液相色譜儀的校準與管理維護

吳文熙

摘要：液相色譜儀作為一種高精密儀器，能夠?qū)ξ镔|(zhì)進行有效分離，進而對其進行檢驗、分析和鑒定。在檢測工作中，為保障儀器測量準確度和靈敏度的影響，需要不斷完善其日常維護工作及計量的校準方法?；诖耍恼箩槍σ合嗌V儀校準項目與管理維護的方法展開探究，供同行參考。

關(guān)鍵詞：液相色譜儀；校準；管理維護

液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器。液相色譜儀在不同行業(yè)和領(lǐng)域中的應(yīng)用體現(xiàn)出了較多的優(yōu)勢，其不會對正常質(zhì)量分析方面的工作產(chǎn)生影響，并且可以以較高的速率完成分析工作，使檢測樣本不同物質(zhì)分析工作更加到位。然而液相色譜儀波長準確度是液相色譜儀的一項重要的性能指標，因此計量機構(gòu)有必要對現(xiàn)有的波長準確度檢定方法進行修補。

1.校準項目分析與校準方法分析

1.1分辨力校準分析

在固定好液相色譜儀（如圖1所示）后，要保證儀器的穩(wěn)定，然后執(zhí)行儀器自動調(diào)諧命令，命令啟動，向儀器內(nèi)注入調(diào)諧液，直至調(diào)諧通過后，再打印調(diào)諧報告，對報告中3到6個主要離子峰廢半峰寬進行考察，將半峰寬呈現(xiàn)出的最大值作為儀器的分辨力，計為W1/2?！鱉=Mn測量-Mn理論，其中等式中的Mn測量表示的是第n個粒子在進行3次測量后得出的平均值，計為u；Mn理論表示的是第n個離子的理論值，計為u。

1.2質(zhì)量范圍校準分析

根據(jù)調(diào)諧操作的條件，必須按照校準要求注入符合標準的調(diào)諧液到儀器中，再進行調(diào)諧和校準操作。在規(guī)定范圍內(nèi)的質(zhì)荷比中，如可以設(shè)定為m/z50—2000，在規(guī)定范圍內(nèi)選擇SCAN模式對全范圍記性掃描，通過分辨力和質(zhì)量準確性來滿足計量性能的要求，并將要求的最低和最高質(zhì)荷比范圍作為質(zhì)量范圍。

1.3信噪比校準分析

在調(diào)諧后會確定一個最佳參數(shù)，這個參數(shù)就是校準參數(shù)，利用校準參數(shù)選擇C18或者性能相同的色譜柱。ESI正離子，在其中注入10皮克的利血平，并啟動SIM或者MRM模式，從中提取m/z=609的特征離子或者m/z=195的子離子，根據(jù)等式可以計算出信噪比也就是S/N=H/H噪聲，在這個等式中，H表示的提取離子顯示出的峰高；H噪聲表示的是基線的噪聲。然后，在ESI負離子中注入100皮克的氯霉素，并啟動SIM或MRM模式，從中提取m/z=321的特征離子或者m/z=152的子離子，根據(jù)信噪比計算等式計算出ESI正離子的信噪比。

APCI正離子，在其中注入10皮克的利血平，并啟動SIM或MRM模式，從中提取m/z=609的特征離子或者m/z=195的子離子，并帶入到信噪比計算公式中計算出APCI正離子信噪比。

1.4整機定量分析以及定性重復(fù)性分析

根據(jù)分析，要按照信噪比的校準條件反復(fù)進行6次測量，并分別記錄質(zhì)量色譜圖中對應(yīng)峰面積及保存時間，并根據(jù)下列公式，對峰面積的校準偏差進行計算定量重復(fù)，從保存是兩件計算出相對標準偏差計算定性的重復(fù)性。計算公式為：RSD=××100%，其中等式中RSD表示的相對標準偏差；xn表示的是第n次后測量峰面積及保存時間；x表示的是6次測量峰面積及保存時間的算術(shù)平均值。

2.管理措施與維護措施分析

2.1流動相管理與維護措施分析

一是流動相必須在0.45微米的微孔濾膜中進行2到3次的真空抽濾，再利用超聲儀進行超聲45分鐘到60分鐘，然后才能在流動相進行使用。

二是甲醇等有機溶劑必須保證為色譜純，其中可用堿或酸對流動相的pH值進行調(diào)節(jié)，但范圍要控制在2-7.5內(nèi)。其中水必須使用去離子水，使用期限不能超過2天，逾期后要進行重新配制。

三是流動相的瓶口不能用密封帶封死，要保證內(nèi)外壓力平衡。不能隨便更換流動相的借口，如果棕瓶固定為誰，那么白瓶就要固定為甲醇，流動相的流速要控制在每分鐘3.0mL范圍內(nèi)。

四是流動相中禁用以下物品：三氯苯、四氫呋喃、氯仿、亞甲基氯、甲苯；而且要慎重使用以下物品：乙醚、丙酮、四氯化碳、異丙醚等，避免這些化學物品腐蝕柱塞密封圈。

五是當流動相性質(zhì)為緩沖鹽時，緩沖溶液在與有機溶劑發(fā)生轉(zhuǎn)換前要用5甲醇對泵設(shè)備記性清洗，防止鹽類物質(zhì)對機相中結(jié)晶的損壞和泵設(shè)備組件的損壞。緩沖溶液的濃度要低于每升0.5摩爾，盡量不要超過色譜柱的酸堿性范圍。為了防止腐蝕流路，CI—的濃度要控制在每升0.1摩爾以下。另外，高濃度的緩沖鹽會降低活塞和密封墊的使用壽命，所以在長時間使用高濃度緩沖鹽時，要用10異丙醇溶液對泵設(shè)備背面的結(jié)晶物質(zhì)進行沖洗，最后再用0.45微米的異丙醇濾膜進行2到3次反復(fù)過濾。

六是當泵壓力超過6000psi上限范圍時，要檢查泵頭和過濾白頭及保護柱芯是否有損壞。

2.2排氣泡管理與維護措施分析

一是快速清洗閥不宜擰的過松，一般擰2圈左右比較適應(yīng)，過松會導致流動相從清洗閥部位快速通過流進泵頭，從而引起設(shè)備報警。

二是在使用快速清洗閥時，不能對幾個通道同時按比例進行排氣泡，要一個一個通道進行，否則會造成設(shè)備損壞。

2.3自動進樣器管理與維護分析

在對自動進樣器進行養(yǎng)護時，可以每天按照甲醇：水=1：1的比例配制溶液洗針，并保證在洗針前要檢查一下洗針瓶中是否有50甲醇洗液。

2.4樣品處理分析

一定要保證測定樣品在流動相中呈易溶特質(zhì)，否非在會結(jié)晶造成色譜柱堵塞。最好使用與流動相能夠溶解的樣品，而且樣品或標準溶液在進樣處理前，必須使用0.45微米的濾膜進行過濾，去除其中的微粒雜志物質(zhì)，樣品中不能含有強堿性、強酸性類物質(zhì)，但可以利用預(yù)處理柱去除其中具有較強極性或存在的不可逆吸附物質(zhì)。

2.5色譜柱管理與維護分析

使用儀器自帶的色譜柱時，應(yīng)及時的將換下的色譜柱應(yīng)物質(zhì)極性密封。而且用完后要將原來使用的色譜柱安裝好。換色譜柱時必須在有流動相流出的情況下進行，防止空氣進入到色譜柱。而且液相色譜儀的使用時間不宜過長，而且每個泵通道以及整體的流路一定要用甲醇進行沖洗后再保存，防止結(jié)晶對儀器造成污染。

2.6檢測器管理與維護分析

如果檢測的紫外或可見燈長期處于打開狀態(tài)，那么要保證溶液要劉晶檢測池、若不需要做樣，可以將燈關(guān)閉。一般檢測器的登要在有溶液連續(xù)流動后的幾分鐘才能打開，否則流動池中會產(chǎn)生氣泡，將無法通過校準。檢測氣的鎢等不要經(jīng)常進行開關(guān)，這樣會降低燈的使用壽命，如果經(jīng)常使用儀器，可隔幾天進行開關(guān)一次。檢測池清洗時要用100異丙醇沖洗整個流路，如果不能進行可以用10或者5的稀硝酸沖洗45分鐘到60分鐘，然后用清水沖洗干凈。

3.結(jié)束語

總之，液相色譜儀的科學管理和正確使用維護，是獲得良好色譜分離效果和延長儀器使用壽命的前提和基礎(chǔ)。所以在日常使用中，每位使用人員都要在實踐中不斷總結(jié)。既要制定嚴謹科學的檢定校準方法又要盡量滿足客戶的需求，使檢定校準方法向著快捷、實用、科學的方向發(fā)展。

參考文獻：

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