Toll樣受體4和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1在子宮內(nèi)膜癌中的臨床表達(dá)

楊 莉 韓 萍 王秀娟 代 娟

華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 河北唐山 063000

Toll樣受體4和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1在子宮內(nèi)膜癌中的臨床表達(dá)

楊 莉 韓 萍 王秀娟 代 娟

華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 河北唐山 063000

①目的 檢測(cè)Toll 樣受體4 (TLR4) 和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 (TGF-β1)在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義。②方法 應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)正常增生期子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本30 例、不典型增生子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本30 例和子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本60例中TLR4 和TGF-β1的表達(dá)情況。③結(jié)果 TLR4 和TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)顯著高于正常增生期子宮內(nèi)膜組織和不典型增生子宮內(nèi)膜組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05) ；TLR4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05); TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與病理分期、肌層浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。TLR4和TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。④結(jié)論 TLR4 和TGF-β1的陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展及惡性程度有一定的關(guān)系。

子宮內(nèi)膜癌 Toll樣受體4 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1

子宮內(nèi)膜癌( endometrial carcinoma，EC) 是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，威脅著女性的健康和生命，其發(fā)生發(fā)展的分子調(diào)控機(jī)制仍不明確。Toll樣受體4(TLR4)是最早發(fā)現(xiàn)的Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)亞型之一，在炎性疾病、組織纖維化疾病及多種實(shí)體腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[1,2]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-1 ( transformation growth factor β1，TGF-β1) 是一種多功能細(xì)胞因子，調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，其在不同腫瘤中對(duì)腫瘤的發(fā)展起到不同的作用[3]。TLR4 和TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌中的研究較少且結(jié)論不一致。本研究旨在觀察及分析TLR4 和TGF-β1在不同類型子宮內(nèi)膜病變中的表達(dá)及其與子宮內(nèi)膜癌臨床參數(shù)的關(guān)系，為子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料 選取2013年9月～2016年4月華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院病理科子宮內(nèi)膜癌蠟塊包埋組織60例，正常增生期及不典型增生子宮內(nèi)膜蠟塊包埋組織各30例。所有病例均經(jīng)病理組織學(xué)確診，并且術(shù)前均未接受放療、化療或激素治療。兔抗人TLR4 和TGF-β1多克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)SANTACRUZ試劑公司, 二抗免疫組化試劑盒(PV6001)及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2方法 采用免疫組化S-P法檢測(cè)TLR4及TGF-β1在正常增生期子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)。石蠟包埋組織標(biāo)本進(jìn)行4μm連續(xù)切片。二甲苯脫蠟，梯度酒精至水，枸櫞酸緩沖液微波熱修復(fù)抗原，0.3%過氧化氫(H2O2) 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶室溫20分鐘。正常山羊血清室溫封閉20分鐘后加一抗。4℃過夜，PBS震洗三遍，加入二抗37℃孵育60分鐘，免疫組化試劑DAB顯色5～10 分鐘，蘇木素復(fù)染、脫水、透明、中性樹脂封片。

1.3結(jié)果判定 TLR4以光鏡下胞膜和/或胞漿呈淡黃至棕黃色顆粒為陽(yáng)性標(biāo)志。TGF-β1以光鏡下胞漿呈淡黃至棕黃色顆粒為陽(yáng)性標(biāo)志。結(jié)果判定采用半定量積分法。每張切片于400倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例及著色程度記分：①陽(yáng)性細(xì)胞比例記分：≤25% 以下為1分，26%～50%為2分，>50%為3分；②著色程度記分：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，深棕色為3分。根據(jù)二者乘積將≥2分定義為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。TLR4和TGF-β1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌組織臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)，采用Logistic回歸法行多因素分析，TLR4和TGF-β1表達(dá)相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1TLR4、TGF-β的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系 在子宮內(nèi)膜癌中TLR4的陽(yáng)性表達(dá)率與子宮肌層浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，提示在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中TLR4陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜組織惡變、侵襲進(jìn)展有關(guān)；與患者年齡、絕經(jīng)與否、組織學(xué)分級(jí)、病理分期無(wú)關(guān)(P>0.05)。TGF-β1的陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、病理分期、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；TGF-β1陽(yáng)性表達(dá)反映腫瘤的局部浸潤(rùn)能力與轉(zhuǎn)移的能力，與腫瘤的轉(zhuǎn)移、分期及預(yù)后相關(guān)；與患者年齡、絕經(jīng)與否無(wú)關(guān)(P>0.05)，見表1。

2.2TLR4、 TGF-β1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床特征的關(guān)系 將患者年齡、絕經(jīng)與否、組織學(xué)分級(jí)、病理分期、子宮肌層浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總，進(jìn)行Logistic回歸法行多因素分析。結(jié)果顯示：病理分期、子宮肌層浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是子宮內(nèi)膜癌的TLR4陽(yáng)性表達(dá)的影響因素(均P<0.01)。病理分期、組織分級(jí)、子宮肌層浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與子宮內(nèi)膜癌的TGF-β1陽(yáng)性表達(dá)密切相關(guān)(均P<0.01),見表2，表3。

表1 TLR4和 TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況

注：*P<0.05

表2 子宮內(nèi)膜癌中TLR4的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的多因素分析

表3 子宮內(nèi)膜癌中TGF-β1的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的多因素分析

2.3TLR4和 TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性 在子宮內(nèi)膜癌中TLR4的陽(yáng)性率為70%(42/60)，TGF-β1的陽(yáng)性率為71.7%(43/17)，Spearman相關(guān)分析法顯示TLR4和TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.344，P=0.011)，見表4。

表4 TRL4和TGF-β1在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況

3 討論

子宮內(nèi)膜癌在我國(guó)的發(fā)病率逐年增高，隨著腫瘤分子診斷以及靶向治療的進(jìn)展，越來(lái)越多的研究向分子水平、基因水平深入。目前尚無(wú)用于子宮內(nèi)膜癌的分子診斷及預(yù)后的分子標(biāo)志物。

TLR4 是Toll 樣受體重要的成員之一，既往研究認(rèn)為其主要分布于各類免疫細(xì)胞，介導(dǎo)免疫及炎癥反應(yīng)。近年來(lái)，大量研究證實(shí)TLR4 在多種腫瘤中有異常表達(dá)，其在婦科腫瘤卵巢癌、宮頸癌的表達(dá)均高于正常組織，起促進(jìn)腫瘤發(fā)展的作用[4,5]。而在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)卻不一致。Allhorn等[6]研究了月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜異位癥、絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生及子宮內(nèi)膜癌中TLR3和TLR4的表達(dá)。與正常組織相比，TLR4 mRNA的表達(dá)在增生期子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌中明顯減少，在異位子宮內(nèi)膜異位癥病灶中顯著增加。其中，TLR4在低分化(3級(jí))子宮內(nèi)膜腺癌中表達(dá)最低。而也有研究顯示子宮內(nèi)膜癌組織中的TLR4顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織及增生期內(nèi)膜組織[7,8]。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中TLR4陽(yáng)性表達(dá)顯著高于正常增生期和不典型增生子宮內(nèi)膜組織。推測(cè)TLR4在子宮內(nèi)膜由不典型增生轉(zhuǎn)變?yōu)樽訉m內(nèi)膜癌的過程當(dāng)中，被逐步激活，其表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。

TGF-β1是TGF-β超家族的一員，無(wú)論在生理及病理情況下都對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化起重要的調(diào)節(jié)作用；與TLR4相似，其對(duì)于腫瘤細(xì)胞也起雙向調(diào)節(jié)作用, 在腫瘤形成早期能抑制腫瘤形成,而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中則有促進(jìn)作用[9,10]。TGF-β1 在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)顯著高于正常增生期及不典型增生子宮內(nèi)膜組織, 并且其表達(dá)與TLR4均與子宮內(nèi)膜癌的臨床病理分期、浸潤(rùn)肌壁深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，說(shuō)明TGF-β1與 TLR4在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過程中均起到了促進(jìn)的作用。本研究結(jié)果表明，兩者在子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)具有正相關(guān)性，提示兩者可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)展中存在一定的聯(lián)系，但二者在體內(nèi)是否存在相互調(diào)控以及如何相互作用, 尚需進(jìn)一步研究證實(shí), 以更深入地探討子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制。

[1] Verzola D,Bonanni A,Sofia A,et al.Toll-like receptor 4 signalling mediates inflammation in skeletal muscle of patients with chronic kidney disease[J].Cachexia Sarcopenia Muscle,2016,8(1):131-144

[2] Sun L,Dai JJ,Hu WF,et al.Expression of toll-like receptors in hepatic cirrhosis and hepatocellular carcinoma[J].Genet Mol Res,2016,15(2):4238

[3] Huang JJ,Blobe GC.Dichotomous roles of TGF-β in human cancer[J].Biochem Soc Trans,2016,44(5):1441-1454

[4] Wang Y,Weng Y,Shi Y,et al.Expression and functional analysis of Toll-like receptor 4 in human cervical carcinoma[J].Membr Biol,2014,247(7):591-599

[5] Luo XZ,He QZ,Wang K.Expression of Toll-like receptor 4 in ovarian serous adenocarcinoma and correlation with clinical stage and pathological grade[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(8):14323-14327

[6] Allhorn S,Bǒing C,Koch AA,et al.TLR3 and TLR4 expression in healthy and diseased human endometrium[J].Reprod Biol Endocrinol,2008,6(1):40

[7] 王 花.TLR 4 和NF-κB p65 在子宮內(nèi)膜樣癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)婦幼保健,2014,29(26):4240-4242

[8] 余曉茹.Toll樣受體4和核因子-κB p65在子宮內(nèi)膜樣癌中的表達(dá)[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,32(2):157-159

[9] Glazer ES,Welsh E,Pimiento JM,et al.TGFβ1 overexpression is associated with improved survival and low tumor cell proliferation in patients with early-stage pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Oncotarget,2017,8(1):999-1006

[10] Pardali K,Moustakas A.Actions of TGF-beta as tumor suppressor and pro-metastatic factor in human cancer[J].Biochim Biophys Acta,2007,1775(1):21-62

(2017-03-29 收稿)(張愛國(guó) 編輯)

ExpressionandclinicalcharacteristicsofTLR4andTGF-β1inendometrialcarcinoma

YANG Li,HAN Ping,WANG Xiujuan,et al

(Department of Obstetrics and Gynecology,Affiliated Hospital of North China University of Science and Technology,Tangshan 063000,China)

ObjectiveTo investigate the expression and significance of TLR4 and TGF-β1 in endometrial carcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the TLR4 and TGF-β1 expression in specimens of normal proliferative phase of endometrial tissues (30 cases), atypical endometrial hyperplasia tissues (30 cases) and endometrial carcinoma (60 cases).ResultsThe expression of TLR4 and TGF-β1 in endometrial carcinoma was significantly higher than that in normal proliferative phase of endometrium and atypical endometrial hyperplasia tissues (P<0.05);TLR4 expression was significant associated with myometrial invasion and lymph node metastasis in endometrial carcinoma (P<0.05); TGF-β1 expression was significant associated with pathological stage, muscle infiltration and lymph node metastasis in endometrial carcinoma (P<0.05).Expression of TLR4 and TGF-β1 in endometrial carcinoma was positively correlated (P<0.05).ConclusionThe positive expression of TLR4 and TGF-β1 have a certain relationship with the occurrence, development and malignancy degree of endometrial carcinoma.

Endometrioid carcinoma.Toll-like receptor 4,TLR4. Transformation growth factor β1,TGF-β1

R 737.33

A

2095-2694(2017)05-361-04

楊 莉(1978-)，女，碩士研究生、主治醫(yī)師。研究方向：婦科腫瘤。

韓 萍。