超臨界CO2體系中磷脂酶A2催化合成高DHA含量DHA-PC的研究

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(中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266003)

超臨界CO2體系中磷脂酶A2催化合成高DHA含量DHA-PC的研究

李珍珍,許飛躍,韓玉謙*,林洪,馮曉梅

(中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島266003)

以南極磷蝦粉為原料,乙醇浸提后分離純化得到的精制磷脂酰膽堿的純度高達(dá)90.8%,以此為原料,在超臨界CO2體系中使用磷脂酶A2(PLA2)催化磷脂酰膽堿(PC)Sn-2位脂肪酸水解,使游離DHA結(jié)合到Sn-2位以制備高DHA含量的磷脂酰膽堿(DHA-PC),并研究了不同參數(shù)對(duì)該反應(yīng)的影響。最佳酶解反應(yīng)條件分別如下:固定化PLA2的添加量15%(占總底物),時(shí)間6 h,溫度55 ℃,壓力12 MPa。在此條件下,南極磷蝦磷脂酰膽堿上DHA的含量可達(dá)62.3 mol%。由此得出結(jié)論,PLA2用于磷脂酰膽堿改性以制備DHA-PC的可行性高。

南極磷蝦,磷脂酰膽堿,DHA-PC,固定化,PLA2,酯交換,超臨界CO2

Abstract:With the raw material of euphausia superba powder,the purity of the refining phosphatidylcholine gained by ethyl alcohol extraction and separation and purification reached 90.8%,then the refining phosphatidylcholine was used as raw material and phospholipase A2was used to catalyze the fatty acid hydrolysis of Sn-2 position of phosphatidylcholine in supercritical CO2system to make the fish oil DHA to Sn-2 position and form the DHA-PC with high DHA contents. Meanwhile,the effects of different parameters on the reaction were surveyed. The results showed that,the best additive amount of immobilization phospholipase A2was 15%(occupied the total substratio),the best enzymolysis was 6 h,the best enzymolysis temperature was 55 ℃,the best enzymolysis pressure was 12 MPa,respectively. Under such condition,the DHA binding ratio of euphausia superba phosphatidylcholine could reach 62.3 mol%. And it could be concluded that immobilization phospholipase A2is highly viable for phosphatidylcholine modification to prepare DHA-PC.

Keywords:antarctic krill;phosphatidylcholine;DHA-PC;immobilisation;phospholipase A2;transesterification;supercritical carbon dioxide

磷脂特定的極性頭部和脂肪酸組成對(duì)其生理功能是至關(guān)重要的[1]。一些磷脂因?yàn)榫哂刑囟ǖ慕Y(jié)構(gòu)而具有很高的利用價(jià)值,而這樣的磷脂在自然界卻很少存在(如多不飽和磷脂),所以往往需要通過(guò)改性獲得。多不飽和磷脂指的是磷脂中含有較多重要的多不飽和脂肪酸,如DHA[2]。Hosokawa等[3]研究表明,以海洋動(dòng)物磷脂酰膽堿為原料制成的高DHA含量的磷脂酰膽堿(DHA-PC)脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)顯示出很好的抗纖維肉瘤活性,而大豆磷脂制成的DHA-PC無(wú)此活性。南極磷蝦磷脂中以磷脂酰膽堿為主,且含有豐富的多不飽和脂肪酸[4-5],所以其為制備海洋源高DHA含量DHA-PC的良好來(lái)源。

磷脂酶A2(PLA2)可用于水解磷脂酰膽堿制備溶血磷脂酰膽堿,且它特異性地水解磷脂酰膽堿的Sn-2位,接下來(lái)進(jìn)行酯交換反應(yīng)可以使其Sn-2位結(jié)合更多ω-3系列多不飽和脂肪酸,以制備高多不飽和脂肪酸含量的磷脂酰膽堿。

因?yàn)槌R界CO2流體具有黏度低、擴(kuò)散性好且CO2的臨界點(diǎn)溫度和壓力對(duì)固定化酶活影響小等諸多利于酶促反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)[6-7],使超臨界CO2流體成為替代有機(jī)溶劑作為酶促反應(yīng)的介質(zhì)越來(lái)越受到人們關(guān)注。再者,沒(méi)有有機(jī)溶劑參與和殘留,諸如改性磷脂的酶催化反應(yīng)物在食品、藥品和化妝品等領(lǐng)域的應(yīng)用將得到大大的拓展[8]。

與游離酶相比較,固定化酶在超臨界流體(SCF)中具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):可重復(fù)使用;酶與產(chǎn)物易分離;耐熱性顯著提高;催化穩(wěn)定性有所改善;防止SCF與酶的化學(xué)相互作用而可能發(fā)生的酶構(gòu)象變化[9]。所以為了方便終反應(yīng)產(chǎn)物的檢測(cè),本研究中磷脂酶被固定在相應(yīng)載體上。

本研究的主要目的是將PLA2引入南極磷蝦磷脂酰膽堿改性使其結(jié)合更多的DHA,以提高其功能價(jià)值而達(dá)到高值化利用。此外,研究了催化劑PLA2在超臨界狀態(tài)下不同壓力、溫度、添加酶量、時(shí)間下的催化效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

PLA2(Lecitase? Ultra) 丹麥諾維信公司;南極磷蝦粉 山東科瑞爾生物技術(shù)有限公司;大豆磷脂酰膽堿(純度≥99%)、脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品 Sigma Aldrich公司;載體樹(shù)脂D380 鄭州勤實(shí)科技有限公司;CO2(純度99.9%) 環(huán)宇氣體公司;魚油(該魚油富含DHA和EPA,其含量分別為77%和5.7%。根據(jù)Garcia[10]等人的方法將該魚油皂化以制備富含DHA的游離脂肪酸) 河北海源健康生物科技公司;氫氧化鉀、鹽酸、硫酸、磷酸二氫鉀、硫酸聯(lián)氨、鉬酸鈉、無(wú)水硫酸鈉、丙酮、氯仿、甲醇 均為分析純(AR),國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

BS210S型電子分析天天平 上海梅特勒-托利多儀器有限公司;GC-2010pl7s氣相色譜儀 日本島津公司;722S型可見(jiàn)光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司;RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;超臨界反應(yīng)裝置 自組裝,如圖1所示;GF254薄層層析硅膠板 青島圣海精細(xì)硅膠化工有限公司。

圖1 超臨界CO2體系酶催化反應(yīng)裝置Fig.1 Device of supercritical CO2 system for enzyme reaction注:A:CO2罐,B:制冷機(jī),C:高壓泵,D:熱電偶,E:數(shù)顯電熱套,F:超臨界反應(yīng)罐,G:攪拌器,H:背壓調(diào)節(jié)器,P:壓力表。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 南極磷蝦磷脂酰膽堿的制備 采用乙醇提取法,將南極磷蝦粉與乙醇以1∶6 (g/mL)的比例混合攪拌均勻,搖床180 r/min,50 ℃,提取5 h。接下來(lái)進(jìn)行濾膜抽濾至澄清透明,真空濃縮上述提取的南極磷蝦油得南極磷蝦磷脂,接下來(lái)按1∶3 (g/mL)的比例加入冷丙酮,脫油處理(每次20 min),振搖,然后靜置分層,溫度維持在0 ℃以下至上層丙酮液澄清,倒去上層丙酮,用氮?dú)獯党龤堄嗟谋?獲得純度較高的南極磷蝦磷脂酰膽堿。將上述樣品再用乙醇溶解,添加氧化鋁,加入量為原料的10%(g/g),攪拌吸附,抽濾至澄清透明,真空濃縮后,再次使用冷丙酮脫油、脫色等,最終得精制磷脂酰膽堿(PC)[11]。

1.2.2 固定化 將PLA2酶液及等體積的緩沖液(0.033 mol/L Tris-HCl,0.01 mol/L CaCl2,pH8.0)混合,然后加入活化后的D380,置于在200 r/min,25 ℃下?lián)u床振蕩吸附12 h;收集過(guò)量的酶液,用于樹(shù)脂的蛋白吸附量的測(cè)定。隨后真空干燥(45 ℃,3 h)并在4 ℃下儲(chǔ)存待用[12]。

1.2.3 超臨界CO2體系中的酶促反應(yīng) 酶催化反應(yīng)使用本實(shí)驗(yàn)室自組裝的超臨界裝置,將游離DHA和磷脂酰膽堿按1∶6 (m/m)比例混合,置于搖床上混勻后,與固定化PLA2封閉在反應(yīng)罐中,迅速密封反應(yīng)釜,打開(kāi)CO2罐和進(jìn)出口閥門吹掃空氣,維持5 s。注意進(jìn)出口閥門在排空氣時(shí)不能開(kāi)太大,否則會(huì)將反應(yīng)底物隨著氣流吹出。打開(kāi)加熱開(kāi)關(guān),待溫度達(dá)到預(yù)設(shè)溫度時(shí),打開(kāi)加壓。達(dá)到預(yù)設(shè)壓力后,停止加壓,關(guān)閉CO2罐。打開(kāi)攪拌,設(shè)置轉(zhuǎn)速,開(kāi)始反應(yīng)。反應(yīng)停止后,緩慢降壓,從物料口回收反應(yīng)產(chǎn)物。

1.2.3.1 不同壓力下的酶催化反應(yīng) 溫度50 ℃,反應(yīng)時(shí)間7 h,轉(zhuǎn)速400 r/min,15%固定化酶添加量,固定化酶分別在10、12、14、16、18、20 MPa下反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后,回收樣品,然后將反應(yīng)混合物溶解在氯仿/甲醇(2∶1,V/V)溶液中,取微量溶液薄層色譜(TLC)展開(kāi),展開(kāi)劑氯仿∶甲醇∶水(65∶25∶4,V/V/V)。從TLC板上回收對(duì)應(yīng)于PC的條帶,提取并甲基化,然后進(jìn)行色譜分析[13-14]。

1.2.3.2 不同溫度下的酶催化反應(yīng) 壓力12 MPa,轉(zhuǎn)速400 r/min,15%固定化酶添加量,反應(yīng)時(shí)間7 h,酶水解溫度分別為30、35、40、45、50、55、60 ℃。反應(yīng)結(jié)束后分離純化方法參照1.2.3.1。

1.2.3.3 不同固定化酶添加量下的酶催化反應(yīng) 在50 ℃的溫度下,固定化PLA2的添加量(添加量(%)=固定化酶重量/總底物重量×100)為5%、10%、15%、20%、25%、30%,壓力12 MPa,旋轉(zhuǎn)速度400 r/min,反應(yīng)進(jìn)行7 h,反應(yīng)結(jié)束后分離純化方法參照1.2.3.1。

1.2.3.4 不同反應(yīng)時(shí)間下的酶催化反應(yīng) 在50 ℃,12 MPa和400 r/min下進(jìn)行反應(yīng),加入的PLA2的量為15%。酶水解時(shí)間分別為3、4、5、6、7、8、9 h,反應(yīng)結(jié)束后分離純化方法參照1.2.3.1。

1.2.4 分析方法

1.2.4.1 樹(shù)脂的蛋白吸附量和固定化磷脂酶活力測(cè)定 樹(shù)脂的蛋白吸附量定義為初始酶液中的蛋白量及過(guò)量酶液中的蛋白量的差值與固定化使用的樹(shù)脂量(mg/g)的比值。測(cè)定方法為考馬斯亮藍(lán)法,稱取一系列牛血清蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別加入5 mL考馬斯亮藍(lán)溶液,振蕩搖勻在25 ℃下靜置2 min,測(cè)定吸光度,然后繪制BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線[15]。

酶活力定義為:在一定條件下1 min水解磷脂產(chǎn)生1 μmol的游離脂肪酸所需要的酶量為一個(gè)磷脂酶活力單位(U/g),測(cè)定方法參照李響[16]等人。固定條件如下:0.033 mol/L Tris-HCl,0.01 mol/L CaCl2,pH8.0,吸附溫度25 ℃,吸附時(shí)間12 h,固定載體D380[17]。

1.2.4.2 磷脂酰膽堿含量測(cè)定 自制南極磷蝦磷脂酰膽堿含量測(cè)定根據(jù)韓軼等人[18]的方法改進(jìn)。取100 mg自制磷脂酰膽堿和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品溶于氯仿配制成一定濃度的磷脂酰膽堿溶液,準(zhǔn)備110 ℃活化1 h的硅膠板,將磷脂酰膽堿氯仿溶液用此硅膠板進(jìn)行層析。標(biāo)準(zhǔn)品溶液與樣品溶液點(diǎn)于同一硅膠板,配制好展開(kāi)劑氯仿∶甲醇∶水(65∶25∶4,V/V/V)后,轉(zhuǎn)移至層析缸里飽和0.5 h達(dá)到平衡即可使用[18]。硅膠板下端留出1.5 cm的距離,點(diǎn)樣直徑3 mm左右為宜,待展開(kāi)劑移動(dòng)至硅膠板距離上邊緣1 cm處結(jié)束層析。取出硅膠板,避光干燥后,放入碘缸內(nèi),密封。升華的碘蒸汽遇到磷脂酰膽堿后,顯出黃色的斑點(diǎn)。通過(guò)磷脂酰標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值為樣品定性。快速將磷脂酰膽堿的斑點(diǎn)從硅膠板刮下,使用鉬藍(lán)比色法測(cè)定其中的磷含量,再通過(guò)轉(zhuǎn)換系數(shù)換算成相應(yīng)的磷脂酰膽堿的含量,磷脂的換算系數(shù)為26.31[19]。

計(jì)算公式為:

1.2.4.3 樣品中脂肪酸含量的測(cè)定 從硅膠板刮下的磷脂酰膽堿的斑點(diǎn)用氯仿溶解,0.22 μm濾膜過(guò)濾后用氮?dú)庑⌒拇蹈?得到磷脂酰膽堿純品。甲酯化方法和氣相色譜條件參照Xi等人[20]的方法,之后使用氣相色譜-火焰離子化檢測(cè)器(GC-FID)對(duì)樣品進(jìn)行脂肪酸分析。

氣相色譜條件為:RTX-WAX石英毛細(xì)管柱(30 m);進(jìn)樣口溫度260 ℃,檢測(cè)器溫度260 ℃,進(jìn)樣量1 μL,分流比1∶15;載氣為高純氮?dú)?升溫程序:60 ℃,1 min;10 ℃/min升溫至190 ℃,2 ℃/min升溫至236 ℃后保持2 min[20]。

根據(jù)37種脂肪酸甲酯混標(biāo)的保留時(shí)間來(lái)確定樣品中脂肪酸組成,通過(guò)外標(biāo)法計(jì)算出不同脂肪酸甲酯的相應(yīng)因子,從而對(duì)樣品中的DHA進(jìn)行定量分析。

DHA含量(mol%)=[樣品中的DHA含量(mol)/樣品中的脂肪酸總量(mol)]×100

反應(yīng)完成后,將酶促反應(yīng)產(chǎn)物從取樣口排出,濾膜過(guò)濾后氮?dú)獗Ｗo(hù),冷凍保存,脂肪酸分析方法同1.2.4.3,磷脂酰膽堿得率計(jì)算公式如下:

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次,采用Origin 8.5和Excel 2013作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 樹(shù)脂的蛋白吸附量和固定化磷脂酶活力

BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。

圖2 BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of BSA solution

從圖2可以看出蛋白的含量與吸光度呈現(xiàn)線性關(guān)系,R2=0.9981,線性方程為:Y=5.365x-0.0191。

經(jīng)計(jì)算,PLA2的樹(shù)脂蛋白吸附量為66.23 mg/g,酶活為568.13 U/g,該固定化酶酶活表現(xiàn)良好,可以用于接下來(lái)的酶促反應(yīng)。

2.2 磷標(biāo)準(zhǔn)曲線

橫坐標(biāo)為磷含量,縱坐標(biāo)為吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,如圖3。磷的含量與吸光度呈良好的線性關(guān)系,R2=0.9991,線性方程為:Y=7.2116X+0.0054。

圖3 磷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Standard curve of the phosphorus content

通過(guò)換算,得出精制的南極磷蝦磷脂酰膽堿含量達(dá)到90.8%,可見(jiàn)分離純化方法可靠。純化后的南極磷蝦磷脂酰膽堿的純度高于市售大豆磷脂酰膽堿的純度(80%左右),這對(duì)接下來(lái)的反應(yīng)是十分有利的。

2.3 反應(yīng)壓力的影響

如圖4所示,最佳酶解壓力為12 MPa,此時(shí)樣品中DHA的含量最高,為59.3 mol%。當(dāng)壓力低于12 MPa時(shí),DHA含量呈增加的趨勢(shì),但是當(dāng)壓力高于12 MPa時(shí),DHA的含量反而降低,壓力10 MPa時(shí)的DHA含量高于14 MPa時(shí)的含量,在20 MPa時(shí)磷脂酰膽堿中DHA的含量?jī)H為36.6 mol%。然而磷脂酰膽堿的得率卻呈現(xiàn)與此相反的趨勢(shì),在12 MPa時(shí)磷脂酰膽堿的得率最低,而20 MPa時(shí)得率最高。這可能是因?yàn)榱字Ｄ憠A在PLA2催化下的酸解反應(yīng)與其在超臨界環(huán)境中的水解反應(yīng)有一定內(nèi)在的聯(lián)系,當(dāng)條件對(duì)酸解反應(yīng)有利時(shí),水解反應(yīng)也會(huì)加劇。

超臨界CO2流體的溶劑化能力可以根據(jù)反應(yīng)性能來(lái)定制,壓力通過(guò)直接改變反應(yīng)物的溶解度或反應(yīng)常數(shù)來(lái)影響反應(yīng)速率[21-22]。在超臨界環(huán)境中由于較高的流體密度,物質(zhì)的溶解度隨著壓力的增加而增加。此時(shí),反應(yīng)速率隨著壓力增加而增加。因此,在壓力比較低時(shí),壓力增加對(duì)于酶促反應(yīng)是有利的,但在超過(guò)一定閾值之后,可能反應(yīng)的活化能增加也可能是酶在高壓下失水過(guò)多,導(dǎo)致酶構(gòu)象發(fā)生改變,而逐步喪失活性。

圖4 壓力對(duì)DHA含量和PC得率的影響Fig.4 Effects of pressure on DHA contents and yields of PC

2.4 反應(yīng)溫度的影響

如圖5所示,PLA2的活性在55 ℃達(dá)到最大值61.1 mol%。這一結(jié)果與其他研究結(jié)論一致,即在恒定壓力下溫度升高可以激活酶[23],溫度升高,流體的傳質(zhì)速率和擴(kuò)散系數(shù)增加,使得酶與底物可以進(jìn)行充分有效的接觸[24]。55 ℃為最佳酶分解溫度,繼續(xù)升溫,DHA含量緩慢下降,這與酶活性受到高溫影響有關(guān)。

PC得率在55 ℃也同樣發(fā)生了明顯轉(zhuǎn)折,溫度高于55 ℃時(shí),PC得率不再增加反而為迅速降低。溫度升高,使磷脂酰膽堿穩(wěn)定性降低,且此時(shí)體系內(nèi)水分活度增加,這些都會(huì)加劇它的PC的水解。

圖5 溫度對(duì)DHA含量和PC得率的影響Fig.5 Effects of temperature on DHA contents and yields of PC

2.5 固定化酶添加量的影響

如圖6所示,在低添加量時(shí),增加酶劑量帶來(lái)更高的DHA含量。當(dāng)酶添加量為15%時(shí),DHA的含量達(dá)到最大值59.3 mol%,為最佳添加量。在一定范圍內(nèi),磷脂酶的濃度越大,活性中心越多,底物與酶的活性中心結(jié)合的概率越大,反應(yīng)速度也會(huì)越快;但酶相對(duì)于底物接近飽和時(shí),濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響減小,當(dāng)酶濃度過(guò)于飽和時(shí),DHA的含量變現(xiàn)為下降,因?yàn)槊笣舛鹊脑黾訉?dǎo)致水解也隨之增加。

圖6 固定化酶添加量對(duì)DHA含量和PC得率的影響Fig.6 Effects of immobilised enzyme to total substrates ratio on DHA contents and yields of PC

而固定酶添加量從5%增加到30%時(shí),PC得率下降了30%,這極有可能是因?yàn)榧用噶吭黾訉?dǎo)致水解副反應(yīng)增加。

2.6 反應(yīng)時(shí)間的影響

反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng),結(jié)合在磷脂酰膽堿上的酰基供體越多,然而長(zhǎng)時(shí)間的反應(yīng)也可導(dǎo)致?；w移等一些副反應(yīng)增加,PC得率逐漸下降,如圖7所示,反應(yīng)時(shí)間6 h為最佳酶解溫度,此時(shí)DHA的含量達(dá)到最大值59.6 mol%,之后呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。另外朱珊珊[25]在使用PLA1進(jìn)行催化合成富含共軛亞油酸磷脂的實(shí)驗(yàn)中反應(yīng)進(jìn)行72 h后共軛酸含量才達(dá)到27.6 mol%,說(shuō)明超臨界作為該反應(yīng)的介質(zhì)有明顯的優(yōu)勢(shì)。

圖7 反應(yīng)時(shí)間對(duì)DHA含量和PC得率的影響Fig.7 Effects of time on DHA contents and yields of PC

2.7 改性磷脂的脂肪酸組成

在酶促反應(yīng)之前,原料磷脂酰膽堿上的主要脂肪酸是肉豆蔻酸(C14∶0=6.4 mol%),棕櫚酸(C16∶0=19.7 mol%),油酸(C18∶1n-9=8.9 mol%),EPA(C20∶5n-3=22.2 mol%)和DHA(C22∶6n-3=17.3 mol%)。與原料相比,在最優(yōu)的超臨界反應(yīng)條件下,改性磷脂酰膽堿的上述脂肪酸含量有所降低,但是其中EPA從22.2 mol%略微增加至24.0 mol%,DHA的含量從17.3 mol%上升至62.3 mol%。這說(shuō)明超臨界反應(yīng)介質(zhì)中在PLA2催化下DHA成功地結(jié)合到磷脂酰膽堿上了。

注:每個(gè)分析都重復(fù)三次,結(jié)果取平均值。

3 結(jié)論

使用PLA2在超臨界CO2體系中催化磷脂酰膽堿的Sn-2位脂肪酸水解,使游離DHA結(jié)合到磷脂酰膽堿的Sn-2位制備高DHA含量的DHA-PC,并研究了酶添加量、時(shí)間、溫度和壓力參數(shù)對(duì)該工藝的影響。得到最佳酶分解條件分別為:固定化PLA2的添加量15%(占總底物),時(shí)間為6 h,溫度為55 ℃,壓力為12 MPa。在此條件下,南極磷蝦磷脂酰膽堿中DHA的含量從17.3 mol%(原料)上升至62.3 mol%,說(shuō)明固定化PLA2可用于高DHA含量DHA-PC的制備實(shí)驗(yàn)中,且在超臨界CO2體系中有較好的催化活性。

此外,磷脂酶的作用機(jī)制是復(fù)雜的。有很多因素影響酶發(fā)揮作用,這些影響因素相互作用,表現(xiàn)出協(xié)同或拮抗作用。例如,據(jù)報(bào)道,底物和產(chǎn)物的在體系中的濃度取決于壓力/溫度組合,并且物質(zhì)在超臨界CO2中的溶解度的增加是隨著溫度的升高實(shí)現(xiàn)的[26]。因此,進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究將涉及多因素相互作用對(duì)該酶催化反應(yīng)的影響。

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CatalyticsynthesisofDHA-PCwithhighDHAcontentsbyphospholipaseA2insupercriticalCO2system

LIZhen-zhen,XUFei-yue,HANYu-qian*,LINHong,FENGXiao-mei

(College of Food Science and Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China)

TS218

A

1002-0306(2017)18-0085-06

2017-04-05

李珍珍(1990-),女,在讀碩士研究生,研究方向:食品加工與功能食品,E-mail:lixueping0628@163.com。

*通訊作者:韓玉謙(1962-),男,博士,教授,從事超(亞)臨界方面的研究,E-mail:hanyuqian@ouc.edu.cn。

國(guó)家自然科學(xué)基金(31071541);長(zhǎng)江學(xué)者與創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(TRT1188)。

10.13386/j.issn1002-0306.2017.18.017