硫辛酸注射液與木糖醇和果糖注射液的配伍穩(wěn)定性考察

甘惠貞，林淑瑜，潘丹婷，楊昌云

0 引言

糖尿病患者長期高血糖造成微血管內(nèi)皮病變，導(dǎo)致神經(jīng)缺血、缺氧，引起氧化應(yīng)激增強(qiáng)，自由基生成增加，引發(fā)一系列氧化反應(yīng)，最終導(dǎo)致神經(jīng)損傷[1]。硫辛酸(ALA)是一種獨特的氧化-還原雙向氧化應(yīng)激強(qiáng)效抑制劑，可清除氧化應(yīng)激的終末產(chǎn)物，清除自由基等其他抗氧化劑[2-4]。ALA主要通過抑制脂質(zhì)過氧化，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，增加神經(jīng)營養(yǎng)血管的血流量，增加神經(jīng)Na+-K+-ATP酶的活性等機(jī)制，改善糖尿病周圍神經(jīng)病變的癥狀[5-6]，改善氧化應(yīng)激狀態(tài)，對糖尿病慢性并發(fā)癥的防治具有良好效果[7]。硫辛酸注射液的活性成分含有二硫鍵，因此，說明書用法是加入生理鹽水靜脈滴注，配好的輸液用鋁鉑紙包裹避光，6 h內(nèi)可保持穩(wěn)定[7]。且不能與葡萄糖溶液、林格氏溶液及所有可能與巰基或二硫鍵起反應(yīng)的溶液配伍使用。但是在臨床應(yīng)用過程中常遇見糖尿病合并高鈉血癥，單一溶媒的要求讓硫辛酸的使用受到了限制。為了能滿足這些特殊病理生理需求的患者用藥，本試驗通過高效液相色譜法來測定硫辛酸與木糖醇注射液或果糖注射液配伍后硫辛酸的含量變化，以探索其配伍的穩(wěn)定性，為臨床用藥提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Ultimate3000高效液相色譜儀(賽默飛中國有限公司)；JA2003電子分析天平(上海方瑞儀器有限公司)；PHS-3C型實驗室pH計(上海誠寧環(huán)?？萍加邢薰?。

1.2 藥品與試藥 硫辛酸注射液(上?，F(xiàn)代哈森藥業(yè)有限公司，規(guī)格：20 mL∶0.6 g，批號：11060621)；硫辛酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：MUST-11072905，HPLC純度≥98%)；10%果糖注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：250 mL，批號：F11040913-1)；木糖醇注射液(上海華中藥業(yè)有限公司，規(guī)格：250 mL，批號：F11030504)；0.9%氯化鈉注射液(浙江天瑞藥業(yè)有限公司，規(guī)格：250 mL，批號：211062303)；乙腈(美國進(jìn)口Fisher 色譜醇)、磷酸二氫鉀(美國進(jìn)口MREDA色譜醇)；水為超純化水(本院消毒供應(yīng)室提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[8]色譜柱：Acclaim C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：0.005 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH=3.0)-乙腈(50∶50)；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：212 nm；進(jìn)樣量：5 μL。

2.2 對照品及樣品溶液的制備

2.2.1 對照品儲備溶液的制備 精密稱取硫辛酸對照品200 mg，置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，避光、即得。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密吸取對照品儲備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，避光、即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取硫辛酸注射液1 支(600 mg)，置于30 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，0.22 μm的微孔濾膜濾過，避光。精密吸取續(xù)濾液1 mL，置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，避光、即得。

2.2.4 配伍溶液的制備 模擬臨床應(yīng)用配制，將硫辛酸注射液1支(600 mg)分別加入溶媒0.9% NS 250 mL、木糖醇注射液250 mL及果糖注射液250 mL中并混合均勻，避光、即得。

2.3 方法專屬性考察 酸破壞：取制備對照品溶液10 mL，加0.1 mol/L HCL溶液1.0 mL溶解，放置6 h，用0.1 mol/L NaOH溶液調(diào)pH至中性。堿破壞：取制備對照品溶液10 mL，加0.1 mol/L NaOH 溶液1.0 mL溶解，放置6 h，用0.1 mol/L HCL溶液調(diào)pH值至中性。高溫破壞：取制備對照品溶液10 mL，80 ℃水浴加熱6 h，冷卻至室溫。光照破壞：取制備對照品溶液10 mL，強(qiáng)光(4 500 Lx)照射6 h。分別將以上破壞后的溶液按“2.1”色譜條件進(jìn)樣測定。由破壞試驗結(jié)果表明，本品經(jīng)酸、堿、光照、高溫破壞后，樣品雜質(zhì)峰均有所增加，且所產(chǎn)生的雜質(zhì)與主峰充分分離，其保留時間與未破壞樣品溶液色譜圖中的吸收峰一致。見圖1。

圖1 破壞性試驗結(jié)果

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取硫辛酸儲備液適量，加流動相定量稀釋制成系列濃度為2.00、1.00、0.50、0.25、0.12、0.06 mg/mL的溶液，分別進(jìn)樣5 μL。以硫辛酸的質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A=70.225 C+1.557 5(r=0.999 7)。表明硫辛酸檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.06～2.00 mg/mL。

2.5 精密度試驗 精密吸取硫辛酸對照品儲備液適量，制成高、中、低3種不同濃度(2.0、1.0、0.5 mg/mL)的標(biāo)樣液各5份，同日測定并連續(xù)測定5 d，計算峰面積，得日內(nèi)RSD分別為0.166%、0.212%、0.339%；日間RSD分別為0.655%、0.397%、0.514%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗 按照供試品溶液制備方法制備成濃度為2.0 mg/mL的供試品溶液6份，進(jìn)樣測定，測得峰面積RSD=0.215%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗 精密量取濃度為1.102 6 mg/mL的供試品溶液100、500、800 μL各3份，分別置于10 mL容量瓶中，分別加入濃度為0.313 7 mg/mL的對照品溶液500、1 000、1 500 μL，每個濃度平行3份，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取5 μL進(jìn)樣，計算回收率和RSD，見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.8 穩(wěn)定性試驗 硫辛酸注射液供試溶液在避光和不避光(供試液不套用避光袋，放置在室內(nèi))的條件下于0、1、2、3、8、24 h分別進(jìn)行測定，以(0 h)的含量為100%，換算出百分含量，結(jié)果顯示，在避光的條件下硫辛酸注射液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，不避光的條件下，在第3小時時硫辛酸的含量為86.45%，已降解低于90%。見表2。

表2 硫辛酸穩(wěn)定性測定結(jié)果(%)

2.9 硫辛酸與木糖醇、果糖配伍穩(wěn)定性試驗 取配好后的配伍藥液(避光)即刻(0 h)及加藥后不同時間(1、2、4、6、8、12、24 h)取樣進(jìn)行藥液pH值和硫辛酸含量測定。從含量測定的結(jié)果得出，硫辛酸在0.9%生理鹽水和木糖醇注射液兩種溶媒中24 h內(nèi)含量幾乎無變化；但是在果糖注射液中不穩(wěn)定，4 h時降解至89.98%，24 h后降解至64.47%。溶液pH值、顏色的測定結(jié)果得出，在3種溶媒中，溶液的pH值均無明顯變化，在生理鹽水、木糖醇溶液中的pH分別是7.9、7.7，與硫辛酸注射液(pH=8.0)接近，但果糖溶液中的pH值為7.1，比生理鹽水、木糖醇溶液的pH值低，且24 h內(nèi)溶液的顏色澄清度由無色變?yōu)榈S色、棕黃色、紅棕色、紅棕色絮狀物。圖2-D和圖2-E色譜圖結(jié)果比較顯示，硫辛酸與果糖配伍24 h后，硫辛酸的最大吸收峰明顯下降，保留時間在3～5 min處增加了許多小分解峰。見表3～表5、圖2。

表3 硫辛酸與不同溶媒配伍后含量變化(%)

表4 硫辛酸與不同溶媒配伍pH值變化

表5 硫辛酸與不同溶媒配伍后顏色變化

圖2 各類型的色譜吸收圖譜

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 參考文獻(xiàn)[9]，選擇“2.1”色譜條件，在該色譜條件下(見圖2-B～圖2-E)，保留時間7.3 min處為硫辛酸的吸收峰，圖2-A和圖2-B分別為木糖醇和果糖在該色譜條件下的吸收峰，在2.1～3.0 min處的吸收峰為果糖的吸收峰。

3.2 硫辛酸與木糖醇、果糖的配伍穩(wěn)定性 硫辛酸注射液在0.9%生理鹽水、木糖醇注射液中的配伍含量24 h內(nèi)幾乎無變化，pH值幾乎無變化。從含量、pH值、顏色澄清度及色譜圖測定結(jié)果可得出，硫辛酸在0.9%生理鹽水和木糖醇注射液的溶媒中24 h內(nèi)穩(wěn)定好；而在果糖注射液中不穩(wěn)定，因果糖的pH=3.68為弱酸性，易引起硫辛酸中的巰基或二硫鍵的分解，導(dǎo)致溶液顏色的變化，所以不適宜與果糖配伍。因此對于限制鈉攝入的糖尿病患者使用硫辛酸可選擇木糖醇注射液作為溶媒。

4 結(jié)論

本文采用HPLC法的色譜條件可以用于測定硫辛酸含量，來考察硫辛酸與木糖醇注射液、果糖注射液配伍穩(wěn)定性，操作簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。硫辛酸注射液可與0.9%生理鹽水、木糖醇注射液配伍，不宜與果糖注射液配伍，并且使用精密過濾避光輸液器輸注，可有效減少藥液中的微粒，避免輸液反應(yīng)的發(fā)生[10]。

參考文獻(xiàn)：

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