建立甲醛作用SH-SH5Y細胞染毒模型的研究

唐曦瀛

（蘇州科技大學(xué)，江蘇 蘇州 215009）

建立甲醛作用SH-SH5Y細胞染毒模型的研究

唐曦瀛

（蘇州科技大學(xué)，江蘇 蘇州 215009）

建立了甲醛（FA）對SH-SH5Y的染毒模型，方法為分別檢測在2 mM、1 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0.062 5 mM下對SH-SH5Y染毒24 h、48 h、72 h后CCK-8的細胞活力，結(jié)果為甲醛（FA）在0.25 mM染毒24 h后的細胞活力在50%左右，可以作為細胞染毒模型。

甲醛（FA）；SH-SH5Y；cck-8；汽車

室內(nèi)裝修材料及家具、紡織品、汽車內(nèi)裝飾物等含有一定的甲醛，在人們使用和接觸過程中可通過呼吸和皮膚吸收等多種方式進入人體，可能產(chǎn)生神經(jīng)毒性、淋巴細胞毒性、生殖毒性。神經(jīng)母細胞瘤細胞（SH-SH5Y細胞）是一種方便的神經(jīng)模型，可制作與人類認(rèn)知障礙相關(guān)的人類、靈長類特異性轉(zhuǎn)錄網(wǎng)絡(luò)和通路。為了研究甲醛對神經(jīng)細胞的毒性作用，采用甲醛對SH-SH5Y染毒檢測細胞活力。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

主要試劑為甲醛（formaldehyde FA）分析純，由中國上海試劑總廠生產(chǎn)；DMEM、胎牛血清（FBS）、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25%的胰酶消化液，為GibcoBRL公司生產(chǎn)；人神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH-SH5Y細胞購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫（上海）；細胞活力檢測試劑盒（CCK-8）購于碧云天生物技術(shù)研究所。

主要設(shè)備為酶標(biāo)儀，Thermo Scientific Multiskan。

1.2 SH-SH5Y細胞培養(yǎng)

取SH-SH5Y細胞DMEM培養(yǎng)液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的胎牛血清）處于37℃，在5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d傳代。

1.3 細胞顯微拍片、計數(shù)與活力測定

取生長對數(shù)期的細胞用胰酶消化并計數(shù)，培養(yǎng)于96孔板中，每孔3×103；培養(yǎng)24 h后，甲醛FA濃度為2 mM、1 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0.062 5 mM，處理細胞24 h、48 h、72 h，每個濃度3個復(fù)孔。用CCK-8方法于酶標(biāo)儀450 nm測定OD值。

由于CCK-8試劑對細胞無毒性，在CCK-8方法測定OD值后，顯微鏡下拍照。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用SPSS17.0軟件對獲得的數(shù)據(jù)進行one-way ANOVA統(tǒng)計，并用Graphpad prism 5.0作圖，所有結(jié)果至少重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 SH-SH5Y細胞培養(yǎng)

取 SH-SH5Y 細胞 5×103、4×103、3×103、2×103鋪板 96孔板，培養(yǎng)12 h、24 h、48 h、72 h后，CCK-8方法于酶標(biāo)儀450 nm測定OD值。細胞活力=（A藥－A空）/（A對－A空）×100%.

當(dāng)細胞數(shù) 4×103/孔培養(yǎng) 24 h、細胞數(shù)3×103/孔培養(yǎng) 48 h、細胞數(shù)2×103/孔培養(yǎng)72 h后，細胞活力與對照組無明顯差異。

表1 甲醛對SH-SH5Y細胞細胞活力的影響

圖1 通過CCK-8，甲醛對SH-SH5Y細胞的細胞活力的影響

2.2 細胞活力測定

取生長對數(shù)期SH-SH5Y細胞培養(yǎng)于96孔板中，每孔3×103，培養(yǎng)24 h后，F(xiàn)A濃度為2 mM、1 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0.062 5 mM，處理細胞24 h、48 h、72 h，每個濃度3個復(fù)孔。同時，設(shè)對照孔（加等量細胞，不加FA）和空白孔（不加細胞、FA）。

用CCK-8方法于酶標(biāo)儀450 nm測定OD值。細胞活力計算方式如上。隨著染毒時間延長，細胞活力下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（*p＜0.05，**p＜0.01）。顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，甲醛（FA）＞1 mM，染毒24 h后，細胞明顯變形；甲醛（FA）為0.5 mM，染毒24 h后，出現(xiàn)個別細胞未變形的情況；甲醛（FA）＜0.25 mM，染毒24 h后，細胞形態(tài)基本正常。

甲醛對SH-SH5Y細胞細胞活力的影響如表1所示。通過CCK-8，甲醛對SH-SH5Y細胞的細胞活力的影響如圖1所示。

O643

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2017.20.055

2095－6835（2017）20－0055－03