• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    用于檢測Al3+和pH值的雙功能熒光分子探針

    2017-10-16 04:09:15李靜韓書華
    分析化學 2017年9期

    李靜+韓書華

    摘要利用熒光素(Fluorescein)對羅丹明6G(Rhodamine 6G)進行修飾,得到熒光分子探針R6GFlu雜化物。此探針可特異性識別Al3+,檢出限可低至10

    Symbolm@@ 8 mol/L級; 向含有探針分子的溶液中加入Al3+后,溶液的顏色由無色變?yōu)榉凵?,并且在紫外燈下發(fā)出綠色熒光,可實現(xiàn)肉眼對10 μmol/L Al3+的定性檢測。考察了不同pH值下R6GFlu的熒光性質(zhì)。 結(jié)果表明,此探針還可用于酸性范圍(pH 3.00~6.00)和堿性范圍(pH 8.00~10.50)內(nèi)pH值的精確檢測。實驗結(jié)果表明,R6GFlu是一種可用于Al3+和pH值檢測的雙功能熒光分子探針。

    關鍵詞雙功能; 熒光分子探針; pH值檢測; Al3+; 羅丹明衍生物

    1引 言

    目前使用的熒光分子探針,能夠?qū)崟r、原位地檢測對環(huán)境和生命過程有重要作用的pH值、分子和離子等,并且已經(jīng)廣泛應用于溶液環(huán)境下的檢測和細胞成像等領域[1~3]。熒光分子探針通過特異性識別微觀環(huán)境中的目標檢測物,具有選擇性高、靈敏度高和檢出限低等特點[4,5]。羅丹明染料的光物理性質(zhì)優(yōu)良,量子產(chǎn)率高,光穩(wěn)定性強,易于被修飾,得到對金屬離子有選擇性響應的熒光分子探針[6~8]。羅丹明衍生物傳感機理是被分析物質(zhì)能夠引起其中的螺環(huán)結(jié)構發(fā)生“關開”轉(zhuǎn)變,相應地熒光發(fā)生“關開”的變化。螺環(huán)形式的探針溶液為無色溶液,無熒光發(fā)射; 開環(huán)形式的探針溶液變?yōu)橛猩芤海⑶矣休^強的熒光發(fā)射,因此羅丹明衍生物可分別通過溶液顏色的改變和熒光發(fā)射光譜的測定,實現(xiàn)對某特定物質(zhì)的肉眼定性檢測和定量檢測。

    羅丹明衍生物對環(huán)境pH值的改變有靈敏的響應。在堿性條件下,它保持螺環(huán)形式,無熒光發(fā)射; 但在酸性環(huán)境中有較強的熒光發(fā)射[9,10]。相反,熒光素(Fluorescein)在堿性條件下保持開環(huán)形式,發(fā)出熒光; 但在酸性條件下螺環(huán)關閉,無熒光發(fā)射[11,12]。本研究根據(jù)二者對pH值的敏感特性,以及羅丹明衍生物可用于金屬離子檢測的性質(zhì)[13~15],利用熒光素對羅丹明6G(Rhodamine 6G)進行修飾,得到一種新型熒光分子探針R6GFlu雜化物。此熒光分子探針中含有兩個內(nèi)酰胺的螺環(huán)結(jié)構,分別對應二者的熒光分子結(jié)構。它既可用于環(huán)境pH值的響應,還可用于Al3+的傳感,與文獻[13~15]報導的方法相比,R6GFlu對Al3+的選擇性更高,檢出限更低。

    2實驗部分

    2.1儀器與試劑

    AVANCE300核磁共振波譜儀(300 M, 瑞士Bruker公司); U4100紫外可見近紅外分光光度計(日本Hitachi公司); LS55熒光磷光發(fā)光分光光度計(美國PerkinElmer公司); PHS3C pH計(上海雷磁儀器廠)。

    羅丹明6G(日本TCI公司); 水合肼(80%)、NaOH(分析純)(天津登科化學試劑有限公司); 乙二醛(40 wt%水溶液,阿拉?。?; 熒光素(90%,分析純,阿拉丁); 乙腈(分析純,國藥集團化學試劑有限公司); 乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷、冰乙酸(分析純,天津市富宇精細化工有限公司); 磷酸(分析純,萊陽市康德化工有限公司); 硼酸(分析純,天津市贏達稀貴化學試劑廠)。金屬離子(Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Zn2+、Ni2+、Cu2+、Pb2+、Cd2+、Co2+、Hg2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+、Cr3+、Al3+)的原液0.01 mol/L)采用其相應的氯鹽進行配制,Ag+(0.01 mol/L)原液采用AgNO3配制。BrittonRobinson緩沖溶液由磷酸、硼酸和冰乙酸配制,并用NaOH(0.2 mol/L)溶液在酸度計上調(diào)至所需pH值。所有試劑未進一步純化,直接使用。

    2.2化合物的合成與表征

    熒光分子探針R6GFlu的合成路線如圖1所示。其中所有化合物的鑒定均通過1H NMR進行了表征判斷。

    2.2.1化合物1的合成與表征化合物1的合成與文獻[16]報道的方法相同。將羅丹明6G(9.58 g, 0.02 mol)溶解于300 mL乙醇中; 室溫下充分攪拌。將37 mL水合肼(0.76 mol)逐滴滴加到上述溶液中,滴加完畢后升溫至80℃回流。2 h后,溶液中羅丹明6G的熒光消失。冷卻,過濾,所得固體用乙醇洗滌數(shù)次。干燥, 得到粉色固體7.06 g(產(chǎn)率82.0%)。1H NMR表征結(jié)果:δH(300 MHz,DMSOd6, Me4Si) 1.20(6H,t,CH3); 1.87(6H,s,ArCH3); 3.08~3.17(4H,m,ArNHCH2); 4.22(2H,s,NH2); 5.00(2H,t,ArNH); 6.09(2H,s,ArH); 6.26(2H,s,ArH); 6.91~6.94(1H,m,ArH); 7.44~7.47(2H,m,ArH); 7.74~7.77(1H,m,ArH)。

    2.2.2化合物2的合成與表征將化合物1(3.00 g,6.99 mmol)溶解于乙醇/二氯甲烷(2∶3,V/V)混合溶劑中。在N2氛圍下,將上述溶液逐滴滴加于乙二醛(19.86 mL,174.75 mmol)的乙醇溶液中(濃度為2.92 mol/L),在室溫下反應12 h。反應完畢后, 減壓旋蒸, 除去大部分溶劑,剩余少量溶劑,加入30 mL乙醇,即析出大量黃色固體。過濾,使用乙醇充分洗滌,干燥后得到黃色固體2.63 g(產(chǎn)率80.2%)。1H NMR表征結(jié)果: δH(300 MHz,DMSOd6,Me4Si)1.20(6H,t,CH3); 1.85(6H,s,ArCH3); 3.09~3.18(4H,m,ArNHCH2); 5.16(2H,t,ArNH); 6.18(2H,s,ArH); 6.31(2H,s,ArH); 7.02~7.04(1H,d,ArH); 7.28~7.28(1H,d,ArH); 7.57~7.69(2H,m,ArH); 7.98~8.00(1H,d,NCH); 9.23~9.26(1H,d,CHO)。δH 4.22(NH2)處峰的消失和δH 7.98(NCH)與δH 9.23(CHO)處峰的出現(xiàn),表明化合物2被成功合成。endprint

    2.2.3化合物3的合成與表征化合物3的合成采用文獻[17]報道的方法。將熒光素(7.00 g,18.95 mmol)分散于300 mL乙醇中,得到橙色懸濁液。向上述懸濁液中加入過量水合肼(37 mL,0.76 mol),加熱回流12 h,隨著反應的進行,懸浮顆粒逐漸消失,最終得到暗紅色澄清透明溶液。減壓旋蒸至剩余少許溶劑,加入200 mL去離子水,析出淡黃色固體,靜置3 h后,過濾,用去離子水和乙醇交替洗滌數(shù)次,干燥后得到淡黃色粉末6.15 g(產(chǎn)率93.7%)。1H NMR表征結(jié)果:δH(300 MHz,DMSOd6,Me4Si)4.37(2H,s,NH2); 6.38~6.47(4H,m,ArH); 6.58~6.59(2H,d,ArH); 6.97~7.00(1H,m, ArH); 7.45~7.52(2H,m,ArH); 7.76~7.79(1H,m,ArH); 9.62(2H,s,ArOH)。

    2.2.4熒光分子探針R6GFlu的合成與表征將化合物2(1.20 g,2.55 mmol)溶解于200 mL氯仿中,化合物3(1.04 g,3 mmol)溶解于100 mL乙醇中,二者混合,加熱到80℃,回流12 h,反應結(jié)束后為橙色澄清透明溶液,減壓旋蒸,剩少許溶劑時加入100 mL乙醇,析出橙黃色固體,過濾,濾餅用乙醇洗滌,直至濾液變?yōu)闊o色透明。干燥后得到橙色粉末1.59 g(產(chǎn)率78.0%)。1H NMR表征結(jié)果: δH(300 MHz, DMSOd6,Me4Si)1.17~1.24(6H,m,CH3); 1.76~1.85(6H,m,ArCH3); 3.09~3.18(4H,m,ArNHCH2); 5.03~5.06(2H,t,ArNH); 6.09(2H,s,ArH); 6.30~6.31(2H,d,ArH); 6.38~6.44(4H,m,ArH); 6.64~6.65(2H,d,ArH); 6.91~7.00(2H,m,ArH); 7.47~7.60(4H,m,ArH); 7.74~7.77(1H,m,NCH); 7.87~7.90(3H,m,2ArH + NCH); 9.95(1H,s,ArOH)。

    2.3紫外可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜的測定

    2.3.1R6GFlu對金屬離子選擇響應性的探究R6GFlu母液(1 mmol/L)用乙腈配制; 向R6GFlu的乙腈溶液中分別加入不同的金屬離子(Ag+、Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Zn2+、Ni2+、Cu2+、Pb2+、Cd2+、Co2+、Hg2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+、Cr3+和Al3+),R6GFlu和金屬離子的最終濃度分別為1.0 μmol/L和10 μmol/L。放置2 h后進行測試,以保證探針分子和金屬離子的充分絡合。

    2.3.2不同濃度Al3+存在下體系的紫外可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜的測定保持R6GFlu濃度為10 μmol/L, Al3+濃度從1.0 μmol/L增加到15 μmol/L。紫外可見吸收光譜的測試在光程為1 cm的石英比色池中進行; 熒光發(fā)射光譜的采集采用500 nm為激發(fā)波長,激發(fā)狹縫和發(fā)射狹縫分別為6.0 nm和2.5 nm。

    2.3.3不同pH值下R6GFlu熒光發(fā)射光譜的測定配制BrittonRobinson緩沖溶液,用0.20 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值,使溶液的pH值在3.00~10.50之間,再向其中加入0.1 mmol/L R6GFlu。

    2.4熒光分子探針R6GFlu對Al3+檢出限的確定

    檢出限(Limit of detection,LOD)由公式(1)[18]計算求得:

    LOD=3σbim(1)

    其中, σbi是空白溶液測量(即不加金屬離子時)的標準偏差。m是信號強度與Al3+濃度([Al3+])線性關系圖的斜率。在本實驗中,測定了20個R6GFlu溶液的光譜,得到空白測量的標準偏差σbi; 根據(jù)2.3節(jié)所測定的不同濃度Al3+存在下體系的紫外可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜數(shù)據(jù),作528 nm處吸光度和554 nm處熒光強度與[Al3+]的線性關系圖,得到斜率m, 計算出檢出限。

    2.5結(jié)合常數(shù)的確定

    Al3+與R6GFlu的結(jié)合常數(shù)通過BenesiHildebrand(BH)方程(2)[19]計算:

    1F-F0=1{Ka×(Fmax-F0)×[Al3+]}(2)

    其中, F為不同濃度Al3+存在下所測得的熒光強度,F(xiàn)max和F0分別為Al3+濃度最大和無Al3+時的熒光強度,[Al3+]為與F相對應的Al3+濃度,測試方法按照2.3節(jié)進行。

    2.6Al3+與R6GFlu的配合物的摩爾吸光系數(shù)(ε)和熒光量子產(chǎn)率()的確定

    摩爾吸光系數(shù)根據(jù)朗伯比爾定律A=εbc確定,本實驗A為528 nm處的吸光度,光程b為1 cm,c為Al3+R6GFlu配合物的濃度。

    熒光量子產(chǎn)率由公式(3)確定[20,21]:

    x=n2xn2s·FxAsFsAx(3)

    其中,、n、F和A分別為物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率、所采用溶劑的折射率、最大吸收波長激發(fā)下測得的熒光積分面積和最大吸收波長處的吸光度; x為待測物, s為標準物。本實驗中溶劑均采用乙醇; 標準物選用羅丹明B,s=0.89。

    3結(jié)果與討論

    3.1熒光分子探針R6GFlu對金屬離子的響應特性

    3.1.1R6GFlu對Al3+選擇響應性

    首先研究了R6GFlu的光譜性質(zhì),如圖2所示。R6GFlu在可見光區(qū)無吸收峰(圖2A插圖),也無熒光發(fā)射峰(圖2B),說明此時它是以螺環(huán)形式存在。當加入不同金屬離子后,Al3+會引起R6GFlu的光譜發(fā)生明顯變化,528 nm處出現(xiàn)了的新吸收峰, 554 nm處出現(xiàn)熒光發(fā)射峰。Cr3+也可引起相似的光譜變化,但其變化程度遠小于Al3+。其它金屬離子均未引起光譜的顯著變化,因此可以認為該探針能夠優(yōu)先識別Al3+。endprint

    向R6GFlu溶液中加入混合金屬離子(Al3+和另一種干擾離子)后,與僅含Al3+的體系相比,其吸收峰和熒光發(fā)射峰強度均沒有顯著的變化(相對誤差分別為2.6%和1.6%),表明R6GFlu對其它的共存干擾離子有較好的耐受性。

    3.1.2不同濃度Al3+存在下體系的紫外可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜不同濃度Al3+存在時體系的紫外可見吸收光譜如圖3A插圖所示,528 nm處的吸收峰可歸屬為Al3+與R6GFlu形成的配合物,在此配合物中,羅丹明部分螺環(huán)結(jié)構處于“開環(huán)”狀態(tài),

    該吸收峰的強度隨著Al3+濃度的增加而線性增強(圖3A)。通過朗伯比爾定律可確定配合物溶液的摩爾吸光系數(shù)ε= 6180 m2/mol。

    熒光發(fā)射光譜也表現(xiàn)出相似的變化趨勢(圖3B),隨Al3+濃度的不斷增加,554 nm處熒光發(fā)射峰持續(xù)增強。當加入15 μmol/L Al3+時,熒光強度值達到最大。此探針對Al3+的線性檢測范圍為1.0~15.0 μmol/L。

    紫外可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜空白測量的標準偏差分別為0.0017和0.2095。分別利用圖3A和3B中線性關系圖的斜率,根據(jù)公式(1)求得檢出限分別為6.67×10

    此外,當向10 μmol/L R6GFlu中加入等濃度Al3+后,溶液發(fā)生顯著變化,由無色變?yōu)榉凵?,在紫外燈?65 nm)照射下,發(fā)出綠色熒光(圖4)。此現(xiàn)象說明R6GFlu可用于低至10 μmol/L Al3+的肉眼識別。因此,R6GFlu可通過顏色和光譜雙信號的改變,分別實現(xiàn)對Al3+的定性與定量的檢測。

    3.1.3R6GFlu與Al3+結(jié)合常數(shù)的確定根據(jù)BenesiHilderbrand (BH) 方程繪制工作曲線(見圖5),由此可計算出R6GFlu和Al3+的結(jié)合常數(shù)K=2.81×104 L/mol。

    3.2熒光分子探針R6GFlu對pH的響應性質(zhì)

    不同pH值下R6GFlu的熒光發(fā)射光譜如圖6插圖所示。在pH 3.00~6.00范圍內(nèi), R6GFlu表現(xiàn)出羅丹明6G部分的熒光發(fā)射峰(541 nm),并且熒光強度隨著pH值的降低而線性增強,在pH 8.00~10.50范圍內(nèi),此分子呈現(xiàn)出熒光素部分的熒光發(fā)射峰(524 nm),其強度隨著pH值的增加也呈線性增強。據(jù)此可繪制出pH 3.00~6.00和pH 8.00~10.50的工作曲線(圖6),從而實現(xiàn)在相應范圍內(nèi)的pH值檢測。R6GFlu 對pH值傳感機理如圖7所示,在酸性環(huán)境下,R6GFlu分子中的羅

    丹明部分質(zhì)子化造成螺環(huán)結(jié)構的開環(huán); 在堿性條件下, 此分子的熒光素部分上的酚羥基的解離造成其螺環(huán)結(jié)構的開環(huán)。

    4結(jié) 論

    熒光分子探針R6GFlu可選擇性識別Al3+,并且具有較低的檢出限和良好的選擇性,還可通過直觀的溶液顏色改變實現(xiàn)對Al3+肉眼定性識別; 此探針對pH值具有高度敏感性,可對小范圍變化的pH值進行精確測定。因此,R6GFlu是一種雙功能的熒光分子探針,可以作為檢測微環(huán)境中Al3+和pH值改變的有力工具。

    References

    1Wan Q Q, Song Y C, Li Z, Gao X H, Ma H M. Chem. Commun., 2013, 49(5): 502-504

    2Kong F P, Zhao Y H, Liang Z Y, Liu X J, Pan X H, Luan D R, Xu K H, Tang B. Anal. Chem., 2017, 89(1): 688-693

    3Song E Q, Hu J, Wen C Y, Tian Z Q, Yu X, Zhang Z L, Shi Y B, Pang D W. ACS Nano, 2011, 5(2): 761-770

    4Gupta A, Kumar N. RSC Adv., 2016, 6(108): 106413-106434

    5In B, Hwang G W, Lee K H. Bioorg. Med. Chem. Lett., 2016, 26(18): 4477-4482

    6Chen X Q, Pradhan T, Wang F, Kim J S, Yoon J. Chem. Rev., 2012, 112(3): 1910-1956

    7Li M, Jiang X J, Wu H H, Lu H L, Li H Y, Xu H, Zang S Q, Mak T C W. Dalton Trans., 2015, 44(39): 17326-17334

    8Chemate S, Sekar N. Sens. Actuators B, 2015, 220: 1196-1204

    9Li X H, Gao X H, Shi W, Ma H M. Chem. Rev., 2014, 114(1): 590-659

    10Zhang W S, Tang B, Liu X, Liu Y Y, Xu K H, Ma J P, Tong L L, Yang G W. Analyst, 2009, 134(2): 367-371

    11Lee D H, Sung H J, Han D W, Lee M S, Ryu G H, Aihara M, Takatori K, Park J C. Yonsei Med. J., 2005, 46(2): 268-274

    12Lee M H, Han J H, Lee J H, Park N, Kumar R, Kang C, Kim J S. Angew. Chem. Int. Ed., 2013, 52(24): 6206-6209endprint

    13Samanta S, Ray T, Haque F, Das G. J. Lumin., 2016, 171: 13-18

    14Sahana S, Bose S, Mukhopadhyay S K, Bharadwaj P K. J. Lumin., 2016, 169: 334-341

    15Li M, Zhang X, Fan Y, Bi C. Luminescence, 2015, 31(3): 851-855

    16Wu D Y, Huang W, Duan C Y, Lin Z H, Meng Q J. Inorg. Chem., 2007, 46(5): 1538-1540

    17Bao X F, Cao Q S, Wu X L, Shu H, Zhou B J, Geng Y L, Zhu J. Tetrahedron Lett., 2016, 57(8): 942-948

    18Goswami S, Aich K, Das S, Das A K, Manna A, Halder S. Analyst, 2013, 138(6), 1903-1907

    19Lee S, Rao B A, Son Y A. Sens. Actuators B, 2015, 210: 519-532

    20CI YunXiang, JIA Xin. Chinese J. Anal. Chem., 1986, 14(8): 616-618

    慈云祥, 賈 欣. 分析化學, 1986, 14(8): 616-618

    21Paul S, Manna A, Goswami S. Dalton Trans., 2015, 44(26): 11805-11810

    Bifunctional Fluorescence Molecular Probes for

    Detection of Aluminum and pH

    LI Jing, HAN ShuHua*

    (School of Chemistry and Chemical Engineering, Shandong University, Jinan 250100, China)

    AbstractA fluorescent molecular probe R6GFlu was prepared by modifying fluorescein onto Rhodamine 6G. The probe could be used to recognize Al3+ specifically, and the detection limit could reach as low as 10-8 mol/L. After addition of Al3+ (10 μmol/L) to the probe, the solution showed a color change from colorless to pink, and green fluorescence was observed under the UV irradiation, which could be perceived by the naked eye. By measuring the fluorescence emission intensity of R6GFlu at different pH, the probe could also be used to determine pH in acidic pH range (3.00-6.00) and basic pH range (8.00-10.50). The detection results of Al3+ and pH indicated that the R6GFlu was a dualfunctional fluorescent molecular probe.

    KeywordsBifunctional; Fluorescence molecular probe; pH detection; Aluminum; Rhodamine derivatives

    (Received 2 March 2017; accepted 23 June 2017)endprint

    国产成人影院久久av| 亚洲成人免费电影在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲五月色婷婷综合| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲欧美激情在线| e午夜精品久久久久久久| 国产精品九九99| 国产精品久久久久成人av| 在线av久久热| 黄色视频,在线免费观看| 久久国产精品影院| 国产成人欧美在线观看 | 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产精品合色在线| 久久亚洲精品不卡| 亚洲 欧美一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频| 757午夜福利合集在线观看| 91av网站免费观看| 老司机靠b影院| 搡老乐熟女国产| 亚洲一码二码三码区别大吗| 91成人精品电影| 欧美大码av| 欧美激情高清一区二区三区| 日韩欧美国产一区二区入口| 免费日韩欧美在线观看| 久99久视频精品免费| a级片在线免费高清观看视频| av不卡在线播放| 午夜老司机福利片| 久久精品国产清高在天天线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| av福利片在线| 午夜福利,免费看| 国产精品免费视频内射| 国产成人免费观看mmmm| 国产成人精品在线电影| 午夜两性在线视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲五月色婷婷综合| 成人手机av| 不卡一级毛片| 国产男女内射视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 另类亚洲欧美激情| 国产男靠女视频免费网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 成人av一区二区三区在线看| 丁香六月欧美| 黑人猛操日本美女一级片| 丁香欧美五月| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 人妻 亚洲 视频| 9191精品国产免费久久| 成熟少妇高潮喷水视频| 极品人妻少妇av视频| 一级片免费观看大全| videos熟女内射| 国产免费男女视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 高清黄色对白视频在线免费看| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久久久久久久久久大奶| 精品视频人人做人人爽| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 操美女的视频在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 久久 成人 亚洲| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品卡一卡二卡四卡免费| 中国美女看黄片| 亚洲成人国产一区在线观看| 麻豆成人av在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 国产成人影院久久av| 国产一区在线观看成人免费| 成年人午夜在线观看视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 12—13女人毛片做爰片一| 国产99久久九九免费精品| 久9热在线精品视频| 久久久久精品人妻al黑| 国产精品1区2区在线观看. | 男女午夜视频在线观看| 91在线观看av| 成人三级做爰电影| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲精品一二三| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产黄色免费在线视频| 18禁国产床啪视频网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 操出白浆在线播放| 母亲3免费完整高清在线观看| 99在线人妻在线中文字幕 | 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲成人免费电影在线观看| 看片在线看免费视频| 美女 人体艺术 gogo| 人妻 亚洲 视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 波多野结衣一区麻豆| 久久久水蜜桃国产精品网| 乱人伦中国视频| 精品少妇久久久久久888优播| cao死你这个sao货| 少妇被粗大的猛进出69影院| 午夜精品国产一区二区电影| av不卡在线播放| 91大片在线观看| 1024香蕉在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 欧美一级毛片孕妇| 免费看十八禁软件| 日本黄色日本黄色录像| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 午夜成年电影在线免费观看| 大型av网站在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 婷婷成人精品国产| 99久久99久久久精品蜜桃| 大片电影免费在线观看免费| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 美女视频免费永久观看网站| 国产免费男女视频| 中出人妻视频一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 久久九九热精品免费| 久久久久久久久久久久大奶| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲成人免费av在线播放| 一级毛片高清免费大全| 丰满迷人的少妇在线观看| 无人区码免费观看不卡| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 99国产极品粉嫩在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 99香蕉大伊视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 十八禁高潮呻吟视频| 日韩免费高清中文字幕av| 精品午夜福利视频在线观看一区| а√天堂www在线а√下载 | 丝袜美腿诱惑在线| av不卡在线播放| 久久精品国产综合久久久| 久久ye,这里只有精品| 无人区码免费观看不卡| 亚洲人成伊人成综合网2020| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲国产看品久久| 国产在线一区二区三区精| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 一本综合久久免费| 多毛熟女@视频| 人妻久久中文字幕网| 午夜亚洲福利在线播放| 国产xxxxx性猛交| 日韩免费av在线播放| 757午夜福利合集在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久精品亚洲av国产电影网| 精品福利永久在线观看| 91精品三级在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 欧美日韩精品网址| 一级毛片高清免费大全| 黑人猛操日本美女一级片| 中文字幕人妻熟女乱码| 91成年电影在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 女人久久www免费人成看片| 岛国毛片在线播放| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久久久久久午夜电影 | 精品久久久久久,| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美av亚洲av综合av国产av| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲av成人一区二区三| 国产精品久久电影中文字幕 | 大香蕉久久成人网| 天堂√8在线中文| 搡老岳熟女国产| 久久婷婷成人综合色麻豆| 在线观看免费视频日本深夜| 91在线观看av| 一级毛片高清免费大全| 淫妇啪啪啪对白视频| www.精华液| 国产有黄有色有爽视频| 搡老岳熟女国产| 国产成人欧美| 亚洲精品成人av观看孕妇| 99国产精品一区二区三区| 久久青草综合色| 国产熟女午夜一区二区三区| 一级,二级,三级黄色视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 黄色女人牲交| 欧美+亚洲+日韩+国产| 999精品在线视频| 老司机在亚洲福利影院| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产成人av激情在线播放| 成人18禁在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 一区在线观看完整版| 午夜精品久久久久久毛片777| 色精品久久人妻99蜜桃| 在线永久观看黄色视频| www.自偷自拍.com| 亚洲精品在线美女| 色老头精品视频在线观看| 国产精品电影一区二区三区 | 国产成人影院久久av| 久久久久精品人妻al黑| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品久久久久久,| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲欧美激情综合另类| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产精品久久视频播放| 丝袜美腿诱惑在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 午夜福利免费观看在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产欧美日韩一区二区三| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲午夜理论影院| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 怎么达到女性高潮| 人妻久久中文字幕网| 亚洲精品乱久久久久久| 国产成人av教育| 国产成人免费观看mmmm| 日韩大码丰满熟妇| 成年人免费黄色播放视频| 涩涩av久久男人的天堂| 91成人精品电影| av中文乱码字幕在线| 亚洲成人免费av在线播放| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中文亚洲av片在线观看爽 | 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 两个人看的免费小视频| 精品第一国产精品| 伦理电影免费视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 人妻久久中文字幕网| 欧美中文综合在线视频| 99久久精品国产亚洲精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲精品自拍成人| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲成a人片在线一区二区| 超色免费av| 十八禁人妻一区二区| av有码第一页| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 日本欧美视频一区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 亚洲精品一二三| 久久狼人影院| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久这里只有精品19| 精品一品国产午夜福利视频| 日本五十路高清| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲五月色婷婷综合| 老司机亚洲免费影院| 一本综合久久免费| 成年人午夜在线观看视频| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 一区二区三区激情视频| 激情在线观看视频在线高清 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品久久电影中文字幕 | 亚洲片人在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 久久人人97超碰香蕉20202| 大型黄色视频在线免费观看| 女同久久另类99精品国产91| 999久久久国产精品视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 黑人操中国人逼视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美精品亚洲一区二区| 免费看a级黄色片| 1024香蕉在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 欧美精品av麻豆av| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美乱妇无乱码| 人成视频在线观看免费观看| 人人妻人人澡人人看| 在线播放国产精品三级| 真人做人爱边吃奶动态| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品久久久人人做人人爽| 人妻一区二区av| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产av精品麻豆| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲七黄色美女视频| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 99久久国产精品久久久| 51午夜福利影视在线观看| 99热只有精品国产| 深夜精品福利| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 桃红色精品国产亚洲av| 一区二区三区精品91| 亚洲五月婷婷丁香| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲成人免费电影在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 在线观看66精品国产| 9热在线视频观看99| 黄色a级毛片大全视频| 丝袜人妻中文字幕| 国产色视频综合| 最新在线观看一区二区三区| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产精品欧美亚洲77777| 久久影院123| 色播在线永久视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 操出白浆在线播放| av福利片在线| 在线av久久热| 777米奇影视久久| 无人区码免费观看不卡| 亚洲av日韩在线播放| 一区在线观看完整版| 黄色视频不卡| 日韩成人在线观看一区二区三区| 黄色成人免费大全| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av福利片在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 宅男免费午夜| 国产成人精品无人区| 亚洲成a人片在线一区二区| 女警被强在线播放| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 老司机福利观看| 一级毛片精品| x7x7x7水蜜桃| 美女扒开内裤让男人捅视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 成人永久免费在线观看视频| 午夜两性在线视频| 又紧又爽又黄一区二区| 国产成人欧美| 村上凉子中文字幕在线| 搡老岳熟女国产| 在线视频色国产色| 亚洲片人在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 黄色成人免费大全| 中文字幕制服av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲第一青青草原| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产成人精品久久二区二区91| 国产高清激情床上av| 欧美黑人欧美精品刺激| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 99热国产这里只有精品6| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 777米奇影视久久| 中文字幕av电影在线播放| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲 国产 在线| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品在线观看二区| 久热爱精品视频在线9| 黑人操中国人逼视频| 女性被躁到高潮视频| 999精品在线视频| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品.久久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| x7x7x7水蜜桃| 久久午夜亚洲精品久久| av视频免费观看在线观看| www.999成人在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品免费大片| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久久久精品国产欧美久久久| 久9热在线精品视频| 黄色丝袜av网址大全| 欧美激情久久久久久爽电影 | 亚洲九九香蕉| 国产成人精品在线电影| 欧美在线一区亚洲| 91麻豆av在线| 亚洲av成人一区二区三| 黄色毛片三级朝国网站| 麻豆成人av在线观看| av欧美777| 国产有黄有色有爽视频| 女人精品久久久久毛片| 亚洲在线自拍视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 在线视频色国产色| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 18禁国产床啪视频网站| 麻豆av在线久日| 色综合婷婷激情| 两个人免费观看高清视频| av视频免费观看在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线天堂中文资源库| 国产激情久久老熟女| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产成人av激情在线播放| 纯流量卡能插随身wifi吗| 免费看a级黄色片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一二三四在线观看免费中文在| videosex国产| 日本wwww免费看| 99国产极品粉嫩在线观看| 黄频高清免费视频| 一二三四在线观看免费中文在| 日韩大码丰满熟妇| 下体分泌物呈黄色| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 成人影院久久| 欧美 日韩 精品 国产| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 动漫黄色视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美精品av麻豆av| 精品久久久久久,| 在线观看免费午夜福利视频| 看片在线看免费视频| 久久久久久久午夜电影 | 一区二区三区激情视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久午夜综合久久蜜桃| 老司机靠b影院| 日韩人妻精品一区2区三区| 中文字幕av电影在线播放| 久久久国产欧美日韩av| 久久精品亚洲av国产电影网| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 老汉色∧v一级毛片| 色94色欧美一区二区| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品一区二区三卡| 国产精品av久久久久免费| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲成人手机| 在线天堂中文资源库| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产不卡av网站在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 村上凉子中文字幕在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品福利观看| 一级,二级,三级黄色视频| 午夜激情av网站| 成年人黄色毛片网站| 免费高清在线观看日韩| 国产1区2区3区精品| 国产一区二区三区视频了| 一区福利在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产1区2区3区精品| 精品亚洲成a人片在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 老司机福利观看| 国产精品免费视频内射| 1024香蕉在线观看| 成年人黄色毛片网站| 免费观看精品视频网站| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品av久久久久免费| av片东京热男人的天堂| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 少妇粗大呻吟视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日韩有码中文字幕| 亚洲专区字幕在线| 午夜影院日韩av| 午夜福利,免费看| 欧美色视频一区免费| 制服人妻中文乱码| 精品电影一区二区在线| 最新的欧美精品一区二区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美 日韩 精品 国产| 电影成人av| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品电影一区二区在线| 国产精品av久久久久免费| 日日爽夜夜爽网站| 精品久久久久久,| 老鸭窝网址在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 精品久久蜜臀av无| 在线观看66精品国产| 男女免费视频国产| 久久ye,这里只有精品| 999久久久国产精品视频| 免费看十八禁软件| 两个人看的免费小视频| 悠悠久久av| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 国产成人系列免费观看| 亚洲人成电影观看| 成人精品一区二区免费| 日韩成人在线观看一区二区三区| 99香蕉大伊视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 天天影视国产精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩成人在线观看一区二区三区| 天天操日日干夜夜撸| 午夜久久久在线观看| 丝袜在线中文字幕| 91国产中文字幕| 9191精品国产免费久久| 在线观看免费视频网站a站| 欧美丝袜亚洲另类 | 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产精品.久久久| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一二三四在线观看免费中文在| 久久人妻熟女aⅴ| √禁漫天堂资源中文www| 欧美日韩黄片免| 久久久国产精品麻豆| 高潮久久久久久久久久久不卡| 嫩草影视91久久| a级毛片在线看网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩欧美三级三区| 99久久国产精品久久久| 国产精品98久久久久久宅男小说| 深夜精品福利| 亚洲一区高清亚洲精品| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久久国产精品大桥未久av| 777米奇影视久久| 999久久久精品免费观看国产| 成人亚洲精品一区在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 在线观看免费视频日本深夜| www.999成人在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 成人免费观看视频高清| 少妇的丰满在线观看| 黄色成人免费大全| 欧美日本中文国产一区发布| aaaaa片日本免费| 一级毛片女人18水好多| 91字幕亚洲| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产精品一区二区免费欧美| 久久久久久久国产电影| 国产欧美亚洲国产| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美不卡视频在线免费观看 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久九九热精品免费| 美国免费a级毛片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 成人国语在线视频| 麻豆成人av在线观看| 大陆偷拍与自拍| 国产高清国产精品国产三级| 国产不卡一卡二| 极品人妻少妇av视频| 一二三四在线观看免费中文在| 免费在线观看完整版高清|