豬圓環(huán)病毒病的診斷分析

趙海忠，李良華，宋忠旭，孫 華，彭先文，梅書棋

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/動物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實驗室，湖北 武漢 430064）

豬圓環(huán)病毒病的診斷分析

趙海忠，李良華，宋忠旭，孫 華，彭先文，梅書棋

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/動物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實驗室，湖北 武漢 430064）

為了建立豬圓環(huán)病毒病快速有效診斷方法和綜合防控措施，研究通過臨床剖檢、實驗室檢測等方法對湖北某豬場一例疑似豬圓環(huán)病毒病進(jìn)行了病原學(xué)診斷，確診為PCV2感染。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測序，遺傳進(jìn)化分析顯示基因型為PCV2e。通過免疫接種、對癥治療、生物安全防范、飼養(yǎng)管理進(jìn)行綜合防控，可實現(xiàn)豬群的整體健康穩(wěn)定。

豬圓環(huán)病毒2型；診斷分析；PCV2e；綜合防控

豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是引起豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病的主要病原，其臨床特征為病豬體質(zhì)下降、消瘦、皮膚蒼白、黃疸、腹瀉、呼吸困難、衰弱甚至死亡等。PCV2具有免疫抑制性，主要損害豬的免疫系統(tǒng)，在全國范圍內(nèi)廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-3]。

2016年7月，湖北省某規(guī)模化豬場豬群發(fā)生疑似豬圓環(huán)病毒感染病例，保育豬群中先后有60多頭陸續(xù)發(fā)病，死亡15頭。針對性采取了綜合防控措施，有效阻止了疾病的暴發(fā)與蔓延，為同行PCV2的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

選取具有典型臨床癥狀、瀕臨死亡大約克保育豬5頭，采集脾臟、淋巴結(jié)組織樣品，按豬號進(jìn)行1#～5#編號，供實驗室檢測。

1.1.1 主要儀器 離心機(jī)（德國eppendorf），PCR擴(kuò)增儀（EDC-810型），凝膠成像系統(tǒng)（Bio-RAD），電泳儀（DYY-8C型）。

1.1.2 引物及試劑 擴(kuò)增PCV2的ORF2基因引物，上游引物為 5′-CACGGATATTGTAGTCCTGGT-3′，下游引物為 5′-CGCACCTTCGGATATACTGTC-3′[4]，引物由寶生物工程（大連）有限公司合成。TaKaRa Mini BEST Viral DNARNA Extraction Kit Ver.4.0、Premix Taq（Ex Taq Version 2.0）試劑盒、DL 2 000 DNA Marker均購自寶生物工程（大連）有限公司。Taq DNA polymerase（PCR聚合酶）、DNA快速回收試劑盒為上海生工生物工程產(chǎn)品。陽性對照樣品由動物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實驗室保存。

1.2 檢測方法

1.2.1 臨床觀察及病理剖檢 了解該規(guī)模豬場豬群主要發(fā)病死亡情況，觀察臨床癥狀并拍照記錄。選取5頭瀕臨死亡癥狀典型的患病保育豬進(jìn)行解剖，并詳細(xì)記錄各個器官的病理變化。采集每頭豬只脾、淋巴結(jié)組織樣品，冷藏保存后送實驗室檢測。

1.2.2 病原學(xué)檢測 按DNA提取試劑盒操作規(guī)程提取基因組DNA，采用PCR方法擴(kuò)增PCV2的ORF2基因，待反應(yīng)結(jié)束后取產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。

1.2.3 基因測序分析 對PCV2的ORF2基因陽性條帶明顯的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物4#、5#樣本，送武漢擎科生物技術(shù)有限公司測序。從GenBank數(shù)據(jù)庫中搜集PCV2各基因型主要代表毒株的ORF2基因，繪制PCV2的ORF2基因系統(tǒng)進(jìn)化樹，比對本試驗毒株序列與其他毒株的遺傳進(jìn)化關(guān)系。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀及病理剖檢結(jié)果

發(fā)病豬為7～10周齡保育豬，初期出現(xiàn)食欲不振、呼吸困難、體溫40.5℃左右，不愛運(yùn)動，生長不整齊，少數(shù)病例腹瀉；后期病豬表現(xiàn)為漸進(jìn)性消瘦、被毛蓬亂、皮膚蒼白（圖1），厭食、精神沉郁、常呈趴臥姿勢（圖2），部分病豬在后肢和會陰部皮膚可見有暗紅色不規(guī)則的斑點(diǎn)丘疹，最后病豬出現(xiàn)全身多系統(tǒng)衰竭而死亡。解剖后主要病變：腹股溝淋巴結(jié)明顯腫大（圖3），腎呈暗紅色、表面有大小不一的灰白色的病灶，脾臟腫大表面有出血性梗死灶，肺水腫暗紅色、各葉紅色肝變期（圖4）。

圖1 漸進(jìn)性消瘦、被毛蓬亂、皮膚蒼白

圖2 厭食、精神沉郁、呈趴臥姿勢

圖3 腹股溝淋巴結(jié)明顯腫大

圖4 肺水腫暗紅色、各葉紅色肝變期

2.2 病原學(xué)檢測結(jié)果

樣品PCV2病原檢測，擴(kuò)增PCV2的ORF2基因產(chǎn)物結(jié)果見圖5。結(jié)果顯示，全部樣品擴(kuò)增到ORF2基因494 bp的片段，檢出PCV2陽性比例為100%，確診感染PCV2。

圖5 PCV2 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

2.3 PCV2的ORF2基因測序結(jié)果

取4#、5#陽性條帶明顯PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，分別得到序列92 HBWH.3-2016.7、93 HBWH.4-2016.7，PCV2的ORF2基因系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果見圖6，樣品中檢測到的圓環(huán)病毒2型與圓環(huán)病毒2e基因型代表毒株在同一分支，同源性高，證明本場豬感染PCV2e。

圖6 PCV2的ORF2基因系統(tǒng)進(jìn)化樹

3 討論與小結(jié)

3.1 病因分析

了解豬場PCV2原免疫程序：基礎(chǔ)公母豬群每4個月普免1頭份，仔豬14日齡免疫1頭份。豬場嚴(yán)格按照免疫程序免疫接種圓環(huán)滅活疫苗，但部分保育豬仍感染PCV2引起死亡，分析其原因有三：一是免疫程序不合理，仔豬14日齡時自身免疫系統(tǒng)還未完善，同時母源抗體干擾，抑制了免疫反應(yīng)[5]；二是PCV2a疫苗免疫效果不理想，本場免疫PCV2a疫苗為全病毒疫苗，增殖滴度較低[6]，但本場以PCV2e基因型為主，盡管PCV2a疫苗株能夠為PCV2e毒株提供有效的交叉保護(hù)，但PCV2a與PCV2e毒株之間的抗原性存在一定差異，免疫針對性不強(qiáng)；三是消毒防疫不完善，消毒藥品太單一，消毒方法、程序不科學(xué)，消毒不徹底留有死角，未能阻止PCV2在豬場傳播。新疆、廣東、山西等地先后報道PCV2e毒株[7-9]，但湖北該毒株很少見報道。本研究確診檢測到PCV2e毒株，為湖北PCV2的分子流行病學(xué)、遺傳變異及防控奠定了基礎(chǔ)。

3.2 綜合防控

3.2.1 免疫接種 PCV2e基因型山西SXJZ分離株與疫苗株LG株（黑龍江）全基因組核苷酸序列同源性較高，為96.7%[9]，選LG株疫苗進(jìn)行PCV2免疫。PCV2母源抗體干擾仔豬免疫應(yīng)答，當(dāng)母源抗體效價達(dá)到3log10左右時，幾乎不影響仔豬免疫應(yīng)答[5]；仔豬免疫后35 d即可獲得較高水平的抗體，加強(qiáng)免疫時可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生更高水平的抗體，能夠有效抵御PCV2的感染。豬場加強(qiáng)PCV2母源抗體監(jiān)測，制訂科學(xué)免疫程序，仔豬首免21日齡1頭份，間隔21 d加強(qiáng)免疫1頭份。

3.2.2 對癥治療 可選擇黃芪多糖注射液（0.2 mL/kg）+頭孢噻呋鈉或氨芐西林鈉（0.025～0.05 g/kg），混合肌注，2次/d，連用3～5 d；同時對機(jī)體嚴(yán)重脫水、極度虛弱的豬只，靜脈注射氨基酸、葡萄糖等，以補(bǔ)充體能，并配合飲水電解質(zhì)多維等，以補(bǔ)充體液和調(diào)節(jié)體內(nèi)代謝平衡[10]。做好妊娠母豬藥物保健工作，可在產(chǎn)前、產(chǎn)后7 d，每噸飼料分別添加80%支原凈125 g+10%鹽酸多西環(huán)素1 000 g+50%復(fù)方黃芪多糖250 g+電解質(zhì)多維1 000 g。

3.2.3 生物安全措施 豬場封閉式管理，嚴(yán)格控制外來和本場人員進(jìn)出；搞好豬舍清潔衛(wèi)生，發(fā)現(xiàn)可疑病豬及時隔離，糞尿和病死豬進(jìn)行無害化處理；選擇廣譜消毒劑，如過硫酸氫鉀復(fù)合物粉、癸甲溴銨、碘制劑，輪換使用，科學(xué)徹底消毒，切斷病毒在豬場內(nèi)的傳播，降低豬場病毒載量。規(guī)范種豬引種，隔離觀察1個月，健康豬方可進(jìn)場[11]。

3.2.4 飼養(yǎng)管理 實施全進(jìn)全出的飼養(yǎng)方式，降低飼養(yǎng)密度[12]；加強(qiáng)豬群護(hù)理，提供優(yōu)質(zhì)飼料，豬舍溫度適宜控制在23～25℃，減少環(huán)境應(yīng)激；仔豬斷奶時在原產(chǎn)床上多停留3～5 d，添加藥物保健，盡量避免大小不一仔豬混群，轉(zhuǎn)群時注射抗應(yīng)激藥物，例如肌注長效土霉素1 mL，以減輕應(yīng)激反應(yīng)和增強(qiáng)抵抗力。

[1] 顧紹鋒，李生飛，曾國仟，等.云南富源縣豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平檢測與分析[J] .養(yǎng)豬，2017（1）：121-122.

[2] 韓慶功，崔艷紅，張智勇.我國豬圓環(huán)病毒2型感染的危害[J] .黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010（11）：84-85.

[3] 束陳宇，許秋陽，段世鵬，等.豬圓環(huán)病毒2型江蘇分離株的遺傳進(jìn)化分析[J] .中國獸醫(yī)學(xué)報，2014（7）：1047-1052.

[4] 李明波，宋忠旭，董斌科，等.豬繁殖與呼吸綜合征與豬圓環(huán)病毒 2型混合感染的診斷分析[J] .豬業(yè)科學(xué)，2016，33（12）：58-60.

[5] 張志慧.豬圓環(huán)病毒疫苗臨床免疫評價技術(shù)的研究[D] .北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2014.

[6] 鄧秋紅，鄭杰，劉延亭，等.國內(nèi)商品化豬圓環(huán)病毒疫苗的現(xiàn)狀及展望[J] .中國獸藥雜志，2014，48（2）：67-69.

[7] 翟少倫，岳城，冉多良，等.豬圓環(huán)病毒2型新疆株全基因組的滾環(huán)擴(kuò)增與序列分析 [J] .微生物學(xué)通報，2010，37（7）：1005-1009.

[8] 胡俊，程松，翟少倫，等.豬圓環(huán)病毒2型廣東分離株的遺傳演化分析[J] .畜牧與獸醫(yī)，2015，47（7）：5-9.

[9] 孟帆，吳忻，姚敬明，等.豬圓環(huán)病毒2型山西株全基因組序列分析[J] .中國畜牧獸醫(yī)，2016，43（12）：3127-3134.

[10] 汲全柱.豬圓環(huán)病毒病的防控措施[J] .養(yǎng)殖與飼料，2017（1）：75-76.

[11] 徐樂樂，孟相秋，和彥良，等.豬圓環(huán)病毒病及其免疫預(yù)防[J] .豬業(yè)科學(xué)，2016，33（11）：136-137.

[12] 彭濤，古金元，胡東方，等.豬圓環(huán)病毒2型感染病例的診斷與防治[J] .養(yǎng)豬，2016（6）：100-101.

（編輯：郭玉翠）

研究稱適度飲酒可激發(fā)創(chuàng)造力

【英國《每日電訊報》網(wǎng)站8月8日報道】題：科學(xué)家說，找不到靈感？喝杯啤酒來激發(fā)創(chuàng)造力吧

縱觀歷史，藝術(shù)家們常說，酒能激發(fā)創(chuàng)造力，大大提高產(chǎn)出。

現(xiàn)在，一項新研究證實，他們這么說并非異想天開。

研究人員給132名受試者布置了一系列需要創(chuàng)造力的任務(wù)。結(jié)果顯示，男性受試者飲用一品脫（約合0.57升）啤酒，女性受試者飲用350毫升啤酒，就可以提高成績。

在一項單詞聯(lián)想測試中，飲酒讓受試者的成績提高了40%左右。研究人員給受試者3個詞，要求他們想出一個能與這3個詞搭配的詞。

奧地利格拉茨大學(xué)的研究人員認(rèn)為，酒能助飲酒者打破條條框框，跳出既定思維，進(jìn)行更多創(chuàng)造性思考。

研究發(fā)現(xiàn)，一杯紅酒或啤酒也許是釋放思維活力的關(guān)鍵，而思維活力是完成填字游戲或撰寫幽默的伴郎致辭所必需的。

不過，酒雖然能提高創(chuàng)造力，但它也可能降低“執(zhí)行能力”，所以很可能會妨礙需要運(yùn)動技能的藝術(shù)活動，例如繪畫和舞蹈。

研究報告的主要作者、奧地利格拉茨大學(xué)心理學(xué)系教授馬蒂亞斯·貝內(nèi)德克說，報道逸事趣聞的新聞將過量飲酒與創(chuàng)造力聯(lián)系起來；需要創(chuàng)造性解決問題的任務(wù)，往往是靠靈光乍現(xiàn)來完成。

他指出：“酒精會削弱執(zhí)行能力，但能提高聯(lián)想測驗的成績。非常適度的飲酒才可能帶來積極效果，而過度飲酒通常會削弱創(chuàng)造力?！?/p>

2015年，一家丹麥釀酒廠推出了一款名為“難題解決者”的啤酒，宣稱這種啤酒能精確地提供激發(fā)發(fā)散性思維所需的酒精量。

這家釀酒廠依據(jù)的是美國伊利諾伊大學(xué)的研究成果，即想要創(chuàng)造性地解決問題，理想的血液酒精含量略低于法律規(guī)定的駕駛員血液酒精含量的上限。

上述最新研究成果刊登在《意識與認(rèn)知》雜志上。

（轉(zhuǎn)自 參考消息[N] ，2017-08-10）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)05-0108-03

2017-07-31

農(nóng)業(yè)部國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系武漢綜合試驗站項目（CARS-36）；十三五創(chuàng)新團(tuán)隊項目（2016-620-004-001）；湖北省重大科技創(chuàng)新計劃項目（2015ABA046）

趙海忠（1977-），男，湖北隨州人，助理研究員，碩士，主要從事動物疫病防控工作.E-mail：547609336@qq.com

梅書棋，研究員，研究方向為豬遺傳育種.

E-mail：msqlfe@163.com