頂空氣相色譜法同時(shí)測定醒腦靜注射液中6種有機(jī)溶劑的殘留量

黃衛(wèi)娟，楊麗玲，王淑芬，黃肖梅，何秀云，姜 松，林 繪（東莞市第五人民醫(yī)院，廣東東莞 523900）

頂空氣相色譜法同時(shí)測定醒腦靜注射液中6種有機(jī)溶劑的殘留量

黃衛(wèi)娟＊，楊麗玲，王淑芬，黃肖梅，何秀云，姜 松，林 繪（東莞市第五人民醫(yī)院，廣東東莞 523900）

目的：建立同時(shí)測定醒腦靜注射液中甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈6種有機(jī)溶劑殘留量的的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為DB-624毛細(xì)管柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250℃，載氣為氮?dú)?，氮?dú)饬魉贋?5 mL/min，分流比為35∶1，頂空進(jìn)樣量為1 mL，頂空加熱溫度為80℃，平衡時(shí)間為15 min。結(jié)果：甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為15.00～240.00 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～400.00 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～400.00 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～399.99 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～399.99 μg/mL（r＝0.999 8）、5.00～80.00 μg/mL（r＝0.999 9）；定量限分別為5.98、3.94、2.05、2.13、1.39、1.24 μg/mL，檢測限分別為2.01、2.11、1.18、1.56、1.15、0.01 μg/mL；精密度試驗(yàn)的RSD均＜2.0%，穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)只檢出乙酸乙酯，其RSD＜2.0%；回收率分別為93.59%～99.02%（RSD＝2.62%，n＝6）、92.42%～98.40%（RSD＝2.43%，n＝6）、94.81%～104.64%（RSD＝3.47%，n＝6）、94.56%～106.73%（RSD＝4.21%，n＝6）、97.04%～106.33%（RSD＝3.50%，n＝6）、98.40%～107.97%（RSD＝3.37%，n＝6）。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)，操作簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于醒腦靜注射液中6種有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測定。

頂空氣相色譜法；醒腦靜；有機(jī)溶劑；殘留量；甲醇；乙醇；異丙醇；正丁醇；乙酸乙酯；乙腈

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish the method for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in Xingnaojing injection，such as methanol，ethanol，isopropanol，n-butanol，ethyl acetate and acetonitrile.METHODS：Headspace GC method was adopted.The determination was performed on DB-624 capillary column by temperature programming with the injector temperature of 200℃；flame ionization detector was adopted with the temperature of 250℃；carrier gas was nitrogen with flow rate of 25 mL/min and split ratio of 35∶1；headspace sampling size was 1 mL，and heating temperature of headspace sampling was 80℃；equilibrium time was 15 min.RESULTS：The linear ranges of methanol，ethanol，isopropanol，n-butanol，ethyl acetate and acetonitrile were 15.00-240.00 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-400.00 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-400.00 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-399.99 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-399.99 μg/mL（r＝0.999 8）and 5.00-80.00 μg/mL（r＝0.999 9）.The LOQ were 5.98，3.94，2.05，2.13，1.39，1.24 μg/mL，and the LOD were 2.01，2.11，1.18，1.56，1.15，0.01 μg/mL，respectively.RSDs of precision tests were all less than 2.0%，stability and repetitive tests only ethyl acetate was detected，RSD＜2.0%；the recoveries were 93.59%-99.02%（RSD＝2.62%，n＝6），92.42%-98.40%（RSD＝2.43%，n＝6），94.81%-104.64%（RSD＝3.47%，n＝6），94.56%-106.73%（RSD＝4.21%，n＝6），97.04%-106.33%（RSD＝3.50%，n＝6）and 98.40%-107.97%（RSD＝3.37%，n＝6）.CONCLUSIONS：The method is specific，rapid，simple and accurate，and can be used for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in Xingnaojing injection.

KEYWORDSHeadspace GC；Xingnaojing；Organic solvent；Residual；Methanol；Ethanol；Isopropanol；n-butanol；Ethyl acetate；Acetonitrile

醒腦靜注射液由麝香、郁金、冰片、梔子等4味中藥材組成，具有清熱解毒、涼血活血、開竅醒腦的功效[1-3]，臨床常用于中風(fēng)昏迷、顱腦外傷、腦梗死等腦部疾病的治療[4-6]，其聯(lián)合納洛酮可改善肝性腦病患者的認(rèn)知功能，降低外周血神經(jīng)毒性物質(zhì)及炎癥因子水平[7]。醒腦靜注射液生產(chǎn)工藝中主要使用的有機(jī)溶劑是乙醇[8-9]，而在工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時(shí)可產(chǎn)生甲醇、異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈等有機(jī)溶劑[10-12]，因此在醒腦靜注射液生產(chǎn)過程中可能會(huì)帶入這些有機(jī)溶劑。為保證該制劑的質(zhì)量和用藥安全，必須嚴(yán)格控制其有機(jī)溶劑的殘留量。但目前有關(guān)醒腦靜注射液中有機(jī)溶劑殘留量的測定尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。鑒于此，筆者參考2015年版《中國藥典》（四部）中關(guān)于有機(jī)溶劑殘留量測定法的指導(dǎo)原則[13]和文獻(xiàn)[14]采用頂空氣相色譜法建立了同時(shí)測定醒腦靜注射液中甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯和乙腈6種有機(jī)溶劑殘留量的方法，以期為完善該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

7890B型氣相色譜儀，包括氫火焰離子化檢測器、工作站、自動(dòng)頂空進(jìn)樣器（美國Agilent公司）；PURELAB Ultra型超純水儀[威立雅水處理技術(shù)（上海）有限公司]；BS124S型萬分之一電子分析天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

醒腦靜注射液（廠家A，批號：1604112、1603052，規(guī)格：5 mL；廠家B，批號：1510132，規(guī)格：10 mL）；甲醇對照品（河北四友卓越科技有限公司，批號：110616，純度：＞99.9%）；乙醇對照品（批號：20160601，純度：＞99.7%）、異丙醇對照品（批號：20130726，純度：＞99.7%）、正丁醇對照品（批號：20151228，純度：＞99.5%）、乙酸乙酯對照品（批號：20160316，純度：＞99.5%）均購自天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司；乙腈對照品[賽默飛世爾科技（中國）有限公司，批號：135525，純度：＞99.9%]；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.80 μm）；升溫程序：起始溫度為60℃，保持8 min，以30℃/min升溫至120℃，保持1 min，最后以60℃/min升溫至220℃，保持1 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測器：氫火焰離子化檢測器；檢測器溫度：250℃；載氣：氮?dú)猓坏獨(dú)饬魉伲?5 mL/min；分流比：35∶1；頂空進(jìn)樣量：1 mL；頂空加熱溫度：80℃；平衡時(shí)間：15 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取甲醇對照品0.300 3 g、乙醇對照品0.501 5 g、異丙醇對照品0.501 5 g、正丁醇對照品0.502 5 g、乙酸乙酯對照品0.502 5 g、乙腈對照品0.100 1 g，分別置于10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得單一對照品貯備液。精密量取上述單一對照品貯備液各1 mL，置于同一100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈的質(zhì)量濃度分別為300.3、501.5、501.5、502.5、502.5、100.1 μg/mL的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品適量，置于5 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白溶液 以水為空白溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液、供試品溶液、空白溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各有機(jī)溶劑均能達(dá)到基線分離，分離度＞1.5；理論板數(shù)以乙酸乙酯峰計(jì)＞5 000，保留時(shí)間約為7.25 min。結(jié)果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，分別置于10 mL 量瓶中，加水定容，搖勻，即得系列混合對照品溶液。取上述系列混合對照品溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以各待測有機(jī)溶劑質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regressive equations and linear ranges

2.5 定量限（LOQ）與檢測限（LOD）

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得LOQ；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得LOD。結(jié)果，甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈的LOQ分別為5.98、3.94、2.05、2.13、1.39、1.24 μg/mL，LOD分別為2.01、2.11、1.18、1.56、1.15、0.01 μg/mL。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對照品溶液適量，用水稀釋5倍，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈峰面積的RSD分別為1.02%、0.81%、0.97%、1.38%、1.65%、1.00%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號：1604112）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，只檢出乙酸乙酯，其峰面積的RSD＝1.32%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號：1604112）適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，只檢出乙酸乙酯，其峰面積的RSD＝1.32%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

取空白輔料適量，共6份，精密稱定，分別置于5 mL量瓶中，各加入一定質(zhì)量的待測有機(jī)溶劑對照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 樣品中有機(jī)溶劑殘留量的測定

取3批樣品（批號：1604112、1603052、1510132）各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以外標(biāo)法計(jì)算待測有機(jī)溶劑殘留量。結(jié)果，3批樣品中有2批（批號：1604112、1603052），只檢出乙酸乙酯，其殘留量均為0.01%（n＝3）。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

由于醒腦靜注射液中可能存在的有機(jī)溶劑在水中均有較好溶解性，且純化水的安全性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)環(huán)保，故選擇純化水作為本研究的溶劑。

3.2 色譜柱的選擇

本試驗(yàn)曾考察了HP-INNOWAX和DB-624兩種型號的毛細(xì)管柱，發(fā)現(xiàn)使用HP-INNOWAX測定6種有機(jī)溶劑殘留時(shí)，待測有機(jī)溶劑不能達(dá)到基線分離；而選用DB-624毛細(xì)管柱，可使待測有機(jī)溶劑完全分離且峰型尖銳美觀，無雜質(zhì)峰干擾。

綜上所述，本方法專屬性強(qiáng)，操作簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于醒腦靜注射液中6種有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測定。

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Simultaneous Determination of 6 Residual Organic Solvents in Xingnaojing Injection by Headspace GC

HUANG Weijuan，YANG Liling，WANG Shufen，HUANG Xiaomei，HE Xiuyun，JIANG Song，LIN Hui（Dongguan Fifth People’s Hospital，Guangdong Dongguan 523900，China）

R917

A

1001-0408（2017）27-3868-04

10.13746/j.njkj.2005.10.030.

2017-04-03

2017-07-05）
（編輯：劉 柳）

＊副主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。電話：0769-85012062。E-mail：710753877@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.27.35