常山胡柚不同部位中檸檬苦素的含量分析*

劉曉政 嚴曉麗 胡 丹 施堂紅 占元毅

（浙江省果品質(zhì)量檢驗中心，浙江常山 324200）

常山胡柚不同部位中檸檬苦素的含量分析*

劉曉政**嚴曉麗 胡 丹 施堂紅 占元毅

（浙江省果品質(zhì)量檢驗中心，浙江常山 324200）

常山胡柚，又名金柚，于20世紀70年代末期被發(fā)現(xiàn)，1991年被東北林學(xué)院張韻冰教授正式命名為常山胡柚，以產(chǎn)地命名，具有鮮明的地域特色。常山胡柚果實與常見的柑桔類果實不同，甜度不如砂糖橘，香味不如臍橙，具有清涼祛火、平喘化痰、生津止咳、健胃壯身、降血脂、抗便秘、抗衰老等特殊的藥理功效。當?shù)罔洲r(nóng)形容胡柚是“有點苦、確實涼”。常山胡柚“有點苦”的主要原因是胡柚中含有的檸檬苦素類化合物。

檸檬苦素類化合物是存在于蕓香科和楝科植物中一類三萜系化合物，是具有高度生物活性的植物次生代謝產(chǎn)物。柑桔屬蕓香科植物，是天然檸檬苦素化合物的主要來源。最新研究表明，檸檬苦素類化合物在抗癌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇水平、防止動脈粥樣硬化和除蟲方面具有明顯效果，被認為是理想的功能食品添加物。美國、日本已經(jīng)報道了檸檬苦素類物質(zhì)作為功能性成分在食品和飲料制作中的應(yīng)用，因而具有植物天然活性物質(zhì)的檸檬苦素類物質(zhì)具有廣闊的應(yīng)用前景。

本文對常山胡柚不同部位中的檸檬苦素含量進行了分析，確定常山胡柚不同部位中檸檬苦素含量的分布規(guī)律，為常山胡柚深加工中胡柚的脫苦和檸檬苦素的提取提供理論依據(jù)。

1 試驗材料

1.1 材料與試劑

常山胡柚，常山縣俊優(yōu)胡柚專業(yè)合作社、常山縣連福胡柚專業(yè)合作社和常山縣芙蓉旺水果專業(yè)合作社的胡柚鮮果。

胡柚樣品的制備，分別取胡柚皮、海綿層、囊衣，置于45℃烘箱內(nèi)，烘10 h后粉碎，放入密封塑料袋中，置于干燥器內(nèi)保存。

檸檬苦素標準品，純度98.0%，上海同田生物技術(shù)有限公司；甲醇、乙腈，均為色譜純；乙酸銨，分析純；其他物質(zhì)均為分析純；水為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

ProStar230液相色譜儀，美國瓦里安公司；PL403電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ-500DE超聲波清洗機，昆山舒美超聲儀器有限公司；電熱鼓風干燥箱，上海森信實驗儀器有限公司；R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，瑞士布奇公司；數(shù)顯水浴鍋，上海銀屏儀器儀表有限公司；超純水器，杭州永潔達凈化科技有限公司；循環(huán)水式真空泵，河南鞏義英峪予華儀器廠；UV-2800AH紫外可見分光光度計，尤尼柯（上海）儀器有限公司；孔徑0.45 μm針頭過濾器，安捷倫科技有限公司；DKU-250A電熱恒溫油槽，上海森信實驗儀器有限公司；PHS-3C酸度計，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；FP6410火焰光度計，上海欣益儀器儀表有限公司。

2 試驗方法

2.1 不同胡柚基地土壤基本肥力的測定

采集了常山縣3個不同區(qū)域的胡柚基地周邊的39個土壤樣本，自然風干，根據(jù)Y/T 53—1987土壤全氮測定法（半微量開氏法）；NY/T 1121.2— 2006土壤檢測第2部分：土壤pH的測定；NY/T 1121.6—2006土壤檢測第6部分：土壤有機質(zhì)的測定；NY/T 1121.7-2006土壤檢測第7部分：酸性土壤有效磷的測定；NY/T 889-2004土壤速效鉀和緩效鉀含量的測定的方法對土壤中全氮、pH值、有機質(zhì)、速效磷及速效鉀的測定，了解土壤的基本肥力情況。

2.2 檸檬苦素提取方法

準確稱取2.000 g樣品置于三角瓶中，加入50 mL純凈水，調(diào)節(jié)提取溫度80℃，提取時間90 min，樣品提取后，提取液用濾紙過濾，將濾液真空干燥至干，立即加入2 mL乙腈洗脫溶解，經(jīng)針頭過濾器過濾后待測。在同樣的條件下，采用超聲波輔助提取。

2.3 檸檬苦素的測定方法

色譜柱：ZORBAX SB-C18StableBond Analytical 4.6×250 mm 5-Micron；進樣量：10 μL；流動相乙腈∶水為45∶55；紫外檢測器波長：210 nm；流動相流速：1.0 mL/min。以標樣的保留時間和峰面積進行定性、定量計算檸檬苦素含量Y。

式中：m1——提取物中檸檬苦素含量，mg；

m0——胡柚樣品重量，g。

3 結(jié)果與分析

3.1 常山縣不同區(qū)域胡柚基地土壤的基本肥力

常山縣胡柚種植面積達7.4×103hm2，本次研究選取了常山東案鄉(xiāng)、青石鎮(zhèn)和球川鎮(zhèn)3個不同的胡柚種植基地，這3個胡柚基地均為多年豐產(chǎn)果園。在3個基地周邊選取了具有代表性的土壤樣本39個，對土壤中的全氮、速效磷、速效鉀、pH值及有機質(zhì)進行測定。所取土壤為胡柚開始結(jié)果實時的土壤樣本，整個胡柚生長期未施肥。測定結(jié)果如下頁表1、表2、表3。

由表1、表2、表3可知，3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)胡柚生長基地土壤中速效磷、速效鉀的含量差異較大，其他指標差異不大，東案鄉(xiāng)胡柚生長基地土壤中速效磷、速效鉀的含量明顯高于其他2個鎮(zhèn)。

3.2 檸檬苦素的檢測方法

檸檬苦素的檢測質(zhì)量濃度在50μg/mL～800μg/mL范圍內(nèi)，按選定的色譜條件進行HPLC分析，以保留時間定性，以峰面積對標準品的質(zhì)量濃度繪制工作曲線。結(jié)果表明，在該濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，峰面積與質(zhì)量濃度的線性回歸方程為Y=109 741X-607 677，相關(guān)系數(shù) r=0.999 6。當信噪比S/N=3時，檸檬苦素的檢測限為0.028 μg/g。精密度好，穩(wěn)定性好，加標回收率在90%以上。

表1 青石鎮(zhèn)胡柚基地周邊范圍內(nèi)土壤基本肥力

表2 東案鄉(xiāng)胡柚基地周邊范圍內(nèi)土壤基本肥力

表3 球川鎮(zhèn)胡柚基地周邊范圍土壤基本肥力

3.3 不同胡柚基地的胡柚樣品中檸檬苦素含量

本研究選取3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)常山胡柚基地的3個胡柚專業(yè)合作社的胡柚樣品。因為胡柚種子量少，不利于胡柚深加工規(guī)模發(fā)展，所以分別取胡柚皮、海綿層、囊衣進行研究。以水作為提取溶劑，在一定的提取條件下，得到的胡柚不同部位的檸檬苦素含量見表4。

表4 胡柚不同部位的檸檬苦素含量（水提?。?/p>

由表4可知，不同胡柚基地的常山胡柚不同部位中檸檬苦素含量變化規(guī)律基本相同，胡柚皮中最多，其次是囊衣，最后是海綿層。

3.3.1 以水作為提取溶劑進行提取

以水作為提取溶劑，提取溫度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取時間90 min，胡柚皮中檸檬苦素含量可達2.68 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.13 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達0.88 mg/g。

3.3.2 以水作為提取溶劑超聲提取

以水作為提取溶劑超聲提取，提取溫度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取時間90min，胡柚皮中檸檬苦素含量可達3.01 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.37mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達1.12mg/g。

表5 胡柚不同部位的檸檬苦素含量（超聲水提?。?/p>

4 結(jié)論

本研究主要是為常山胡柚中檸檬苦素物質(zhì)的功能性應(yīng)用及胡柚深加工行業(yè)中的脫苦提供理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果表明，常山胡柚不同部位中檸檬苦素的含量也不同，胡柚皮中含量最高，囊衣次之，海綿層中含量最低。土壤中的速效磷、速效鉀的含量對胡柚中檸檬苦素的含量有一定的影響，速效磷、速效鉀含量高的土壤，胡柚中檸檬苦素的含量相對較低。以水作為提取溶劑，提取溫度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取時間90 min，胡柚皮中檸檬苦素含量可達2.68 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.13 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達0.88 mg/g。超聲輔助提取，胡柚皮中檸檬苦素含量可達3.01 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.37 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達1.12 mg/g。

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Study on content of limonin in different tissues of citrus changshan-huyou*

LIU Xiaozheng**YAN XiaoliHU Dan SHI Tanghong ZHAN Yuanyi
（Testing center for fruit quality of Zhejiang province，Zhejiang Changshan 324200，China）

利用高效液相色譜法檢測常山胡柚中檸檬苦素的含量，并對常山3個不同胡柚基地的胡柚不同部位中檸檬苦素的含量進行了對比分析。結(jié)果表明，不同基地的常山胡柚不同部位中檸檬苦素含量變化規(guī)律基本相同，其中胡柚皮中含量最多，其次是囊衣，最后是海綿層。用水作為提取溶劑，提取溫度80℃，料液比1∶25(g∶mL)，提取時間90 min，胡柚皮中檸檬苦素含量達2.68 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.13 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達0.88 mg/g。超聲輔助提取時，含量依次為3.01 mg/g、1.37 mg/g、1.12 mg/g。

常山胡柚；檸檬苦素；提取；檢測

Todevelopasensitivehighperformanceliquidchromatography（HPLC）methodtodeterminelimoninin Citrus chang shan-huyou.Citrus changshan-huyou of three bases in changshan were selected.Results showed:the changelawoflimonincontentofcitruschangshan-huyouindifferentbaseswasthesame.Thelimonincontentofcitrus chang shan-huyou peel was the highest and the limonin content of interlayer took second place,the limonin content of cystmembranewasleast.Theoptimumconditionsofwaterextractionwereachievedasfollows:soakingtemperatureas 80℃,the ratio of materials to solution as 1∶25(g∶mL),extraction time as 90 min.The limonin content of citrus chang shan-huyoupeelwas2.68mg/g.Thelimonincontentofcitruschangshan-huyouinterlayerwas1.13mg/g.Thelimonin content of citrus chang shan-huyou cyst membrane was 0.88 mg/g.The limonin content with ultrasonic extraction underthesameconditionwas3.01mg/ginpeel,1.37mg/gininterlayerand1.12mg/gincystmembrane.

citrus changshan-huyou peel；limonin；extraction；determine

TS255.7

A

1673-6044（2017）02-0054-04

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.02.015

國家質(zhì)檢總局項目，（2012QK317）。

**劉曉政，女，1982年出生，2009年畢業(yè)于浙江工商大學(xué)食品科學(xué)專業(yè)，碩士，工程師。

2017-03-19