，DPV可通過口腔、鼻內(nèi)、靜脈、腹腔、肌肉和泄殖腔等途徑傳染；在形成病毒血癥期間，吸血節(jié)肢動物也可傳播本病。近年來研究發(fā)現(xiàn)，鴨瘟病毒與其他皰疹病毒相似，也可形成潛伏感染，在鴨等水禽的三叉神經(jīng)節(jié)和淋巴組織包括外周血液中的淋巴細(xì)胞中可長期潛伏存在[1-5]。

本試驗通過鴨瘟病毒強(qiáng)毒人工感染雛鴨，以PCR技術(shù)檢測確認(rèn)為鴨瘟感染后，利用光學(xué)顯微鏡和透射電鏡進(jìn)行病理組織顯微和超微結(jié)構(gòu)觀察，以了解鴨瘟病毒人工感染后的組織器官病變規(guī)律、感染后病毒分布情況及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，為鴨瘟病毒的致病機(jī)制研究和鴨瘟的病理學(xué)診斷提供試驗依據(jù)。

1材料與方法

11試驗毒株

DEV GZ株，本實驗室分離、鑒定和保存。

12試驗動物

90羽15日齡雛鴨，購自貴陽市花溪區(qū)未接種鴨瘟病毒疫苗的養(yǎng)殖戶。90羽雛鴨隨機(jī)分成2組，第一組為人工感染組，72羽，腿部肌肉接種鴨瘟病毒GZ株病毒液01mL/羽；第二組為空白對照組，18羽，不進(jìn)行任何處理，2組隔離飼養(yǎng)。分別在3、6、10、18、30、48、72、96、108 h剖殺雛鴨，觀察臨床癥狀，記錄各器官病理變化及雛鴨的死亡情況。無菌采集腦、肝、脾、腎、十二指腸、胸腺、心、肺等組織樣本（其中每個時段人工感染組剖殺8羽，空白對照剖殺2羽），編號并分別裝于滅菌平板內(nèi)和浸泡于固定液中。

13試驗儀器

試驗儀器包括超低溫冰箱、常規(guī)解剖器械、PCR儀、凝膠成像儀、電泳儀、切片機(jī)、普通光學(xué)顯微鏡、透射電子顯微鏡等。

14試驗方法

141利用PCR法檢測病毒根據(jù) GenBank 中登錄的鴨瘟病毒基因序列，用Prime 50軟件設(shè)計了1對特異性引物，上游引物為5′-ATGGCTATGGACCAACCG-3′，下游引物為5′-CATTCTCGCTCCGACACG-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物約923 bp，由上海生工生物工程有限公司合成。采用動物組織基因組DNA提取試劑盒（上海生工）提取DNA作為 PCR模板，按常規(guī)PCR方法進(jìn)行鑒定。

142光學(xué)顯微鏡觀察浸泡于固定液的組織水洗過夜，乙醇梯度脫水，透明、浸蠟、包埋、切片、HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍攝和記錄下各組織的病理變化。

143透射電子顯微鏡觀察標(biāo)本用25%戊二醛固定 4 h，1% 鋨酸后固定1 h，丙酮梯度脫水，環(huán)氧樹脂618 包埋，超薄切片機(jī)切片，檸檬酸鉛-醋酸鈾雙染，透射電鏡觀察。

2結(jié)果與分析

21臨床癥狀及大體病理變化

211臨床癥狀

人工感染后30 h內(nèi)未出現(xiàn)明顯臨床癥狀，48 h后開始出現(xiàn)臨床癥狀：精神沉郁，不喜動，喜臥，脖子緊縮，不飲水，吃食較少；72 h開始出現(xiàn)死亡，病鴨呼吸出現(xiàn)濕羅音，鼻腔分泌少量清亮黏液，精神沉郁不喜動，頭搭向身體一側(cè)，部分表現(xiàn)出神經(jīng)癥狀呈單腳支撐站立姿勢；96 h頭搭向身體一側(cè)，不食不飲，眼內(nèi)膜灰白渾濁，瞳孔內(nèi)有白色針尖狀顆粒，鼻腔分泌物黏稠呈膿性，呼吸急促，拉稀糞污染肛門周邊羽毛；108 h全部死亡。

212大體病理變化

感染后18 h內(nèi)解剖病變不明顯，剖檢僅見胸腔肋骨下有黃色少量滲出物，部分胸腺有散在的小出血點。感染后30 h胸腺皆有出血點變化，肝臟和脾臟出現(xiàn)少量大小不一的白色壞死灶，腦部輕度充血。感染后48 h肝臟壞死灶周邊伴隨有環(huán)狀出血帶，脾臟出現(xiàn)大量壞死點，腦部充血程度加重。感染后72 h腹膜水腫，有大量濃性黃色滲出物與臟器相粘連，體內(nèi)各器官出現(xiàn)腫大充血出血。感染后 96～108 h雛鴨死亡，立即解剖的雛鴨亦呈現(xiàn)以上大體病理變化，且程度有所加重：心冠狀脂肪、心內(nèi)膜有出血點（圖1）；肝臟遍布大小不一的出血塊和白色壞死灶，膽囊腫大（圖2）；肺臟出血，氣管充血出血（圖3）；腎臟腫大，有大量出血斑（圖4）；腦部腫大充血出血（圖5）；回腸、結(jié)腸有環(huán)狀出血帶，腸黏膜脫落，有潰瘍突出于腸上皮表面，直腸、盲腸皆有出血點（圖6）；脾臟腫大，周邊可見白色壞死點；胸腺充血出血。

22利用PCR法檢測病毒

采集感染后雛鴨的不同組織提取DNA樣本，應(yīng)用PCR技術(shù)進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示感染3 h后即可在肝、脾、腦、胸腺、腎和肺幾種器官中檢出DPV核酸；感染10 h后還可在十二指[CM（25]腸、盲腸、心肌和胸肌等器官中檢測出病毒核酸；而空白對[CM）]

照組鴨各個受檢樣品在不同時段上均呈陰性反應(yīng)（圖7）。

23組織學(xué)病理變化

231心臟接種后18 h，部分心肌纖維出現(xiàn)輕度腫脹，少量炎性細(xì)胞浸潤。接種后48 h，心肌纖維出現(xiàn)胞核、肌漿深染，有部分心肌纖維溶解斷裂（圖8）。接種后72 h，肌纖維出現(xiàn)脂肪變性和空泡變性，間質(zhì)明顯充血、出血，血管內(nèi)皮受損。接種后108 h，炎性細(xì)胞浸潤，肌纖維間隙增寬、結(jié)構(gòu)紊亂、變性、斷裂、著色不均 （圖9）。

232肝臟接種后6 h，肝細(xì)胞核腫脹變大變圓，少數(shù)核淡染或消失而留下核影，肝細(xì)胞之間的界限模糊，胞漿嗜伊紅性增[CM（25]強(qiáng)，內(nèi)含有微細(xì)顆粒狀物。之后時間段肝組織呈現(xiàn)不同程[CM）]

度的脂肪變性、水泡變性，局部出現(xiàn)炎性細(xì)胞成團(tuán)聚集。接種后48 h，中央靜脈血管壁內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，管壁結(jié)締組織增生、排列疏松；肝細(xì)胞索變窄、結(jié)構(gòu)紊亂，部分肝竇內(nèi)含有大量紅細(xì)胞 （圖10）。接種后72 h，肝細(xì)胞胞漿、胞質(zhì)深染，竇狀隙間紅細(xì)胞數(shù)量亦增多，并且有炎性細(xì)胞浸潤（圖11）。接種后 108 h，中央靜脈及血竇擴(kuò)張瘀血，靜脈周圍的肝細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的空泡變性、溶解和壞死，形成大小不等的壞死灶，壞死灶呈現(xiàn)網(wǎng)狀、紅色淡染，內(nèi)有紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片以及炎性細(xì)胞（圖12）。

233脾臟接種后18 h，網(wǎng)狀細(xì)胞增多，脾竇中的紅細(xì)胞增多，白髓部分淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞間距增寬。接種后 48 h，網(wǎng)狀細(xì)胞增生，淋巴細(xì)胞間距增寬，呈網(wǎng)狀，脾小體結(jié)構(gòu)變的模糊不清，脾竇大量充血，淋巴細(xì)胞數(shù)量極度減少（圖13）。接種后108 h，實質(zhì)內(nèi)有大小不等的凝固性壞死灶，其內(nèi)含有大量細(xì)胞碎片、 中性粒細(xì)胞、少量紅細(xì)胞，淋巴細(xì)胞大

量減少甚至部分區(qū)域無淋巴細(xì)胞，壞死灶周圍有出血 （圖14）。

234肺臟接種后18 h，肺的毛細(xì)血管擴(kuò)張充滿紅細(xì)胞，肺泡內(nèi)有少量紅細(xì)胞、纖維蛋白，間質(zhì)血管充血（圖15）。接種后48 h，肺泡壁毛細(xì)血管嚴(yán)重擴(kuò)張，充血、出血，局部出現(xiàn)壞死灶，其內(nèi)紅染，含有大量細(xì)胞碎片和炎性細(xì)胞，肺泡腔變窄。接種后108 h，整個肺實質(zhì)充血、出血，少數(shù)3級支氣管充滿紅

細(xì)胞，肺局部出現(xiàn)壞死，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，壞死灶數(shù)量增多，大量炎性細(xì)胞浸潤（圖16）。

235腎臟接種10 h后，毛細(xì)血管充血，部分腎小球出現(xiàn)萎縮，有的腎小球變大而充滿腎小囊或是腎小囊腔變窄，有的腎小囊壁層細(xì)胞缺失，其完整結(jié)構(gòu)被破壞，腎小管的上皮細(xì)胞核腫大變圓，間質(zhì)有少量炎性細(xì)胞浸潤。接種48 h后，腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松，胞質(zhì)淡染，有的腎小管上皮細(xì)胞溶解消失，管腔內(nèi)有數(shù)量不等紅染的片狀蛋白和紅色顆粒，間質(zhì)血管充血、出血，大量炎性細(xì)胞浸潤（圖17）。接種72 h后，腎組織病理變化進(jìn)一步加重，腎小球和腎小球的損害程度加劇，間質(zhì)出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞。接種96 h后，腎組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，腎小管上皮細(xì)胞胞漿溶解消失，有的腎小管結(jié)構(gòu)破壞，上皮細(xì)胞獨立散在，部分胞核消失留下核影；有些區(qū)域未見正常的腎小體結(jié)構(gòu)，腎臟廣泛性出血，間質(zhì)伴有炎性細(xì)胞浸潤（圖18）。

236大腦接種后18 h，腦組織出現(xiàn)輕度水腫，血管擴(kuò)張輕度充血，有的血管內(nèi)皮細(xì)胞受損。接種后48 h，腦組織結(jié)構(gòu)

疏松，膠質(zhì)細(xì)胞增生，血管擴(kuò)張，充血、血管周間隙增大（圖19）。接種后72 h，腦組織結(jié)構(gòu)呈網(wǎng)狀變化，有的神經(jīng)細(xì)胞核只留下核影，小膠質(zhì)細(xì)胞成團(tuán)聚集。接種后96 h，病理變化進(jìn)一步加重，腦組織出現(xiàn)許多空泡，血管周隙增寬，血管充血，管壁水腫，大腦皮層出血（圖20）。

237十二指腸接種18 h后，漿膜層下有充血出血，肌層平滑肌輕度水腫，固有層結(jié)締組織結(jié)構(gòu)疏松，絨毛頂部上皮細(xì)胞缺損。接種48 h后，病理變化進(jìn)一步加重，有的肌層平滑肌發(fā)生崩解。接種72 h后，腸絨毛出現(xiàn)斷裂、脫落，正常結(jié)構(gòu)被破壞、黏膜上皮細(xì)胞及淺層固有膜壞死、脫落，部分腸腺出現(xiàn)凝固性壞死（圖21）。接種96 h后，十二指腸黏膜上皮變性、壞死、崩解，固有層內(nèi)有紅細(xì)胞、壞死脫落的細(xì)胞碎片、淋巴細(xì)胞及炎性細(xì)胞浸潤，多數(shù)腸腺結(jié)構(gòu)被破壞 （圖22）。

238胸腺接種10 h后，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞與細(xì)胞之間多見紅染；到30 h后多見細(xì)胞碎片，壞死區(qū)內(nèi)無細(xì)胞成分。接種48 h后，上述病理變化加重。接種72 h后，淋巴細(xì)胞數(shù)量極度減少，細(xì)胞間隙明顯增寬，網(wǎng)狀細(xì)胞增生，胸腺皮質(zhì)、髓質(zhì)界限消失， 并見有固縮、碎裂、溶解的淋巴細(xì)胞核及壞死灶

（圖23）。接種96 h后，淋巴細(xì)胞進(jìn)一步減少，胸腺出現(xiàn)血管充血、組織出血，部分雛鴨出現(xiàn)胸腺萎縮（圖24）。

24細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化

鴨感染 10 h 后在脾臟中首先觀察到少量的病毒，30 h 后胸腺開始發(fā)現(xiàn)病毒，病毒的數(shù)量隨感染時間延長逐漸增加，在死亡鴨的肝、脾、十二指腸和胸腺發(fā)現(xiàn)數(shù)量較多的病毒。在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞、肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞可見大量成熟病毒。對照鴨組織中未發(fā)現(xiàn)病毒。

241肝臟的透射電鏡觀察

感染后18 h可以觀察到有的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不完整，核發(fā)生固縮。感染后48 h有的細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的電子密度增大，有的細(xì)胞出現(xiàn)板層小體。感染后72 h有的細(xì)胞出現(xiàn)退行性變化，有的細(xì)胞核周隙增寬，線粒體腫脹，電子密度深淺不一， 同時在胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)病毒顆粒 （圖25、 圖

26）。感染后96 h可以觀察到多個壞死的細(xì)胞，有的細(xì)胞發(fā)生碎裂，同時伴有細(xì)胞質(zhì)溶解，有的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)已經(jīng)不完整，染色質(zhì)邊移，在有的細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)了成熟度不同的病毒顆粒（圖27）。

242脾臟的透射電鏡觀察

感染后10 h可以觀察到有的淋巴細(xì)胞核膜破裂，核電子密度增大，有的淋巴細(xì)胞核固縮，同時在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)少量病毒顆粒（圖28）。感染后48 h有的細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的電子密度增大，有的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)板層小體，細(xì)胞出現(xiàn)退行性變化，且電子密度深淺不一，脾髓質(zhì)皮質(zhì)邊界模糊（圖29）。感染后72 h有的細(xì)胞出現(xiàn)退行性變化，細(xì)胞核發(fā)生固縮、溶解，有的細(xì)胞核周邊間隙增寬（圖30），可以觀察到多個壞死的細(xì)胞。

243肺臟的透射電鏡觀察

感染18 h后觀察到肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，部分肺泡細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。感染48 h后肺泡腔變窄，部分細(xì)胞細(xì)胞核固縮、溶解，細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞胞質(zhì)溶解釋放。感染后108 h，肺泡細(xì)胞出現(xiàn)大量壞死，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞內(nèi)外發(fā)現(xiàn)大量病毒顆粒（圖31、圖32）。

244腎臟的透射電鏡觀察

感染18 h后可以觀察到部分腎小球出現(xiàn)萎縮，有的細(xì)胞完整結(jié)構(gòu)被破壞。感染48 h后上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松，細(xì)胞的電子密度增大，有的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮現(xiàn)象。感染72 h后有細(xì)胞出現(xiàn)退行性變化，細(xì)胞核周邊間隙增寬，細(xì)胞器腫脹擴(kuò)張，基質(zhì)電子密度降低（圖33）。感染108 h 后可以觀察到多個壞死的細(xì)胞， 細(xì)胞膜碎裂，細(xì)胞胞

漿胞質(zhì)溶解消失，在細(xì)胞內(nèi)外發(fā)現(xiàn)大量成熟度不同的病毒顆粒（圖34）。

245胸腺的透射電鏡觀察

感染后30 h可以觀察到有的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性被破壞，同時在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)病毒顆粒（圖35），可以觀察到多個細(xì)胞核發(fā)生固縮或者碎裂。感染后48 h 可以觀察到有的細(xì)胞核發(fā)生固縮，細(xì)胞質(zhì)電子密度降低，有的細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞器崩解（圖36）。感染后 72 h 觀察到細(xì)胞存在壞死，核發(fā)生固縮、碎裂，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)了病毒顆粒。感染后96 h在細(xì)胞核內(nèi)外均觀察到了病毒顆粒（圖37）。感染后108 h壞死細(xì)胞數(shù)量增多，有的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不完

整，有的細(xì)胞核發(fā)生固縮、崩解，在壞死細(xì)胞中有病毒顆粒存在（圖38）。

3結(jié)論與討論

本試驗以DEV GZ株腿部肌肉注射15日齡健康雛鴨，使其成功感染，表現(xiàn)出鴨瘟的相關(guān)臨床癥狀和大體的病理變化特點，并用PCR技術(shù)進(jìn)行了病原鑒定。本試驗注射感染的雛鴨在108 h內(nèi)全部死亡，潛伏期為1～2 d。在感染后不同時間剖殺雛鴨觀察其大體病理變化，發(fā)現(xiàn)DPV對易感動物體內(nèi)各組織器官均具有侵襲力；各組織器官主要以出血病變和壞死為特征，其中胸腺最早表現(xiàn)出出血變化，此后，肝臟、肺臟、脾臟、腎臟、心冠狀脂肪、食道與腺胃交界處、腸道、胰腺等部位亦表現(xiàn)出血病變，部分組織也有大小不等的壞死點或壞死灶，特別是在死亡高峰期出現(xiàn)時，維持機(jī)體生命活動的實質(zhì)器

官都出現(xiàn)大面積的變性壞死，使得機(jī)體正常的生命活動難以維持。這些大體病理變化特點與有關(guān)學(xué)者的研究報道相一致[7-10]。病原PCR檢測結(jié)果顯示感染3 h后即可在肝、脾、腦、胸腺、腎和肺幾種器官中檢出DPV核酸；感染10 h后還可在十二指腸、盲腸、心肌和胸肌等廣泛的器官組織中檢測出病毒核酸，這在分子水平上印證了DPV感染雛鴨后出現(xiàn)全身敗血癥和廣泛的組織器官損害的癥狀[11]。

通過對感染后3、6、10、18、30、48、72、96、108 h的雛鴨各組織病理切片的觀察，感染后18 h在某些器官如肺臟、腎臟、大腦等出現(xiàn)毛細(xì)血管擴(kuò)增充血現(xiàn)象，其后時間段所檢組織血管內(nèi)皮細(xì)胞皆發(fā)生不同程度的損傷；肝臟、腎臟和胸腺較早觀察到其特有的組織學(xué)病變。消化系統(tǒng)中肝臟的實質(zhì)細(xì)胞在感染后 6 h 就出現(xiàn)顆粒變性，伴隨著病程發(fā)展，DPV對肝臟的損傷越發(fā)加重，嚴(yán)重地影響了肝臟作為機(jī)體最大消化腺的功能；十二指腸由感染初期出現(xiàn)的肌層水腫發(fā)展為后期平滑肌斷裂、腸上皮細(xì)胞壞死、絨毛脫落、腸腺壞死和萎縮，這兩個機(jī)體內(nèi)最重要的消化腺和消化道的病變表明鴨腸炎病毒會對機(jī)體消化系統(tǒng)產(chǎn)生嚴(yán)重?fù)p害。免疫系統(tǒng)中胸腺和脾臟分別在感染后10 h和感染后18 h觀察到細(xì)胞間隙增大，其后淋巴細(xì)胞逐漸減少，部分區(qū)域甚至消失呈紅染，多細(xì)胞碎片和炎性細(xì)胞，這兩個機(jī)體主要的免疫器官中淋巴細(xì)胞大量受到損害，預(yù)示著機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫功能下降。呼吸系統(tǒng)中大量肺臟肺泡結(jié)構(gòu)受到破壞，其中含有炎性細(xì)胞和壞死灶，肺部有效通氣量減少，導(dǎo)致機(jī)體呼吸困難。機(jī)體中各器官與病毒、各器官之間相互作用，體現(xiàn)出相似或特有的組織學(xué)變化，共同影響著機(jī)體內(nèi)環(huán)境的變動方向，通過對病理切片的觀察，可以診斷和預(yù)示病程的發(fā)展?fàn)顩r[12]。

對感染雛鴨的超微組織結(jié)構(gòu)觀察的結(jié)果顯示，鴨感染后10 h在脾臟中首先觀察到少量的病毒，感染后30 h胸腺開始發(fā)現(xiàn)病毒，病毒的數(shù)量隨感染時間延長逐漸增加，在死亡鴨的肝、脾、十二指腸和胸腺發(fā)現(xiàn)數(shù)量較多的病毒。對照鴨組織中未發(fā)現(xiàn)病毒。電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，病毒具有典型的皰疹病毒特征，核衣殼以及成熟病毒的形態(tài)和在細(xì)胞內(nèi)的分布與李成等、翟中和等[14]、袁桂萍等[15-16]對DPV的研究相一致。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道，皰疹病毒核衣殼裝配方式主要存在細(xì)胞核內(nèi)與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)2種不同的方式[16-19]。皰疹病毒的核衣殼的裝配方式是通過內(nèi)外核膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞質(zhì)中獲得皮層后病毒出芽到高爾基體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)獲得囊膜，再以出芽、胞吐、細(xì)胞破裂等方式釋放到細(xì)胞外[14-15，18-19]。本研究中也觀察到細(xì)胞核內(nèi)與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)2種不同的核衣殼裝配方式，但細(xì)胞質(zhì)中的裝配更為常見，這與已有研究結(jié)果[15-16]相一致。

通過大體病理解剖、組織病理學(xué)、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理變化觀察研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)病毒進(jìn)入機(jī)體后，在組織細(xì)胞中大量繁殖，對免疫器官脾臟、胸腺和法氏囊造成直接的損傷，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞大量凋亡和壞死，機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫受到嚴(yán)重破壞，從而加速了病毒繁殖，進(jìn)一步使宿主的免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)受到嚴(yán)重破壞。這也是感染 DPV 后，病鴨容易引起免疫抑制和繼發(fā)感染而加快死亡的原因。

參考文獻(xiàn)：[HJ169mm]

殷震，劉景華 動物病毒學(xué)[M] 2版北京：科學(xué)出版社，1997：1073-1077

卡爾尼克B W 禽病學(xué)[M] 高福，蘇敬良，譯 10版北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999：857-867

[3]陳溥言 獸醫(yī)傳染病學(xué)[M] 5版北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：383-385

[4]程安春，汪銘書 最新鴨病診斷和防治[M] 成都：四川大學(xué)出版社，1995：120-129

[5]Shawky S，Sandhu T，Shivaprasad H L Pathogenicity of a low-virulence duck virus enteritis isolate with apparent immunosuppressive ability[J] Avian Diseases，2001，44（3）：590-599

[6]程安春，汪銘書，劉菲，等 PCR在鴨瘟臨床診斷和免疫及致病機(jī)理研究中的初步應(yīng)用[J] 病毒學(xué)報，2004，20（4）：364-370

[7]韓曉英 人工感染鴨瘟病毒急性病理模型的病理學(xué)發(fā)展規(guī)律及免疫熒光檢測石蠟切片中鴨瘟病毒分布規(guī)律的研究[D] 雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004

[8]許媛媛 鴨瘟的動態(tài)病理學(xué)研究和鴨CD4的克隆[D] 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010

[9]江楠，楊穎，李基棕，等 鴨腸炎病毒人工感染雛鴨的病理學(xué)動態(tài)變化[J] 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，38（17）：87-88

[10]張坤，刁有祥，程彥麗，等 鴨瘟病毒強(qiáng)毒株感染SPF鴨后動態(tài)病理組織學(xué)變化[J] 中國獸醫(yī)學(xué)報，2013，33（1）：9-15，48

[11]楊穎，夏夢，殷俊磊，等 人工感染雛鴨體內(nèi)DEV強(qiáng)毒的熒光定量PCR檢測[J] 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（6）：43-46

[12]楊穎 DEV人工感染雛鴨組織學(xué)變化及其NP基因表達(dá)規(guī)律[D] 貴陽：貴州大學(xué)，2011

[13]李成，谷守林，姜紹德，等 鴨瘟雞胚化疫苗毒的電鏡觀察[J] 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，1996（1）：50-51

[14]翟中和，丁明孝，劉鶚書，等 鴨瘟病毒的形態(tài)及其繁殖（復(fù)制）的電子顯微鏡研究[J] 病毒學(xué)集刊，1982（1）：63-69

[15]袁桂萍，程安春，汪銘書，等 鴨病毒性腸炎病毒強(qiáng)毒在人工感染鴨體內(nèi)形態(tài)結(jié)構(gòu)和發(fā)生學(xué)的電鏡觀察[J] 畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2005，36（5）：486-491

[16]Yuan G P，Cheng A C，Wang M S，et al Electron microscopic studies of the morphogenesis of duck enteritis virus[J] Avian Diseases，2005，49（1）：50-55

[17]彭光勇，樂美兆人類皰疹病毒7型體外生長特點的研究[J] 中國病毒學(xué)，2000，15（4）：323-329

[18]黃文林 分子病毒學(xué)[J] 北京：人民衛(wèi)生出版社，2002

[19]Mettenleiter T C Herpesvirus assembly and egress[J] Journal of Virology，2002，76（4）：1537-1547