不同分離時間和保存方法對胃泌素-17測定的影響

劉志敏，周海青，李靜

(衡陽市中心醫(yī)院檢驗科，湖南 衡陽 421001)

不同分離時間和保存方法對胃泌素-17測定的影響

劉志敏，周海青，李靜

(衡陽市中心醫(yī)院檢驗科，湖南 衡陽 421001)

目的 探討血液采集后在不同的分離時間和不同的保存方法下對檢測胃泌素-17測定的影響。方法 收集30例健康體檢人員的血液，分別于即刻、2h、4h、8h、24h分離血清，采用ELISA雙抗體夾心法定量檢測胃泌素-17的含量。即刻分離的血清和添加穩(wěn)定劑的血清用Ep管分裝后存放于室溫、4℃、-20℃、-70℃環(huán)境下，分別連續(xù)7d進(jìn)行胃泌素-17的檢測，各組數(shù)據(jù)均與即刻分離血清組的結(jié)果進(jìn)行比較，P＞0.05為胃泌素-17穩(wěn)定的時間。結(jié)果 與即刻檢測結(jié)果比較，2h、4h、8h、24h分離血清檢測的結(jié)果有明顯的下降趨勢，下降百分率分別為：17.03%、32.53%、52.06%、64.52%。分離血清組在室溫和4℃保存條件下有下降的趨勢，-20℃、-70℃保存和添加穩(wěn)定劑組4d內(nèi)的結(jié)果未見明顯的變化（P＞0.05）。結(jié)論 臨床采集的標(biāo)本應(yīng)盡早分離血清，分離后的標(biāo)本適宜低溫保存，添加穩(wěn)定劑、-20℃和-70℃環(huán)境下保存是維持胃泌素-17穩(wěn)定的重要措施。

胃泌素-17；血液標(biāo)本；分離時間；保存方法；穩(wěn)定劑

胃泌素-17是由胃竇、胃體、十二指腸G細(xì)胞分泌的多肽類激素，具有促進(jìn)胃酸分泌、胃竇收縮和胃腸道黏膜再生等生物學(xué)作用[1]。高胃泌素血癥是胃癌的高危因素，參與癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過程，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖復(fù)制和浸潤轉(zhuǎn)移[2]。2015年1月上海國際研討會 “中國早期胃癌篩查方案”’中把胃泌素-17作為重要的篩查指標(biāo)之一，聯(lián)合胃蛋白酶原Ⅰ(Pepsinogen Ⅰ，PGⅠ)、PGⅡ、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)-IgG檢測對胃腸道疾病診斷具有很重要的意義[3-6]。目前，臨床上胃泌素-17的檢測方法比較成熟，檢測中的質(zhì)量能夠得到保障。然而筆者發(fā)現(xiàn)，分析前標(biāo)本分離時間對結(jié)果影響較大，但有關(guān)標(biāo)本分離時間和保存方法對胃泌素-17結(jié)果影響的報道極少，為了探討這一問題，我們實驗室收集血液標(biāo)本在不同的分離時間、分離后血清標(biāo)本保存溫度和時間對胃泌素-17檢測結(jié)果的影響進(jìn)行了綜合分析并得出了標(biāo)本最佳分離時間和保存條件，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象選擇2016年8月在衡陽市中心醫(yī)院參加體檢的30例志愿者為檢測對象，其中男、女各15例，年齡25～50歲，平均37歲，無腹痛、胃部不適病史，近期未服用質(zhì)子泵抑制劑等胃腸道類藥物。

1.2 儀器和試劑Tecan Infinite 200 Pro多功能酶標(biāo)儀，胃泌素-17 ELISA檢測試劑盒（芬蘭BIOHIT OYJ公司，批號：20160212），二甲亞砜穩(wěn)定劑（芬蘭BIOHITOYJ公司，批號：23GB1602）。

1.3 研究方法受試對象禁食過夜后一次性真空管采集靜脈血每人2管，每管不低于5ml，其中1管抽血后立刻用EP管平均分裝為4支，分別在2h、4h、8h、24h再分離血清。 另 1管在30min內(nèi)分離血清，取50μl血清采用ELISA雙抗體夾心法定量檢測胃泌素-17的含量作為對照，剩余血清分為2組，每組用EP管分裝為18支，其中穩(wěn)定劑組按照1：10添加二甲亞砜。所有分裝的標(biāo)本分別放置在室溫、4℃、-20℃和-70℃環(huán)境中，嚴(yán)格按照試劑說明書分批進(jìn)行檢測。檢測完成后，統(tǒng)計不同分離時間、分離后保存溫度和時間下的檢測結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，計量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，即刻與2～24h和7d之間的濃度比較采用t檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)本不同分離時間胃泌素-17結(jié)果比較2h后開始分離的血液標(biāo)本與即刻分離的血清標(biāo)本胃泌素-17結(jié)果比較有明顯的差異（P＜0.05）。見表1。

2.2 30份標(biāo)本不同保存方法胃泌素-17結(jié)果比較見表2。

3 討論

1977年，胃泌素檢測技術(shù)獲諾貝爾獎，芬蘭學(xué)者Sipponen首創(chuàng)胃泌素-17檢測方法。該方法具有無創(chuàng)、無痛、安全、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。胃泌素-17是胃黏膜“血清學(xué)活檢”內(nèi)容之一，在胃腸道腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[7]。但臨床上影響血清胃泌素-17的因素較多，除性別、年齡、病變部位、質(zhì)子泵藥物等因素外，實驗室檢測方法對結(jié)果影響不容忽視[8]。70%以上的錯誤結(jié)果來源于分析前[9，10]，血液樣本的采集、運(yùn)送、標(biāo)本處置方法、保存條件以及集中批量檢測都可能對胃泌素-17檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性造成很大的影響[9，10]。

表1 標(biāo)本不同分離時間胃泌素-17結(jié)果比較

表2 30例標(biāo)本不同保存方法胃泌素-17結(jié)果比較

血清胃泌素-17可以用于評估胃粘膜的功能狀態(tài)，在胃腸道癌癥的發(fā)生和發(fā)展中起到重要的作用，目前已成為胃竇萎縮和胃癌重要的血清學(xué)標(biāo)志物[11，12]。 有關(guān)報道證實[13]，胃泌素-17 在體外性質(zhì)極不穩(wěn)定、非常容易降解。ELISA定量檢測試劑盒檢測胃泌素-17的敏感性和特異性雖較好，但操作時間較長，日常工作中一般采用分批檢驗[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，血液樣本未分離條件下幾乎不能進(jìn)行樣本保存，即使低溫條件下胃泌素-17也會有不同程度的降解。本次研究觀察到，即刻、2h、4h、8h、24h離心血液標(biāo)本檢測的結(jié)果有明顯的下降趨勢，降解幅度約為15%，8h后的血液標(biāo)本胃泌素-17幾乎檢測不到。臨床采集標(biāo)本應(yīng)立即送檢，有條件的考慮冷鏈環(huán)境下運(yùn)送標(biāo)本，實驗室收到標(biāo)本后應(yīng)該立即分離血清標(biāo)本，確保胃泌素-17不被降解[15]。即刻分離的血清分2組，未加穩(wěn)定劑的血清組胃泌素-17在室溫、4℃保存連續(xù)7d檢測的結(jié)果有下降的趨勢，-70℃保存7d的檢測結(jié)果未見明顯的變化。添加穩(wěn)定劑組胃泌素-17在室溫、4℃、-20℃和-70℃至少可以保存4d，-20℃和-70℃保存的檢測結(jié)果未見明顯的變化。公司推薦使用二甲亞砜為最佳的穩(wěn)定劑，在1ml血清中加入2滴，當(dāng)5%的溶液使用，處理過的樣品可在20～25℃環(huán)境中可以儲存4d。

在本研究設(shè)計之初，曾考慮將穩(wěn)定劑直接加入到全血標(biāo)本中觀察其是否能更便捷地保存樣本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甚至檢測不出數(shù)據(jù)，針對全血樣品穩(wěn)定劑效果并不理想。總之，在臨床標(biāo)本采集后應(yīng)該盡快送檢，不超過30min為宜，實驗室收到血液樣本后也需要盡早分離血清并-20℃低溫保存。每周檢測2次以上時，添加穩(wěn)定劑的血清標(biāo)本-4℃保存最方便可靠，保存時間較長時，最佳保存溫度為-70℃，也可以置于-20℃。這樣對結(jié)果的準(zhǔn)確性有重要的意義。醫(yī)務(wù)人員應(yīng)重視血液標(biāo)本運(yùn)送時間、分離方法、保存條件等對結(jié)果造成干擾，避免這些因素造成結(jié)果異常而影響臨床診斷。

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R735.2，R446.62

A

1674-1129(2017)05-0717-02

2016-10-21；

2017-07-03)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.029