外周血異型淋巴細(xì)胞及EBV DNA聯(lián)合檢測(cè)在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥中的臨床應(yīng)用價(jià)值

湯俊峰，余喜然，鄭水娥，朱虹

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 三明36500)

外周血異型淋巴細(xì)胞及EBV DNA聯(lián)合檢測(cè)在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥中的臨床應(yīng)用價(jià)值

湯俊峰，余喜然，鄭水娥，朱虹

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 三明36500)

目的 研究外周血異型淋巴細(xì)胞及EBV DNA聯(lián)合檢測(cè)在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥患者中臨床診斷價(jià)值。方法從2015年8月-2017年1月，選擇我院兒科208例發(fā)熱患者，其中確診傳染性單核細(xì)胞增多癥42例作為觀察組，其他發(fā)熱病人166例對(duì)照組。對(duì)兩組使用外周血異型淋巴細(xì)胞及EBV DNA聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)比兩組不同檢測(cè)方式的效果。結(jié)果 觀察組的單核細(xì)胞%（M%）以及異型淋巴細(xì)胞%、EBV DNA顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。各項(xiàng)指標(biāo)的靈敏度：M%＞異型淋巴細(xì)胞%＞EBV DNA，特異度：EBV DNA＞異型淋巴細(xì)胞%＞M%。聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度以及特異度均大于各個(gè)單項(xiàng)檢測(cè)。結(jié)論 外周血異型淋巴細(xì)胞及EBV DNA聯(lián)合檢測(cè)在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥患者具有十分重要的意義，靈敏度以及特異度較高。

外周血異型淋巴細(xì)胞；EBV DNA；傳染性單核細(xì)胞增多癥

小兒傳染性單核細(xì)胞增多癥(infectious mononucleosis)，是一種單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)急性增生性傳染病，主要由EBV病毒引起的，以侵犯淋巴系統(tǒng)為主的急性感染性疾病，患者的病程常具有一定的自限性[1-3]。臨床表現(xiàn)變化多端，除了臨床上常見有發(fā)熱、咽峽炎、淋巴結(jié)及肝脾腫大外，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)可發(fā)現(xiàn)外周血液單核細(xì)胞明顯增多，出現(xiàn)異常淋巴細(xì)胞，嗜異性凝集試驗(yàn)以及抗EBV病毒的抗體陽性。因此，實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)傳染性單核細(xì)胞增多癥的診斷十分重要。鑒于此，本文特此研究外周血異型淋巴細(xì)胞及EBV DNA聯(lián)合檢測(cè)在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥中臨床價(jià)值，得到了一些結(jié)論，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從2015年8月-2017年1月，選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明市第一醫(yī)院兒科208例發(fā)熱患者作為研究對(duì)象。其中確診傳染性單核細(xì)胞增多癥42例作為觀察組，符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)關(guān)于發(fā)熱、傳染性單核細(xì)胞增多癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；排除先天畸形、嚴(yán)重臟器功能不全及惡性腫瘤者；排除臨床資料不完整及不能配合研究者。其中男性29例，女性13例；年齡在5～16歲之間，平均年齡為（8.1±3.2）歲。其他發(fā)熱病人166例作為對(duì)照組。其中男性101例，女性65例；年齡在6～15歲；平均年齡為（7.9±3.2）歲。具體診斷為：上呼吸道感染93例，支氣管肺炎50例，其他診斷共23例。兩組患者性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并均簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)方法單核細(xì)胞百分比檢測(cè)在日本Sysmex1000i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀器上進(jìn)行，使用抗凝管 EDTA-K2，對(duì)患者采取血量 1.5～2.5ml，將其顛倒混合搖勻3～5次，10min到1h之間將檢測(cè)完成。采用配套的試劑以及原廠家質(zhì)控品，所有操作按照規(guī)范要求進(jìn)行。EBV DNA載量檢測(cè)選取實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（RT-PCR），具體操作為：先抽取患兒靜脈血4ml置于枸櫞酸鈉抗凝管中，應(yīng)用Taq-Man熒光標(biāo)記探針基因擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，探針序列為 FPEEBV5’-XC-CTCGGA-CAGCTCCTAAGAAGG-CACC-Y-3’，26bp。 PCR 擴(kuò)增條件：將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)儀DA7600，按下列條件擴(kuò)增：取PCR反應(yīng)管若干，分別加入處理后的樣品上清液2μl，8000r/min離心數(shù)秒放入熒光定量PCR檢測(cè)儀樣品槽。按對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品、陽性定量參考品及待測(cè)標(biāo)本。在93℃環(huán)境下進(jìn)行預(yù)變性2min后，再在93℃環(huán)境變性45s后轉(zhuǎn)入55℃環(huán)境下變性60s，往復(fù)10個(gè)循環(huán)，最后在93℃環(huán)境變性30s后轉(zhuǎn)55℃下變性45s，往復(fù)30個(gè)循環(huán)。試劑選購中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，具體操作按說明書進(jìn)行。采患兒末梢血推片進(jìn)行端氏染色，在高倍顯微鏡下計(jì)數(shù)異常淋巴細(xì)胞及比例。

1.3 觀察指標(biāo)比較兩組的檢測(cè)結(jié)果，以及各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目在診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥中的價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理通過SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組檢測(cè)結(jié)果比較結(jié)果表明，觀察組的EBV DNA(copies/ml)、M%以及異型淋巴細(xì)胞%顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見表1。

表1 兩組檢測(cè)結(jié)果比較（例，x±s）

2.2 各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比各項(xiàng)指標(biāo)的靈敏度：M%＞異型淋巴細(xì)胞%＞EBV DNA(copies/ml)，特異度：EBV DNA(copies/ml)＞異型淋巴細(xì)胞%＞M%，陽性預(yù)測(cè)值：M%＞異型淋巴細(xì)胞%＞EBV DNA(copies/ml)，陰性預(yù)測(cè)值：EBV DNA(copies/ml)＞異型淋巴細(xì)胞%＞M%。聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度以及特異度均大于各個(gè)單項(xiàng)檢測(cè)。

表2 各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥的價(jià)值對(duì)比（%）

3 討論

傳染性單核細(xì)胞增多癥是由EBV病毒導(dǎo)致的一種急性或者是亞急性的淋巴細(xì)胞良性增生的傳染病癥，常發(fā)生在兒童時(shí)期以及青少年時(shí)期，在成年人、老年群體以及嬰兒中較為少見，成為兒科的常見病癥。此病癥的臨床癥狀十分復(fù)雜，特征缺乏典型性，少數(shù)患者會(huì)發(fā)展為EBV病毒相關(guān)性質(zhì)的嗜血細(xì)胞綜合征，或者是自發(fā)性的脾破裂，進(jìn)而威脅患者的生命[5，6]。在醫(yī)院對(duì)患者進(jìn)行檢查時(shí)，診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥必不可缺的輔助方式，每項(xiàng)都有方法學(xué)的限制，聯(lián)合檢測(cè)是現(xiàn)如今臨床對(duì)病癥進(jìn)行診斷的發(fā)展趨勢(shì)。

本文結(jié)果顯示，觀察組的EBV DNA、M%以及異型淋巴細(xì)胞%顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。這是因?yàn)榛颊咴诔霈F(xiàn)感染之后，自身機(jī)體的淋巴細(xì)胞過度上升導(dǎo)致的。從觀察結(jié)果表明，M%指標(biāo)水平在靈敏度上優(yōu)于其他的單項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)，這說明M%對(duì)于傳染性單核細(xì)胞增多癥檢測(cè)具有十分重要的意義[7-9]。單核細(xì)胞的百分比上升是因?yàn)楫愋土馨图?xì)胞的增加導(dǎo)致的，分析儀器將異型淋巴細(xì)胞錯(cuò)誤認(rèn)成了單核細(xì)胞，因此導(dǎo)致單核細(xì)胞的數(shù)量上升[10]。除此之外，單核細(xì)胞的上升伴隨白細(xì)胞的數(shù)量上升，要防止發(fā)生白血病的可能性。因此要實(shí)施血涂片對(duì)細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。異型淋巴細(xì)胞成為診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥較為可靠的指標(biāo)[11]。異型淋巴細(xì)胞一般情況下，在發(fā)病之后的第3d發(fā)生，在第一周漸漸加多，能夠達(dá)到10%以上，在第2～3周最多可以達(dá)到40%以上，之后漸漸減小，持續(xù)在5～7周。需要重視的是，異型淋巴細(xì)胞在一些其他的病毒感染病癥中也會(huì)找到，例如巨細(xì)胞病毒等，因此需要其他項(xiàng)目來輔助小兒傳染性單核細(xì)胞增多癥的診斷[12，13]。

隨著實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用的越來越成熟，開展EBV DNA的定量檢測(cè)成為越來越多臨床實(shí)驗(yàn)室的選擇。通過我們的實(shí)驗(yàn)可以看出觀察組與對(duì)照的EBV DNA的表達(dá)量有明顯的差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有較高的特異度。EBV DNA的定量檢測(cè)作為EBV感染的分子生物學(xué)標(biāo)記，有快速、簡便、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，且PCR技術(shù)可以高效擴(kuò)增，具有高特異性和高精確性的優(yōu)點(diǎn)，這在臨床診療中，可以幫助臨床醫(yī)師迅速確診EBV病毒感染的患兒，并使其抗病毒療效的判斷可以很客觀地從病毒核酸的量上反映出來。同時(shí)，PCR用于病原體感染的血液篩查，可以檢出抗原抗體尚未出現(xiàn)的“窗口期”內(nèi)的感染，從而避免經(jīng)輸血引發(fā)的感染性疾病的傳播。因此，熒光定量PCR技術(shù)對(duì)于急性發(fā)熱患兒是否為EBV感染的診斷和治療療效的觀察都具有重要的指導(dǎo)意義[14，15]。

從表2中可以看出聯(lián)合檢測(cè)能明顯提高檢測(cè)的靈敏度與特異度。因此，外周血異型淋巴細(xì)胞及EBV DNA聯(lián)合檢測(cè)在傳染性單核細(xì)胞增多癥患者具有十分重要的意義，值得臨床推薦使用。

[1]謝靜，王煥玲，邱志峰，等.成人傳染性單核細(xì)胞增多癥和慢性活動(dòng)性EBV病毒感染外周血淋巴細(xì)胞亞群分析 [J].中華內(nèi)科雜志，2016，55(6)：455-459.

[2]于嘉，任立紅.傳染性單核細(xì)胞增多癥研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2016，39(5)：475-478.

[3]鄒瑩波，姜杰，黃波，等.傳染性單核細(xì)胞增多癥并發(fā)脾梗死一例[J].中國小兒急救醫(yī)學(xué)，2016，23(5)：359-360.

[4]謝正德．兒童EBV病毒傳染性單核細(xì)胞增多癥臨床特征及診斷標(biāo)準(zhǔn)[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2007，22(22)：1759.

[5]Ono S，Kobayashi T，Nishio K.A Case of Acute Acalculous Cholecystitis During Infectious Mononucleosis Caused by the Epstein-Barr Virus in a YoungWoman[J].Kansenshogaku Zasshi，2016，90(3)：330-335.

[6]Medovic R，Igrutinovic Z，Radojevic-Marjanovic R，et al.Clinical andlaboratorydifferencesbetweenEpstein-Barrandcytomegalovirus infectiousmononucleosis in children[J].Srpski Arhiv Za Celokupno Lekarstvo，2016，144(1)：56-62.

[7]劉雪萍，王愛蘭，李佳靜，等.EBV病毒感染性兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥80例臨床分析 [J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2016，45(5)：532-533.

[8]肖波，毛金娥，陳萬新，等.外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查與EBV-DNA定量分析在小兒傳染性單核細(xì)胞增多癥早期診斷中的價(jià)值[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，31(3)：114-116.

[9]方莉萍，邵麗佳，吳俊琪，等.傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒多個(gè)臨床檢測(cè)指標(biāo)的臨床意義 [J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育，2016，14(2)：193-194.

[10]詹燕婷.探討全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀Sysmex XT-1800i檢測(cè)中單核細(xì)胞假性增高的原因[J].實(shí)踐與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，32（6）：752-754.

[11]王四利，鐘天英，敖繼紅，等.傳染性單核細(xì)胞增多癥外周血淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察[J].實(shí)踐與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28（5）：521.

[12]劉瑩，曹軍皓，容東寧，孫潔.傳染性單核細(xì)胞增多癥異型淋巴細(xì)胞數(shù)量與 EBV病毒濃度的關(guān)系 [J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2008，24（20）3582-3583.

[13]吳為強(qiáng)，周敏榆，陸丹倩，彭明，等.白細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合外周血異型淋巴細(xì)胞檢查在嬰幼兒肺炎診斷中的應(yīng)用[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(20)：2839-2840

[14]閆永彬，孫曉旭，張慧娟，等.四妙清瘟敗毒飲治療兒童熱毒熾盛型傳染性單核細(xì)胞增多癥臨床研究 [J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，31(4)：599-602.

[15]張苗，張潔，湯紹輝，等.傳染性單核細(xì)胞增多癥合并銅綠假單胞桿菌扁桃體炎1例[J].廣東醫(yī)學(xué)，2016，37(9)：1423-1424.

R446.11+1，Q523，R512.7

A

1674-1129(2017)05-0722-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.031

2017-05-09；

2017-08-08)