骨橋蛋白的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系

童雪影 陳 敏 祝河忠 梁 惠 潘慶敏

(湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院,湖北 十堰 442000)

骨橋蛋白的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系

童雪影 陳 敏 祝河忠 梁 惠 潘慶敏

(湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院,湖北 十堰 442000)

目的探討骨橋蛋白(OPN)的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系。方法收集健康青年(40歲以下)、中年(40～65歲)、老年組(>65歲)，并經(jīng)冠脈造影結(jié)果診斷無冠心病的血清標本各20份，并收集冠心病非老年組(<65歲)及冠心病老年組(>65歲)標本各20例，所有冠心病患者診斷均以冠脈造影結(jié)果為準，并進行Western印跡法檢測OPN的含量，并同時采集各組吸煙史，飲酒史，血脂等生化指標。結(jié)果OPN在老年組中呈陽性表達，而在青、中年組呈陰性；老年組、中年組及青年組OPN光密度值分別為7.34×104±8.97×103，1.34×103±4.15×102，1.58×102±0.096× 102，各組間差異顯著(F=4.29，P=0.02)；OPN在冠心病非老年組和老年組間表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。結(jié)論OPN存在增齡性變化，當存在冠脈病變時，OPN不再有年齡差異，可能對冠心病的發(fā)生存在作用。

增齡；骨橋蛋白；冠心病

正常情況下骨橋蛋白(OPN)最先于破骨細胞中發(fā)現(xiàn)，是源于單核細胞系的具有骨吸收功能的多核細胞，在許多骨質(zhì)的疾病中起重要作用，如骨質(zhì)疏松〔1〕、牙周炎等疾病，目前發(fā)現(xiàn)在多種細胞中均有表達，如骨細胞、成骨細胞、神經(jīng)細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞，主要通過激活細胞內(nèi)特異性信號傳導系統(tǒng)而介導細胞黏附、遷移、增殖〔2〕。但老年患者中是否存在增齡性O(shè)PN改變，OPN是否參與年齡增長后老年人動脈粥樣硬化的改變并不十分明確。本實驗擬觀察OPN的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機采取青年組(20～39歲)，中年組(40～65歲)，老年組(>65歲)，冠脈造影結(jié)果陰性，血樣標本各20份，并收集太和醫(yī)院心內(nèi)科冠脈造影結(jié)果陽性者40份，并按年齡分為冠心病非老年組及老年組各20份，所有冠心病診斷患者均以冠脈造影結(jié)果為準，所有標本均選取非吸煙飲酒者。

1.2方法 Western印跡法將收集到的血液標本放入低溫高速離心機中3 000 r/min離心，取上清，常規(guī)勻漿，提蛋白，蛋白質(zhì)變性。采用考馬斯亮藍比色法檢測蛋白濃度，進行SDS-PAGE 電泳。電泳完畢后用去離子水沖洗干凈，使用三明治電轉(zhuǎn)法，將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，然后置于5%的脫脂奶粉中封閉，4℃下過夜。棄去封閉液，用PBST漂洗2～3次，加入按1∶50稀釋后的一抗，室溫下于搖床孵育2 h，PBST漂洗后，加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗鼠二抗，室溫下于搖床孵育1 h，PBST漂洗后進行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，最后以Gel pro4.0 版凝膠光密度分析軟件進行測量分析。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

OPN在老年組中均為陽性表達；而在青年組和中年組表達量較少，見圖1。各組OPN光密度值：青年組(1.58×102±0.96×102)，中年組(1.34×103±4.15×102)，老年組(7.34×104±8.97×103)。青年組與中年組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，老年組與青年及中年組表達有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)。冠心病非老年組OPN光密度值(4.35×102±7.01×102)與老年組(6.01×104±6.27×104)無明顯差異(P>0.05)。

圖1 各組OPN表達

3 討 論

OPN具有平衡骨代謝，參與組織修復，調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)降解，介導血管平滑肌細胞轉(zhuǎn)型，促進動脈粥樣硬化和鈣化以及機體的免疫炎癥反應(yīng)等等諸多的生理和病理功能〔3～5〕。前期工作已發(fā)現(xiàn)OPN在人胸主動脈瘤及腹主動脈瘤中均存在重要作用，并在動物實驗中也得到同樣結(jié)果〔6，7〕。而OPN最早及最多被發(fā)現(xiàn)為破骨細胞產(chǎn)生的一種非膠原蛋白，研究表明OPN可促進平滑肌細胞的黏附功能，促進冠心病等血管內(nèi)炎癥細胞附著于病變血管，進而分泌多種炎癥因子，促進炎癥細胞及血脂黏附于病變血管，加速冠脈血管狹窄的發(fā)展，從而成為冠心病的重要原因之一〔8〕。本文結(jié)果提示OPN存在增齡性變化。Jono等〔9，10〕研究表明細胞所分泌的OPN有磷酸化和未磷酸化兩種形式，而其磷酸化與其功能密切相關(guān)，磷酸化后的OPN與細胞表明整合素受體結(jié)合，進而發(fā)揮其在炎癥細胞中促進其黏附功能的作用及血管平滑肌細胞鈣化作用。OPN在老年人群中含量的增高，提示人體老年化后可能造成磷酸化形式存在的OPN增高，而根據(jù)OPN在冠心病中多種作用，使老年人出現(xiàn)冠心病風險明顯增高。在已存在冠心病患者中，病變冠脈中OPN持續(xù)分泌，并發(fā)揮其促炎癥作用，而其相關(guān)致病機制可能為促進炎癥細胞黏附功能，但仍需要實驗驗證，而在老年人中其含量增高，可能使其患冠心病風險增高，綜上所述，OPN存在增齡性變化，可能是冠心病發(fā)生及發(fā)展的重要因子。由于冠心病是一個多個發(fā)病機制共同作用的復雜的病變過程，OPN在其中的具體作用機制還有許多不明確之處，仍需要進行更加深入的探索和研究。

1Kanis JA，McCloskey EV，Johansson H，etal.Guidlines for diagnosis and management of osteoprosis in post menopausal women〔J〕.Osteoporosis Int，2012；24(1)：23-57.

2Eun H，Keun H,Kim SW,etal.High serum osteopontin levels are associated with low bone mineral density in postmenopausal women〔J〕.J Korean Med Sci，2013；28(10)：1496-9.

3Xu G，Nie H，Li N.Role of osteopontin in amplification and perpetuation of rheumatoid synovitis〔J〕.J Clin Invest,2005;115(4)：1060-7.

4Yumoto K，Ishijima M，Ritting SR，etal.Osteopontin deficiency protects joints against destruction in anti-type Ⅱ collagen antibody-induced arthritis in mice〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2002;99(7)：4556-61.

5柴錫慶，鄭 斌，溫進坤,等.骨橋蛋白制備及功能研究〔J〕.中國老年學雜志,2004;24(8)725-7.

6Mi T，Nie B，Zhang C.The elevated expression of osteopontin and NF-kB in human aortic aneurysms and its implication〔J〕.J Huazhong Univ Sci Technol Med Sci,2011；31(5)：602-7.

7童雪影,武亞麗,周洪蓮，等.大鼠腹主動脈瘤發(fā)生與骨橋蛋白及核因子-kB表達的關(guān)系〔J〕.中華實驗外科雜志,2012;29(11)：2150-2.

8Huang W，Carlsen B，Miller TA，etal.Osteopontin is a negative regulator of proliferation and differentiation MC3T32EI preosteoblastic cells〔J〕.Bone，2004;34(5)：799-808.

9Jono S，Peinado C，Giachelli CM,etal.Phosphorylation of osteopntin is required for inhibition of vascular smooth muscle cell calcification〔J〕.Biol Chem，2000;275(4)：20197-203.

10Christensen B，Nielsen MS，Sorensen ES,etal.Posttranslationally modified residues of native human osteopontin are located in clusters：identification of 36 phosphorylation and five glycosylation sites and their biochemical implication〔J〕.Biochem J，2005;390：285-92.

〔2016-04-23修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

R541.4

A

1005-9202(2017)19-4790-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.044

湖北省教育廳科學研究計劃資助項目(D20152101)

潘慶敏(1963-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事心血管疾病研究。

童雪影(1985-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事老年心血管病研究。