乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Mfn2的表達(dá)變化及臨床意義

謝艷麗，焦俊琴，劉月平，馬力(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊 050011)

乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Mfn2的表達(dá)變化及臨床意義

謝艷麗，焦俊琴，劉月平，馬力(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊 050011)

摘要：目的觀察乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中線粒體融合蛋白2(Mfn2)的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法采用免疫組化法檢測(cè)116例份乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織(觀察組)、10例份正常乳腺導(dǎo)管上皮組織(對(duì)照組)Mfn2，分析Mfn2表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果觀察組及對(duì)照組Mfn2陽(yáng)性率分別為44.82%(52/116)、90.00%(9/10)，兩組比較，P<0.05。Mfn2表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、雌激素受體、孕激素受體、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2有關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論 乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Mfn2的表達(dá)降低，其可能在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起作用。

關(guān)鍵詞：乳腺腫瘤；乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌；線粒體融合蛋白2

線粒體融合蛋白2(Mfn2)是一種增殖抑制基因，具有抗細(xì)胞增殖的作用，定位于線粒體外膜，在線粒體融合過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，參與調(diào)節(jié)線粒體功能和形態(tài)學(xué)的改變。Chen等[1]研究認(rèn)為，Mfn2可以在多種腫瘤細(xì)胞系中抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。同時(shí)，也有越來(lái)越多的研究[2～4]證實(shí)Mfn2對(duì)哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞有保護(hù)作用。目前，關(guān)于Mfn2在乳腺癌組織特別是在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中表達(dá)情況的報(bào)道相對(duì)較少。2014年1～6月，我們觀察了乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Mfn2的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。

1資料與方法

1.1臨床資料原發(fā)性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者116例，年齡24～76歲，中位年齡47歲；其中≤30歲11例，>30、≤60歲70例，>60歲35例。所有患者均經(jīng)病理證實(shí)，且術(shù)前均未行放、化療及內(nèi)分泌治療。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0個(gè)63例，1～3個(gè)37例，≥4個(gè)16例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)6例，Ⅱ級(jí)63例，Ⅲ級(jí)47例；雌激素受體(ER)陰性39例，陽(yáng)性77例；孕激素受體(PR)陰性56例，陽(yáng)性60例；人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER2)陰性70例，陽(yáng)性46例。手術(shù)留取癌組織116例份(觀察組)，另取癌旁(自距原發(fā)癌灶>5 cm處)正常乳腺導(dǎo)管上皮組織10例份(對(duì)照組)。

1.2主要試劑Mfn2單克隆抗體(小鼠抗人)Santa Cruz公司產(chǎn)品，二抗為通用型試劑盒。

1.3組織Mfn2檢測(cè)將標(biāo)本置于10%甲醛固定18～24 h，脫水后石蠟包埋，制備4 μm厚連續(xù)組織切片。按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行免疫組化SP法染色，抗原修復(fù)采用高壓法，抗體稀釋度為1∶100。每次染色均同步設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：Mfn2陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，均呈棕黃色或棕褐色顆粒樣分布。光學(xué)顯微鏡下觀察，根據(jù)棕黃色陽(yáng)性信號(hào)的強(qiáng)弱和面積判斷結(jié)果，陽(yáng)性細(xì)胞率<10%為陰性表達(dá)，10%～50%為陽(yáng)性表達(dá)，>50%為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)果判斷：①按陽(yáng)性細(xì)胞百分率計(jì)分：陽(yáng)性細(xì)胞率<10%計(jì)0分，10%～50%計(jì)1分，>50%計(jì)2分；②按染色強(qiáng)弱計(jì)分：淡黃色計(jì)0分，黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分。兩項(xiàng)計(jì)分相加得0～1分為陰性、≥2分為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組Mfn2陽(yáng)性率比較觀察組及對(duì)照組Mfn2陽(yáng)性率分別為44.82%(52/116)、90.00%(9/10)，兩組比較，P<0.05。

2.2Mfn2表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系Mfn2表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、ER、PR、HER2有關(guān)(P均<0.05)。

3討論

乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌是一類(lèi)起源于乳腺導(dǎo)管上皮的惡性腫瘤，是最常見(jiàn)的乳腺癌病理類(lèi)型，約占所有乳腺癌的70%左右。乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的流行病學(xué)特征與乳腺癌總體一致，屬于生物學(xué)行為較差的病理類(lèi)型。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌在40歲以下婦女中少見(jiàn)，但年輕婦女與老年婦女的腫瘤分類(lèi)比例相同。由于浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌在乳腺癌中最為多見(jiàn)，并且患者的預(yù)后往往欠佳，因此深入探討其生物學(xué)行為的影響因素有著重要意義。

表1　Mfn2表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理

文獻(xiàn)報(bào)道，人Mfn2基因定位于1p36.3位置上。目前研究[1,5,6]顯示，過(guò)表達(dá)的Mfn2可以引起血管平滑肌細(xì)胞的增殖抑制、抑制腫瘤細(xì)胞系的增殖，在活體可抑制血管內(nèi)膜形成，并可與α-肌動(dòng)蛋白和微管蛋白共同定位于胞質(zhì)。同時(shí)Mfn2還能促進(jìn)線粒體融合，調(diào)節(jié)丙酮酸、葡萄糖和脂肪酸的氧化。因此在需能較高的細(xì)胞中，Mfn2表達(dá)水平較高[7]。Mfn2已被證實(shí)參與了抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的過(guò)程，同時(shí)可以抑制多種惡性腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)活性，提示Mfn2可能在人類(lèi)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用[1,8～10]。本研究顯示，觀察組Mfn2陽(yáng)性率低于對(duì)照組，提示Mfn2的異常表達(dá)在乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生癌變的過(guò)程中可能起著一定的作用，對(duì)乳腺良惡性腫瘤的鑒別有一定的參考價(jià)值。

近年來(lái)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Mfn2的表達(dá)下調(diào)與多種惡性腫瘤患者的不良預(yù)后有關(guān)[11,12]。Mfn2與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系研究，特別是其與惡性腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的研究逐漸成為熱點(diǎn)[13～15]。Mfn2參與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的具體機(jī)制目前尚不十分清楚，有研究表明可能與其能夠促進(jìn)凋亡基因(Bax)蛋白表達(dá)增多，從而活化線粒體凋亡途徑有關(guān)。在凋亡誘導(dǎo)因素的作用下，胞質(zhì)中非活性的Bax蛋白發(fā)生構(gòu)型變化，從細(xì)胞質(zhì)移位到線粒體膜上與Bcl-2結(jié)合，形成異源二聚體來(lái)抑制Bcl-2的活性，從而導(dǎo)致了線粒體膜上通透性轉(zhuǎn)換孔的持續(xù)性開(kāi)放，致使線粒體跨膜壓下降，引起細(xì)胞色素C釋放到細(xì)胞質(zhì)中；這些被釋放到細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞色素C與凋亡誘導(dǎo)因子、Caspase-3酶原結(jié)合形成凋亡復(fù)合物，進(jìn)而生成有活性的Caspase-3來(lái)觸發(fā)細(xì)胞凋亡。我們的前期工作證實(shí)，ERβ/Mfn2通路參與介導(dǎo)了雌激素作用下乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的變化，即ERβ可以通過(guò)影響Mfn2的表達(dá)抑制E2誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖和轉(zhuǎn)移。本研究顯示，Mfn2表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、ER、PR、HER2有關(guān)，提示Mfn2可能與乳腺癌的進(jìn)展過(guò)程有密切的關(guān)系。也有學(xué)者認(rèn)為，Mfn2的表達(dá)下調(diào)與惡性腫瘤患者的預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)；這可能與各實(shí)驗(yàn)研究所采用的試劑、檢測(cè)方法、病例數(shù)差別等原因有關(guān)。

總之，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Mfn2的表達(dá)降低，其可能在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] Chen KH, Guo X, Ma D, et al. Dysregulation of HSG triggers vascular proliferative disorders[J]. Nat Cell Biol, 2004,6(9):872-883.

[2] Neuspiel M, Zunino R, Gangaraju S, et al. Activated mitofusin 2 signals mitochondrial fusion, interferes with Bax activation, and reduces susceptibility to radical induced depolarization[J]. J Biol Chem, 2005,280(26):25060-25070.

[3] Santel A, Frank S, Gaume B, et al. Mitofusin-1 protein is a generally expressed mediator of mitochondrial fusion in mammalian cells[J]. J Cell Sci, 2003,116(Pt 13):2763-2774.

[4] Sugioka R, Shimizu S, Tsujimoto Y. Fzo1, a protein involved in mitochondrial fusion, inhibits apoptosis[J]. J Biol Chem, 2004,279(50):52726-52734.

[5] Jiang GJ, Han M, Zheng B, et al. Hyperplasia suppressor gene associates with smooth muscle alpha-acfin and is involved in the redifferentiation of vascular smooth muscle ceHs[J]. Heart Vessels, 2006,21(5):315-320.

[6] Jiang GJ, Pan L, Huang XY, et al. Expression of HSG is essential for mouse blastoeyst formation[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2005,335(2):351-355.

[7] Soriano FX, Hess M, Bach D, et al. Evidence for amitochondrial regulatory pathway defined by peroxisome proliferator-activated re ceptor-gamma coaetivator-1 alpha, estrogenwrelated receptor-alpha, and mitofusin2[J]. Diabetes, 2006,55(6):1783-1791.

[8] Wang W, Zhou D, Wei J, et al. Hepatitis B virus X protein inhibits p53-mediated upregulation of mitofusin-2 in hepatocellular carcinoma cells[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2012,421(2):355-360.

[9] Jin B, Fu G, Pan H, et al. Anti-tumour efficacy of mitofusin-2 in urinary bladder carcinoma[J]. Med Oncol, 2011,28(Suppl 1):373-380.

[10] Rehman J, Zhang HJ, Toth PT, et al. Inhibition of mitochondrial fission prevents cell cycle progression in lung cancer[J]. FASEB J, 2012,26(5):2175-2186.

[11] 丁煥然,姜廣建,馬小兵,等.肺癌組織中HSG、p21和PCNA的表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2009,25(2):147-150.

[12] 章駿,趙怡,王群,等.乳腺癌組織中HSG 和EGFR 基因mRNA表達(dá)與其臨床病理因素的相關(guān)性研究[J].實(shí)用癌癥雜志,2014,29(6):629-632.

[13] Zhang GE, Jin HL, Lin XK, et al. Anti-tumor effects of mfn2 in gastric cancer[J]. Int J Mol Sci, 2013,14(7):13005-13021.

[14] Wang W, Lu J, Zhu F, et al. Pro-apoptotic and anti-proliferative effects of mitofusin-2 via Bax signaling in hepatocellular carcinoma cells[J]. Med Oncol, 2012,29(1):70-76.

[15] Cheng X, Zhou D, Wei J, et al. Cell-cycle arrest at G2/M and proliferation inhibition by adenovirus-expressed mitofusin-2 gene in human colorectal cancer cell lines[J]. Neoplasma, 2013,60(6):620-626.

Expression changes of Mfn2 in infiltrating ductal carcinoma of breast and the clinical significance

XIEYan-li,JIAOJun-qin,LIUYue-ping,MALi

(TheFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the expression changes of mitofusin 2 (Mfn2) in infiltrating ductal carcinoma of breast and to investigate its clinical significance. MethodsThe immunohistochemical SP method was used to assess the expression of Mfn2 in 116 cases of infiltrating ductal carcinoma of breast (observation group) and 10 cases of normal breast ductal epithelial tissues (control group). The relationships between Mfn2 expression and the clinicopathological parameters of breast infiltrating ductal carcinoma patients were analyzed. ResultsThe positive expression rates of Mfn2 in the observation and control groups were 44.82% (52/116) and 90.00% (9/10), respectively (all P<0.05). The Mfn2 expression was related with lymph node metastasis, histological grade, TNM staging, estrogen receptor, progesterone receptor and epidermal growth factor receptor-2 of breast infiltrating ductal carcinoma (all P<0.05). ConclusionThe Mfn2 expression is decreased in the breast infiltrating ductal carcinoma tissues, which may play an important role in the occurrence and development of infiltrating ductal carcinoma of breast

Key words:breast neoplasms; infiltrating ductal carcinoma of breast; mitofusin 2

(收稿日期:2014-11-02)

通信作者簡(jiǎn)介：馬力(1975-)，男，博士，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要研究方向?yàn)槿橄倌[瘤的基礎(chǔ)和臨床研究。E-mail:mali1021@126.com

作者簡(jiǎn)介：第一謝艷麗(1977-)，女，在職碩士研究生在讀，主要研究方向?yàn)槿橄倌[瘤的基礎(chǔ)和臨床研究。E-mail:13831120102@163.com

基金項(xiàng)目：河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目(ZL20140021)。

中圖分類(lèi)號(hào)：R737.9

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2015)11-0018-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.11.006