阿托伐他汀對高血壓患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)及PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα蛋白表達的影響

林 捷 阮長武 葛智儒 黃 宇

(上海市浦東新區(qū)公利醫(yī)院心血管內(nèi)科，上海 200135)

阿托伐他汀對高血壓患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)及PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα蛋白表達的影響

林 捷 阮長武 葛智儒 黃 宇

(上海市浦東新區(qū)公利醫(yī)院心血管內(nèi)科，上海 200135)

目的探討阿托伐他汀對高血壓患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)及PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα蛋白表達的影響。方法88例高血壓患者通過隨機數(shù)表法分為研究線和對照組各44例。對照組采用高血壓基礎(chǔ)干預(yù)措施，研究組在對照組干預(yù)基礎(chǔ)上加用阿托伐他汀，兩組均持續(xù)治療2個月。對比兩組臨床療效，分析治療前后兩組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ER stress)標(biāo)記蛋白(Ero1-Lα、BiP、IRE1α、PERK)、血管內(nèi)皮功能指標(biāo)〔內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)、肱動脈血流介導(dǎo)血管擴張率(FMD)〕、血清炎癥因子〔白細(xì)胞介素(IL)-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)〕水平變化。結(jié)果研究組總有效率高于對照組(P<0.05)；治療前兩組Ero1-Lα、BiP、IRE1α、PERK光密度值對比無明顯差異(P>0.05)，治療后兩組各指標(biāo)水平較治療前降低，且研究組均低于對照組(均P<0.05)；治療前兩組ET、NO、FMD水平比較無明顯差異(P>0.05)，治療后兩組各指標(biāo)水平較治療前改善，且研究組ET水平低于對照組，NO、FMD水平高于對照組(P<0.05)；治療前研究組IL-6、TNF-α、hs-CRP水平與對照組比較無明顯差異(P>0.05)，治療后兩組炎癥因子水平均降低，且研究組均低于對照組(P<0.05)。結(jié)論采用阿托伐他汀治療高血壓患者可有效降低PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα蛋白及血清炎癥因子表達水平，促使血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)，提高治療效果。

阿托伐他?。桓哐獕?；血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)記蛋白

高血壓發(fā)病初期無特異性臨床癥狀，但危害較高，血管、腎、心等均為其生理病理作用主要靶器官〔1〕。高血壓最重要及最早期損害類型為血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，正常生理狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞對血管收縮因子內(nèi)皮素(ET)與舒張因子一氧化氮(NO)的分泌維持于動態(tài)平衡狀態(tài)，可保證血管正常結(jié)構(gòu)及功能，若血壓增高會使ET及NO分泌失衡，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，進而引發(fā)心腦血管疾病〔2〕。Mason等〔3〕研究指出，高血壓時ET-1分泌量增多可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)皮網(wǎng)應(yīng)激(ER stress)反應(yīng)，致使細(xì)胞損傷及凋亡。阿托伐他汀能否改善高血壓血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷等尚缺乏循證醫(yī)學(xué)證據(jù)〔4〕。本研究旨在探討阿托伐他汀對高血壓血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)及PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα蛋白表達的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 抽取2015年4月至2016年7月上海市浦東新區(qū)公利醫(yī)院88例高血壓患者，隨機數(shù)表法分為研究組與對照組各44例。對照組女21例，男23例；年齡53～72〔平均(62.37±7.96)〕歲；病程3.4～12.6年，平均(8.31±3.02)年。研究組女19例，男25例；年齡51～73〔平均(62.50±8.01)〕歲；病程3.2～12.8年，平均(8.19±2.97)年。兩組病程、性別、年齡等基線資料無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：人民衛(wèi)生出版社第8版《內(nèi)科學(xué)》中高血壓臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)<30.0 kg/m2；知情同意。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：并發(fā)腎實質(zhì)性高血壓、腎血管性高血壓、藥物性高血壓等繼發(fā)性高血壓患者；并發(fā)心律失常、心肌病、心力衰竭、心臟瓣膜病者；哺乳期或妊娠期女性；對阿托伐他汀具有過敏史或過敏體質(zhì)者。

1.3方法 對照組采用高血壓基礎(chǔ)干預(yù)措施，包括適量運動、飲食控制等，并給予β受體阻滯劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)、鈣離子通道阻滯劑(CCB)、利尿劑等。研究組在對照組干預(yù)基礎(chǔ)上加用阿托伐他汀(浙江新東港藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20133127)，晚間睡前口服20 mg/次，1次/d。兩組均持續(xù)治療2個月。

1.4觀察指標(biāo) (1)統(tǒng)計兩組患者臨床療效，收縮壓降低≥20.0 mmHg或舒張壓降低≥10.0 mmHg為顯效；收縮壓降低10.0～20.0 mmHg或舒張壓降低<10.0 mmHg為有效；舒張壓及收縮壓降低未至上述標(biāo)準(zhǔn)為無效；總有效率=(顯效+有效)/總例數(shù)×100.0%〔6〕。(2)分別于治療前后抽取兩組空腹靜脈血3 ml，以細(xì)胞免疫化學(xué)熒光法對ER stress標(biāo)記蛋白(Ero1-Lα、BiP、IRE1α、PERK)進行檢測，并通過定量技術(shù)計算各指標(biāo)光密度值。(3)對比治療前后兩組血管內(nèi)皮功能指標(biāo)〔ET、NO、肱動脈血管流介導(dǎo)血管擴張率(FMD)〕變化情況，以硝酸還原酶法檢測NO水平，以放射免疫法檢測ET水平，于血管舒張末期對肱動脈內(nèi)徑予以測量，取平均值為D0，于肘關(guān)節(jié)以上加壓300.0 mmHg，持續(xù)約4 min后迅速放松血壓帶，放氣約15 s后再次測量舒張末期肱動脈內(nèi)徑為D1，F(xiàn)MD=(D1-D0)D0×100.0%。(4)分別于治療前后通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定兩組血清炎癥因子高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-6水平。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0軟件進行t、χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1兩組臨床療效比較 研究組總有效率(93.18%，顯效29例，有效12例，無效3例)高于對照組(77.27%，顯效15例，有效19例，無效10例；χ2=4.422,P<0.05)。

2.2兩組ER stress標(biāo)記蛋白光密度值比較 治療前兩組PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα光密度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，治療后兩組各指標(biāo)水平較治療前降低，且研究組均低于對照組(P<0.05)。見表1。

2.3兩組血管內(nèi)皮功能指標(biāo)比較 治療前兩組ET、NO、FMD

表1 兩組ER stress標(biāo)記蛋白光密度值比較

與治療前比較：1)P<0.05；下表同

水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，治療后兩組各指標(biāo)較治療前改善，且研究組ET水平低于對照組，NO、FMD水平高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血管內(nèi)皮功能指標(biāo)比較

2.4兩組血清炎癥因子水平比較 治療前兩組IL-6、TNF-α、hs-CRP水平無明顯差異(P>0.05)，治療后兩組炎癥因子水平均降低，且研究組均低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組炎癥因子水平比較

3 討 論

高血壓為臨床常見疾病，明確高血壓發(fā)病及進展機制對防治高血壓疾病具有積極意義。血管內(nèi)皮細(xì)胞是全身血管內(nèi)膜重要屏障結(jié)構(gòu)，同時為機體主要信號感受及傳遞組織〔7〕。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為保持血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的亞細(xì)胞器，適當(dāng)程度ER stress可有效保護細(xì)胞，但持續(xù)時間過長會導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷、凋亡，進而引發(fā)相關(guān)反應(yīng)加速高血壓發(fā)病及進展。

內(nèi)皮功能紊亂始動因素之一為高血壓，血壓水平上升可改變血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能。張勁松〔8〕研究表明，血壓過高會損傷內(nèi)皮細(xì)胞，且兩者呈正相關(guān)關(guān)系，脈壓差增大為損傷高血壓患者內(nèi)皮功能的主要因素。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)屬真核細(xì)胞重要細(xì)胞器，是蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)成熟及脂類合成的場所之一，質(zhì)膜蛋白、分泌蛋白、高爾基體蛋白及溶酶體三級與四級結(jié)構(gòu)均于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中進行折疊，且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是主要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞器，在內(nèi)環(huán)境改變的感應(yīng)及適應(yīng)中具有重要作用。若蛋白質(zhì)錯誤折疊則會引發(fā)脂質(zhì)合成紊亂、鈣離子耗竭等現(xiàn)象，同時，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡，會激活對應(yīng)信號通路，引發(fā)細(xì)胞內(nèi)多種反應(yīng)，即ER stress。Jimenez等〔9〕指出，ER stress反應(yīng)早期可抑制蛋白合成，改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)降解過程，并通過恢復(fù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定而對細(xì)胞進行保護，但ER stress持續(xù)未得到緩解則會誘導(dǎo)凋亡通路致使細(xì)胞死亡。

近些年，ER stress在內(nèi)皮細(xì)胞中的作用得到臨床醫(yī)學(xué)廣泛重視，并認(rèn)為其可能介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞參與腫瘤、動脈粥樣硬化、糖尿病等疾病生理病理過程。Yang等〔10〕實驗表明，ER stress標(biāo)記蛋白中，Bip為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)感受器，在ERstree激活及檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)未折疊蛋白質(zhì)聚集中具有重要作用。若內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處于穩(wěn)態(tài)，則BiP分別與IRE1、ATF6、PERK暴露于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)的結(jié)構(gòu)域結(jié)合，但當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡，則會引起大量未折疊蛋白聚集，導(dǎo)致BiP與IRE1、ATF6、PERK解離，并與未折疊蛋白質(zhì)相結(jié)合，促使蛋白質(zhì)正確折疊。本研究結(jié)果有力佐證阿托伐他汀對降低PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα蛋白表達水平、促使高血壓血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)、提高治療效果方面具有較高臨床價值。阿托伐他汀屬羥甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶抑制劑，可對膽固醇于肝臟中的生物合成過程產(chǎn)生抑制作用，并促使機體對低密度脂蛋白攝取、分解代謝，抗動脈粥樣硬化、調(diào)脂效果顯著，可通過降低血管壁炎癥因子表達水平發(fā)揮降血壓效果，進而改善內(nèi)環(huán)境，緩解ER stress反應(yīng)。耿全勝等〔11〕研究表明，阿托伐他汀可激活NOS促使內(nèi)皮細(xì)胞生成NO，并對NOS的mRNA表達水平產(chǎn)生影響，抑制血管平滑肌細(xì)胞活性，從多種途徑改善高血壓患者內(nèi)皮功能。另從本研究表明阿托伐他汀不僅能降低高血壓患者PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα蛋白水平，緩解ER stress反應(yīng)，且能降低血清炎癥因子表達水平。Rakotoniaina等〔12〕研究表明，阿托伐他汀除降血脂效果顯著，同時可減少ET生成量，提高NO表達水平，而原發(fā)性高血壓患者內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)主要機制為NO合成量減少、ET大量釋放等，阿托伐他汀可對G蛋白代謝水平產(chǎn)生干擾作用，降低hs-CRP、TNF-α等炎癥因子表達水平，減輕炎癥反應(yīng)，并抑制神經(jīng)內(nèi)分泌活化，以此提高血管內(nèi)皮功能，改善臨床療效。

1李 敏,孫 玲,李紅玲,等.阿托伐他汀減輕氧化型低密度脂蛋白導(dǎo)致的人微血管內(nèi)皮細(xì)胞活化和損傷〔J〕.中國藥理學(xué)通報,2014;30(5):679-83.

2韓 冰,周進超,盧福建.不同劑量阿托伐他汀對高血壓合并高脂血癥患者血管內(nèi)皮功能的影響〔J〕.實用心腦肺血管病雜志,2014;22(7):70-1.

3Mason JJ,Corbalan RF,Dawoud T,etal.Atorvastatin enhanced nitric oxide release and reduced blood pressure,nitroxidative stress and rantes levels in hypertensive rats with diabetes〔J〕.J Physiol Pharmacol,2015;66(1):65-72.

4陳 偉,張亞西.硝苯地平控釋片聯(lián)合阿托伐他汀治療高血壓合并冠心病及對超敏C反應(yīng)蛋白及血管內(nèi)皮功能的影響〔J〕.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2015;12(1):40-2.

5葛均波,徐永健.內(nèi)科學(xué)〔M〕.第8版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:257-68.

6王湘富,賀志偉,張 平,等.貝那普利聯(lián)合阿托伐他汀對老年高血壓患者血管內(nèi)皮舒張功能及高敏C反應(yīng)蛋白、胰島素水平改善的研究〔J〕.實用老年醫(yī)學(xué),2014;28(8):672-4.

7張 玲,張 蕾.阿托伐他汀對高血壓患者血清炎性因子、血管內(nèi)皮功能及血脂水平的影響〔J〕.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2015;21(7):905-7.

8張勁松.氨氯地平聯(lián)合阿托伐他汀治療老年高血壓的效果及其作用機制〔J〕.山東醫(yī)藥,2015;55(13):40-1.

9Jimenez D,Cremonezzi LI,Juncos NH,etal.Statins reverse renal inflammation and endothelial dysfunction induced by chronic high salt intake〔J〕.Am J Physiol,2011;301(2):263-70.

10Yang L,Gao YJ,Lee RM.The effects of quinapril and atorvastatin on artery structure and function in adult spontaneously hypertensive rats〔J〕.Eur J Pharmacol,2005;518(2):145-51.

11耿全勝,樊超強,李衛(wèi)平,等.不同劑量的阿托伐他汀鈣對血脂正常的高血壓患者血管內(nèi)皮功能的影響〔J〕.中國藥房,2014;25(4):348-50.

12Rakotoniaina Z,Guerard P,Lirussi F,etal.The protective effect of HMG-CoA reductase inhibitors against monocrotaline-induced pulmonary hypertension in the rat might not be a class effect:comparison of pravastatin and atorvastatin〔J〕.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol,2006;374(3):195-206.

〔2017-06-20修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

R543

A

1005-9202(2017)19-4803-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.050

上海市浦東新區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)學(xué)科帶頭人附帶課題(No.PWRd2015-11)

阮長武(1961-)，男，博士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要從事心內(nèi)科疾病研究。

林 捷(1974-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事心血管內(nèi)科疾病研究。