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    五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴對糖尿病心肌病大鼠心率變異性及心肌細(xì)胞凋亡的影響

    2017-10-13 08:01:51肖鳳英崔金濤張壓西
    中國老年學(xué)雜志 2017年19期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)關(guān)關(guān)穴頻域

    肖鳳英 崔金濤 張壓西 賀 勁 李 敏 張 軍

    (武漢市中醫(yī)醫(yī)院,湖北 武漢 430014)

    五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴對糖尿病心肌病大鼠心率變異性及心肌細(xì)胞凋亡的影響

    肖鳳英 崔金濤 張壓西 賀 勁 李 敏 張 軍

    (武漢市中醫(yī)醫(yī)院,湖北 武漢 430014)

    目的觀察五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴對糖尿病心肌病(DCM)大鼠心率變異性(HRV)及心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法50只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、五參組、內(nèi)關(guān)組和五參+內(nèi)關(guān)組各10只,采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立DCM大鼠模型,治療8 w后,對HRV進(jìn)行對照分析,處死大鼠,迅速取出心肌,心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)檢測采用TUNEL法測定。結(jié)果與正常組比較,模型組各HRV時域指標(biāo)〔24 h平均值的標(biāo)準(zhǔn)差(SDNN)、RR間期平均值標(biāo)準(zhǔn)差(SDANN)、HRVindex、相鄰RR間期值的均方根(RMSDNN)、相鄰R-R間期>50 ms的個數(shù)點總竇性心搏個數(shù)的百分比(PNN50)〕及各HRV頻域指標(biāo)〔總功率、極低頻(VLF)、低頻(LF)、高頻(HF)〕均明顯降低(P<0.05),心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯升高(P<0.05);與模型組比較,五參組時域指標(biāo)RMSDNN及頻域指標(biāo)HF顯著升高(P<0.05),內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組各指標(biāo)均顯著升高(P<0.05),內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯降低(P<0.01);與內(nèi)關(guān)組比較,五參+內(nèi)關(guān)組各HRV指標(biāo)顯著升高(P<0.05)。結(jié)論五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴治療DCM大鼠能明顯提高大鼠HRV各指標(biāo),且能顯著降低心肌細(xì)胞凋亡指數(shù),心肌細(xì)胞凋亡的改善可能是提高HRV的機(jī)制之一。

    糖尿病心肌?。晃鍏⒖诜?;內(nèi)關(guān)穴;心率變異性;心肌細(xì)胞凋亡

    糖尿病性心肌病(DCM)是引起糖尿病患者最終死亡的常見慢性心血管并發(fā)癥,臨床上缺乏理想有效的治療手段。研究表明〔1〕,DCM心臟自主神經(jīng)功能紊亂(CAN),在所有反映交感活性的心率變異性(HRV)參數(shù)變化上具有一致性,表現(xiàn)為時域指標(biāo)及頻域指標(biāo)降低。由此,本文旨在通過觀察第五批名老中醫(yī)崔金濤教授經(jīng)驗方五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴治療DCM對大鼠HRV及心肌細(xì)胞凋亡的影響,并對其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討。

    1 材料與方法

    1.1實驗動物 清潔級健康雄性Wistar大鼠70只,體質(zhì)量(160~180)g,由華中科技大學(xué)實驗動物中心提供(湖北省實驗動物管理委員會,合格證001號,環(huán)境設(shè)施合格證028號)。實驗動物分組飼養(yǎng),飼以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。分籠喂養(yǎng),自由飲食攝水,自然晝夜光線照明,實驗室內(nèi)通風(fēng)良好,溫度保持在16℃~20℃,相對濕度30%~80%。 試驗前用快速血糖儀檢查血糖,剔除血糖異常大鼠。

    1.2試劑 鏈脲佐菌素(STZ,Sigma公司,批號S01301178);血糖試紙(美國雅培公司,批號0701051),細(xì)胞凋亡檢測(TUNEL)試劑盒。

    1.3模型制備 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后,隨機(jī)取大鼠50只,參考文獻(xiàn)〔2〕方法建立DCM大鼠模型。造模成功后隨機(jī)分為模型組,五參組、內(nèi)關(guān)組和五參+內(nèi)關(guān)組,每組各10只,另10只為正常組。

    1.4治療方法 內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組參照中國針灸學(xué)會實驗針灸會制定的《動物針灸穴位圖譜》〔3〕,P6,H7和L14對應(yīng)選取內(nèi)關(guān)穴施予針刺。內(nèi)關(guān)位于大鼠腕橫紋正中上5 mm處,針剌深度約5 mm。造模同時分別針刺大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴,大鼠穿自制鼠衣,用0.30 mm×15 mm華佗牌毫針直刺穿皮達(dá)筋間,捻轉(zhuǎn)1 min后,接HANS-200型電針治療儀,左右各接一電極,連續(xù)波,頻率2 Hz,強(qiáng)度1 mA,通電治療20 min,每日1次,共8 w。其他組行內(nèi)關(guān)穴假針刺,穴位的定位和消毒法同上,使用英國DONGBANGAcuPrime針灸器械有限公司的假針灸針(嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作),不銹鋼針同上,并采用以下刺激方法:針頭露出套管1 min,輕觸皮膚,開始記錄時間。留針時,壓下針柄使針頭露出1 mm,輕觸皮膚,捻轉(zhuǎn)1 min后,接HANS-200型電針治療儀,左右各接一電極,連續(xù)波,頻率2 Hz,強(qiáng)度1 mA,通電治療20 min,每日1次,共8 w。五參組及五參+內(nèi)關(guān)組給予大鼠1支五參口服液(由西洋參、北沙參、南沙參、三七、丹參、降香、苦參等中藥組成)灌胃,每日1次,其他組給予等量的生理鹽水灌胃,共8 w。

    1.5HRV指標(biāo) 治療8 w后,出針1 min后,各組進(jìn)行HRV取樣,用MODEL No.7303050心電裝置,通過RM-86型八導(dǎo)生理記錄儀及SKY-A4 生物信號處理系統(tǒng),記錄停針即刻的心電圖波形。并輸入功能學(xué)科實驗軟件包,分析計算各組大鼠停針即刻各HRV時域指標(biāo)〔24 h平均值的標(biāo)準(zhǔn)差(SDNN)、RR間期平均值標(biāo)準(zhǔn)差(SDANN)、HRVindex、相鄰RR間期差值的均方根(RMSDNN)、相鄰R-R間期>50 ms的個數(shù)占總竇性心搏個數(shù)的百分比(PNN50)〕及頻域指標(biāo)〔總功率、極低頻(VLF)、低頻(LF)、高頻(HF)〕的情況。采樣過程中避免干擾,將大鼠用25%氨基甲酸乙酯(4 ml/kg)麻醉,固定四肢,采集V1心電信號,避免各種影響自主神經(jīng)系統(tǒng)(ANS)活動的因素。

    1.6心肌細(xì)胞凋亡指數(shù) 隨后處死大鼠,迅速取出心肌,心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)檢測采用TUNEL法測定。

    1.7統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析。

    2 結(jié) 果

    2.1各組HRV時域指標(biāo)的比較 與正常組比較,模型組SDNN、SDANN、HRVindex、RMSDNN、PNN50均明顯降低(P<0.05);與模型組比較,五參組RMSDNN有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組各HRV時域指標(biāo)顯著升高(P<0.05或P<0.01);與內(nèi)關(guān)組比,五參+內(nèi)關(guān)組各HRV時域指標(biāo)顯著升高(P<0.05)。見表1。

    表1 各組治療后HRV時域指標(biāo)的比較

    與正常組比較:1)P<0.05;與模型組比較:2)P<0.05,3)P<0.01;與內(nèi)關(guān)組比較:4)P<0.05;下表同

    2.2各組HRV頻域指標(biāo)的比較 與正常組比較,模型組各HRV頻域指標(biāo)(總功率、VLF、LF、HF)均明顯降低(P<0.05);與模型組比較,五參組HF指標(biāo)顯著升高(P<0.05),內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組各頻域指標(biāo)均顯著升高(P<0.05或P<0.01);與內(nèi)關(guān)組比較,五參+內(nèi)關(guān)組各HRV頻域指標(biāo)顯著升高(P<0.05)。見表2。

    表2 各組治療后HRV頻域指標(biāo)的比較

    2.3各組心肌凋亡指數(shù)的比較 與正常組(0.15±0.02)比較,模型組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(0.53±0.04)明顯升高(P<0.05);與模型組比較,內(nèi)關(guān)組(0.34±0.21)及五參+內(nèi)關(guān)組心肌凋亡指數(shù)(0.30±0.17)顯著降低(P<0.01);五參組為0.49±0.36。

    3 討 論

    心臟自主神經(jīng)病變是引起DCM患者發(fā)生各種心律失常的重要原因,而HRV是國際上公認(rèn)的反映心臟自主神經(jīng)功能狀態(tài)量化指標(biāo)〔4〕。在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展過程中,細(xì)胞凋亡起著重要作用〔5〕。心肌細(xì)胞的損傷致使心臟傳入與傳出神經(jīng)纖維受損,致使心臟HRV降低。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴治療DCM,明顯改善了心肌缺血狀態(tài),增強(qiáng)了心肌細(xì)胞營養(yǎng),改善了心肌細(xì)胞凋亡,由此修復(fù)了心臟傳入及傳出神經(jīng)纖維,提高HRV指標(biāo),獲得較好的臨床療效。

    DCM病程長,后期常表現(xiàn)為氣陰兩虛證,經(jīng)典方五參口服液由西洋參、北沙參、南沙參、丹參、苦參、三七、降香等中藥組成,緊扣其病因病機(jī)辨證論治,西洋參補(bǔ)氣滋陰清熱,為治療氣陰兩虛之要藥,藥理作用能抗心律失常、增加胰島素敏感性及降血糖〔6〕。南北沙參養(yǎng)陰生津,北沙參水浸液在低濃度時,能夠加強(qiáng)離體蟾蜍心臟的收縮,濃度高時,則抑制直至心室停博〔7〕?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,丹參改善射血分?jǐn)?shù)、減少細(xì)胞凋亡方面的作用明顯??鄥⑶逍臑a火,滌痰化濁,苦參中主要成分苦參堿及金雀花堿,具有“奎尼丁樣效應(yīng)”能降低心肌收縮力、延緩房性傳導(dǎo)及降低自律性等作用,在實驗篩選抗心律失常植物藥過程中,苦參作為心悸的專用藥之一應(yīng)用于臨床〔8〕,三七具有抗血小板集聚和溶栓的作用,能夠減慢心率,對各種原因引起的心率失常都有保護(hù)作用〔7〕;降香所含黃檀素有微弱的抗凝作用,能明顯增強(qiáng)冠狀動脈血流量,減慢心率,輕度增加心跳振幅,而不會引起心律不齊〔9〕;另外,DCM屬于祖國醫(yī)學(xué)消渴心病范疇,歸為手厥陰心包經(jīng)。手厥陰心包經(jīng)與心臟在生理病理上有著密切的聯(lián)系。歷代醫(yī)家臨床實踐表明,當(dāng)心臟發(fā)生疾病時,多取手厥陰心包經(jīng)的穴位進(jìn)行治療。葉向榮等〔10〕指出,電針內(nèi)關(guān)穴可以促進(jìn)缺血性心肌恢復(fù)。

    1劉化芋,胡志耕.氣陰兩虛型糖尿病心率變異性及 SCL-90的觀察分析〔J〕 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2006;4(12):1040-2.

    2張春虹,臧偉進(jìn),徐 靜.建立糖尿病心肌病動物模型方法的實驗研究〔J〕.衛(wèi)生研究,2006;35(6):706-8.

    3華興邦.大鼠穴位圖譜的研制〔J〕.實驗動物與動物實驗,1991;(1):1-5.

    4中華心血管病雜志編委會心率變異性對策專題組.心率變異性檢測臨床應(yīng)用的建議〔J〕.中華心血管病雜志,1998;26(4):252-5.

    5陳 青.糖尿病及其慢性并發(fā)癥與細(xì)胞凋亡〔J〕.國外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌學(xué)分冊,2001;21(5):236-9.

    6張春鳳,于 敏,歐陽雪琴,等.西洋參及其提取物降血糖作用的實驗研究〔J〕.中國中醫(yī)藥科技,2005;12(6):353-4.

    7崔金濤.三七對心血管疾病的防治作用〔J〕.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,1999;19(1):36-8.

    8高學(xué)敏,顏正華,張延模,等.中藥學(xué)〔M〕.北京:中國中醫(yī)藥出版社,2002:35-6.

    9江蘇省新醫(yī)學(xué)院.中國中藥大辭典〔M〕.上海:上海人民出版社,1977:1560-5.

    10葉向榮,張素芬.電針“內(nèi)關(guān)”、“足三里”對家兔紅細(xì)胞膜流動性的影響〔J〕.針刺研究,1992;17(1):42-4.

    〔2016-03-30修回〕

    (編輯 苑云杰/王一涵)

    R587.1

    A

    1005-9202(2017)19-4737-02;

    10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.020

    武漢市衛(wèi)生局項目(No.WZ11C06)

    肖鳳英(1974-),女,副主任醫(yī)師,在讀博士,主要從事2型糖尿病并心血管病變研究。

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