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    我國(guó)豬傳染性胃腸炎的流行現(xiàn)狀及實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)研究進(jìn)展

    2017-10-12 07:38:18祖立闖劉愛(ài)華王金良沈志強(qiáng)
    養(yǎng)豬 2017年5期
    關(guān)鍵詞:胃腸炎流行病學(xué)傳染性

    祖立闖,王 芳,劉愛(ài)華,王金良,李 峰,沈志強(qiáng),

    (1.山東綠都生物科技有限公司,山東 濱州 256600;2.山東省濱州市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心,濱州 256600;3.山東省利津縣畜牧局,利津 257400;4.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,濱州 256600)

    我國(guó)豬傳染性胃腸炎的流行現(xiàn)狀及實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)研究進(jìn)展

    祖立闖1,王 芳2,劉愛(ài)華3,王金良4,李 峰4,沈志強(qiáng)1,4

    (1.山東綠都生物科技有限公司,山東 濱州 256600;2.山東省濱州市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心,濱州 256600;3.山東省利津縣畜牧局,利津 257400;4.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,濱州 256600)

    豬傳染性胃腸炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起豬的以腹瀉、嘔吐、脫水、逐漸消瘦為主要特征的一種急性、高度接觸性腸道傳染病[1],各年齡段的豬群均易感,對(duì)仔豬的危害最大,仔豬日齡越低死亡率越高,存活的仔豬生長(zhǎng)發(fā)育嚴(yán)重受阻,生長(zhǎng)緩慢,飼料轉(zhuǎn)化率明顯降低,生產(chǎn)性能下降[2],給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。筆者就目前我國(guó)TGE的流行現(xiàn)狀及各種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述,旨在掌握我國(guó)豬群中TGE的流行現(xiàn)狀與流行特點(diǎn),為逐步提高我國(guó)TGE實(shí)驗(yàn)室診斷水平,以及為我國(guó)TGE的綜合防控提供參考。

    1 病毒分離鑒定情況

    如表1所示,自2006年以來(lái)的近10年中,我國(guó)研究學(xué)者先后在我國(guó)四川、福建、吉林、陜西、甘肅、黑龍江、江蘇、山東、遼寧、河北等10個(gè)省共分離鑒定出17株TGEV,TGEV強(qiáng)毒株的感染由中部地區(qū)逐步向東部沿海以及北方地區(qū)逐步擴(kuò)散,現(xiàn)在我國(guó)大部分養(yǎng)豬密集地區(qū)均已有TGEV病毒感染并成功分離毒株的報(bào)道。

    2 流行病學(xué)監(jiān)測(cè)情況

    近10年我國(guó)研究學(xué)者對(duì)國(guó)內(nèi)TGEV的感染情況進(jìn)行了大量的流行病學(xué)監(jiān)測(cè),筆者通過(guò)對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)果的整理與匯總,分析出近10年中我國(guó)豬群TGEV流行的幾個(gè)顯著特點(diǎn)。

    2.1 流行范圍廣

    如表2所示,TGEV的流行已經(jīng)遍布了我國(guó)黑龍江、貴州、福建、廣西、北京、河北、安徽、浙江、江蘇、青海、河南、廣東、遼寧、山東、內(nèi)蒙古、上海、江西、四川、山西、吉林、陜西等21個(gè)省市。

    表1 近10年TGEV病毒分離鑒定情況匯總

    2.2 感染率整體不高

    如表2所示,在2007—2016年的39篇流行病學(xué)監(jiān)測(cè)文獻(xiàn)中,TGEV整體陽(yáng)性感染率在0~31.86%范圍內(nèi),其中陽(yáng)性感染率超過(guò)10%的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)文獻(xiàn)僅有10篇,而陽(yáng)性感染率在5%~10%的文獻(xiàn)有12篇,陽(yáng)性感染率低于5%的文獻(xiàn)達(dá)17篇,陽(yáng)性感染率在10%以下文獻(xiàn)占總文獻(xiàn)的74.36%,表明TGEV在我國(guó)發(fā)病豬群中的感染率整體穩(wěn)定在較低水平,這與我國(guó)對(duì)TGEV防控工作的重視密不可分。

    2.3 隱性感染普遍存在

    如表2所示,2008—2009年貴州省健康豬群中TGEV抗體陽(yáng)性率為0.41%,2015—2016年陜西省健康豬群中TGEV抗體陽(yáng)性率為5.36%,2016年河南省健康豬群中TGEV抗體陽(yáng)性率為1.5%,2012—2013年北京健康豬群中TGEV病原感染率為2.58%,2016年福建省健康豬群中TGEV病原感染率為28.9%。表明外觀健康豬群仍可檢測(cè)出TGEV病原或抗體,健康豬群中普遍存在TGEV隱性感染。

    2.4 區(qū)域性流行特點(diǎn)顯著

    如表2所示,不同地區(qū)感染率差異較大,如2012年青海的發(fā)病豬樣品的感染率達(dá)30.0%,而2012年安徽發(fā)病豬樣品的感染率僅為10.8%;如2016年福建健康豬樣品的感染率達(dá)28.9%,而2016年河南健康豬樣品的感染率僅為1.5%。

    表2 近10年TGEV流行病學(xué)監(jiān)測(cè)情況匯總

    2.5 與其它病原的混合感染情況較嚴(yán)重

    如表3所示,TGEV與豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬輪狀病毒(PoRV)、豬嵴病毒(PKV)普遍存在二重、三重的混合感染,其中在部分不同地區(qū)與PEDV的二重混合感染率最高達(dá)29.2%,與PEDV、PoRV三重混合感染率最高達(dá)20.0%,與PEDV、PKV三重混合感染率最高達(dá)3.84%,混合感染增加了疫病的診斷與防控難度,造成的經(jīng)濟(jì)損失更加巨大,應(yīng)加強(qiáng)重視。

    表3 近10年我國(guó)豬群TGEV與其它致病原混合感染情況匯總

    3 實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

    TGEV與PEDV、PoRV等疫病的臨床表現(xiàn)極其相似,均表現(xiàn)為嘔吐、水樣腹瀉、脫水、逐漸消瘦等特征,且TGEV經(jīng)常與PEDV、PoRV等疫病混合感染,增加了TGEV臨床診斷的難度,故目前對(duì)TGEV感染的確診主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù),包括病毒的分離與鑒定、分子生物學(xué)和免疫學(xué)診斷技術(shù)。

    3.1 病毒的分離與鑒定

    病毒分離與鑒定方法一直是動(dòng)物病毒病實(shí)驗(yàn)室確診的經(jīng)典方法,但該方法存在試驗(yàn)周期長(zhǎng),操作較繁瑣,不適合臨床快速診斷。滿坤等[19]將采集的病死豬小腸內(nèi)容物處理后接種ST細(xì)胞,經(jīng)過(guò)12代盲傳后開(kāi)始出現(xiàn)細(xì)胞顆粒增多、圓縮、損傷和脫落等典型細(xì)胞病變,分離病毒被TGEV特異性血清中和后接種細(xì)胞不出現(xiàn)細(xì)胞病變,仔豬口服分離病毒后出現(xiàn)水樣腹瀉、糞便呈乳白色或黃綠色、嘔吐、脫水等癥狀,經(jīng)過(guò)對(duì)分離病毒的ORF3基因序列進(jìn)行分析證實(shí)分離毒株為TGEV。

    3.2 分子生物學(xué)診斷技術(shù)

    3.2.1 RT-PCR及多重RT-PCR方法 RT-PCR首先以病毒的基因組RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,是疾病病原檢測(cè)中最常用的一種分子生物學(xué)診斷技術(shù)。多重RT-PCR方法是在單一RT-PCR檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的,可在同一個(gè)反應(yīng)體系中加入多對(duì)引物同時(shí)對(duì)多個(gè)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增,可在一次PCR反應(yīng)過(guò)程中檢測(cè)到多個(gè)致病原。張作華等[59]根據(jù)TGEV N基因序列設(shè)計(jì)了1對(duì)特異性引物,建立了檢測(cè)TGEV的RT-PCR方法,該方法檢測(cè)豬瘟病毒(CSFV)、豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、PEDV均為陰性,可檢測(cè)到1×10-3μg/μL的TGEV RNA,通過(guò)對(duì)126份臨床疑似為TGEV感染病料的檢測(cè)證明該RT-PCR檢測(cè)方法可用于臨床上TGEV感染引起的傳染病病原學(xué)檢測(cè)。李麗敏等[60]分別針對(duì)PEDV和TGEV的N基因、PoRV的VP7基因設(shè)計(jì)引物,建立了檢測(cè)PEDV、TGEV和PoRV的多重RT-PCR方法,該方法檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、CSFV、PRV及PCV2等病毒均為陰性,可以檢測(cè)到PEDV、TGEV和PoRV的最低核酸濃度分別為16.07、803.9和321.5 μg/L,該多重RT-PCR和PEDV、TGEV、PoRV單項(xiàng)RT-PCR的符合率分別為96.77%、93.54%和93.54%,該多重RT-PCR能夠快速鑒別檢測(cè)PEDV、TGEV和PoRV 3種病毒,可用于PEDV、TGEV與PoRV的臨床快速鑒別診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

    3.2.2 熒光RT-PCR及多重?zé)晒釸T-PCR方法 熒光定量RT-PCR技術(shù)融匯了常規(guī)RT-PCR技術(shù)靈敏、快速、特異的特點(diǎn)以及光譜技術(shù)的高敏感性和高精確定量的優(yōu)點(diǎn),但該方法對(duì)儀器設(shè)備和操作人員技術(shù)水平要求均較高。李子祥等[61]針對(duì)TGEV S基因的保守序列設(shè)計(jì)引物,優(yōu)化反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件,建立了基于SYBR GreenⅠ染料的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法,該方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(r=0.997),擴(kuò)增效率高,檢測(cè)靈敏度可達(dá)10拷貝/μL,該方法檢測(cè)124份臨床疑似TGEV病料,陽(yáng)性率為13.7%,可用于獸醫(yī)臨床上TGEV的快速檢測(cè)和流行病學(xué)分析。許夢(mèng)怡[62]分別根據(jù)TGEV、PEDV、PoRV的M、M、VP2基因序列,設(shè)計(jì)了3對(duì)質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品引物和3組熒光RT-PCR引物和探針,通過(guò)優(yōu)化引物、探針濃度和退火溫度,成功建立了3種病毒的TaqMan探針熒光定量PCR方法。該方法對(duì)TGEV、PEDV、PoRV的檢測(cè)靈敏度分別為2.49拷貝/μL、4.36拷貝/μL、4.96拷貝/μL。組內(nèi)和組間重復(fù)試驗(yàn)的變異系數(shù)均不超過(guò)5%,檢測(cè)PRV、PCV1、PRRSV等病毒均為陰性,在40份臨床病料樣品檢測(cè)中三重?zé)晒釸T-PCR方法的檢測(cè)結(jié)果與單一熒光RT-PCR方法一致,三重?zé)晒釸T-PCR方法具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

    3.2.3 RT-LAMP方法 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法(LAMP)是2000年以后發(fā)展起來(lái)的一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù),只需在恒溫條件下就能完成擴(kuò)增反應(yīng),不需要特殊儀器設(shè)備,并且擴(kuò)增結(jié)果可通過(guò)反應(yīng)體系的濁度或加入染料來(lái)直觀判斷,特別適合在現(xiàn)場(chǎng)和基層部門應(yīng)用,但LAMP方法容易形成氣溶膠污染,造成假陽(yáng)性的結(jié)果。高睿澤等[63]根據(jù)TGEV N基因序列設(shè)計(jì)2對(duì)RT-LAMP引物,建立針對(duì)TGEV的RT-LAMP快速檢測(cè)方法,該方法在63℃恒溫下作用50 min,使TGEV獲得了高效率特異性擴(kuò)增,檢測(cè)PEDV等其它豬易感病毒均為陰性,可檢測(cè)到131.4fg/μL的目標(biāo)病毒,比普通RT-PCR的靈敏度高3個(gè)數(shù)量級(jí),反應(yīng)結(jié)束后加入SYBR GreenⅠ在紫外燈下觀察顏色變化,陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物呈現(xiàn)綠色熒光,該RTLAMP對(duì)40份臨床樣品的檢測(cè)結(jié)果與RT-PCR和ELISA的符合率均為100%,為TGE的臨床快速診斷與流行病學(xué)調(diào)查提供了一種簡(jiǎn)單、快速和高效的技術(shù)手段。

    3.2.4 基因芯片方法 基因芯片技術(shù)是近年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一門新技術(shù),在基片上點(diǎn)陣排列一系列靶基因,與熒光素等標(biāo)記的探針?lè)肿釉谕粭l件下進(jìn)行核酸雜交,經(jīng)過(guò)共聚焦激光掃描儀掃描、利用數(shù)據(jù)分析軟件獲得雜交結(jié)果,具有自動(dòng)化、平行性和高通量等潛在優(yōu)勢(shì),能同時(shí)對(duì)多種疾病進(jìn)行檢測(cè)。滑翔等[64]分別根據(jù) PEDV 基因(S、M)、TGEV 基因(S、N)、PoRV 基因(VP7、NSP4)的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增靶基因,進(jìn)行PEDV-TGEV-PoRV的cDNA陣列設(shè)計(jì),構(gòu)建了能夠擴(kuò)增PEDV、TGEV、PoRV的cDNA芯片,該cDNA芯片檢測(cè)PRRSV、CSFV、豬乙型腦炎病毒(JEV)、PRV均為陰性,芯片的最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為20 pg/μL,同一張芯片可重復(fù)使用至少7次,該P(yáng)EDV-TGEV-PoRV診斷cDNA芯片具有良好的特異性、靈敏性和重復(fù)性,為PEDV、TGEV、PoRV的鑒別診斷提供了新的高通量檢測(cè)技術(shù)。

    3.3 免疫學(xué)診斷技術(shù)

    3.3.1 ELISA方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是繼免疫熒光和放射性同位素免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫酶技術(shù),該方法具有特異性高、敏感性強(qiáng)、重復(fù)性和穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn),非常適用于臨床大批量樣品的檢測(cè)。ELISA方法可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體,主要有直接法、間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法(阻斷法),其中間接ELISA檢測(cè)抗體和雙抗夾心ELISA檢測(cè)抗原是動(dòng)物疫病檢測(cè)中最常用的二種方法。

    (1)間接ELISA方法。間接ELISA方法中首先用特異性抗原包被固相載體,加入待測(cè)抗體(一抗),待測(cè)抗體與包被固相抗原發(fā)生特異性結(jié)合;再加入酶標(biāo)記的抗體(酶標(biāo)二抗),酶標(biāo)抗體與待測(cè)抗體發(fā)生特異性結(jié)合,再加入底物顯色液,底物顯色液與酶標(biāo)抗體發(fā)生特異性結(jié)合,最后顯色顏色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。徐向偉等[65]將TGEV的N基因片段克隆到pET-28a載體中,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),以純化的重組N蛋白作為包被抗原,建立了檢測(cè)TGEV抗體的間接ELISA方法,該 ELISA方法檢測(cè) PEDV、CSFV、PRRSV、口蹄疫病毒(FMDV)、PCV2等 5種病毒陽(yáng)性血清均為陰性,該方法操作簡(jiǎn)便、特異性好、敏感性高,可用于大規(guī)模臨床樣品的檢測(cè)。

    (2)雙抗夾心ELISA方法。雙抗夾心ELISA方法中首先用捕獲抗體包被固相載體,加入待測(cè)抗原,待測(cè)抗原與捕獲抗體發(fā)生特異性結(jié)合,再加入檢測(cè)抗體(標(biāo)記抗體),檢測(cè)抗體與待測(cè)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,形成抗體-抗原-標(biāo)記抗體免疫復(fù)合物,再加入底物顯色液,底物顯色液與檢測(cè)抗體發(fā)生特異性結(jié)合,最后顯色顏色的深淺與待測(cè)抗原的含量成正比。屈月等[66]以抗TGEV N蛋白單克隆抗體為包被抗體,純化的抗TGEV N蛋白多克隆抗體為檢測(cè)抗體,建立了TGEV雙抗體夾心ELISA方法,該ELISA的重復(fù)性變異系數(shù)小于10%,檢測(cè)PEDV、豬細(xì)小病毒(PPV)、CSFV、PoRV 等均為陰性,對(duì) 22份臨床豬糞便樣品的陽(yáng)性檢出率為22.7%,與常規(guī)RT-PCR的符合率達(dá)81.8%,該雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)TGEV具有較高的特異性和敏感性,可以用于TGEV的病原學(xué)檢測(cè)。

    3.3.2 IPMA方法 免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(IPMA)是在感染病毒的多孔細(xì)胞培養(yǎng)板中加入待檢標(biāo)本,再加入標(biāo)有辣根過(guò)氧化物酶抗免疫球蛋白特異抗體,經(jīng)底物顯色后利用光學(xué)顯微鏡即可觀察結(jié)果。朱蘊(yùn)暖等[67]以TGEV N蛋白的單克隆抗體為一抗,羊抗小鼠IgG-HRP為二抗,AEC過(guò)氧化物酶底物為顯色液,建立了檢測(cè)TGEV的IPMA方法。該方法中一抗的最佳使用濃度為0.5 ng/μL,二抗的最佳稀釋倍數(shù)為1∶2 000倍,經(jīng)AEC顯色后TGEV感染的陽(yáng)性細(xì)胞呈紅棕色,能檢測(cè)到101TCID50的病毒,檢測(cè)常見(jiàn)的PEDV、PoRV和PCV2等豬病病原均為陰性,為TGEV的實(shí)驗(yàn)室診斷及TGEV在感染細(xì)胞中的定位和動(dòng)態(tài)分布提供有效的檢測(cè)手段。

    3.3.3 免疫膠體金方法 免疫膠體金技術(shù)是結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)和免疫檢測(cè)技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一種新型檢測(cè)技術(shù),其以膠體金作為示蹤標(biāo)志物,將其標(biāo)記抗原或抗體后形成標(biāo)記物,樣品中的待測(cè)物與標(biāo)記物形成的絡(luò)合物通過(guò)層析作用在層析材料上泳動(dòng),與層析材料上針對(duì)該待測(cè)物的受體發(fā)生免疫反應(yīng)形成免疫復(fù)合物,免疫復(fù)合物中的膠體金大量聚集形成肉眼可見(jiàn)的紅色或粉紅色斑點(diǎn)。具有簡(jiǎn)便、快速、不需儀器設(shè)備、結(jié)果判斷直觀、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),在動(dòng)物疫病診斷尤其是基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)地診斷中得到了廣泛應(yīng)用。常亮等[68]采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金顆粒,用TGEV單克隆抗體標(biāo)記并包被在玻璃纖維膜上,另外將純化的TGEV單克隆抗體和羊抗小鼠抗體包被在硝酸纖維膜上,組裝成TGEV快速檢測(cè)試紙條,該試紙條檢出TGEV最低量為150 μg/mL,而檢測(cè)CSFV、PRRSV、大腸桿菌及沙門氏菌均為陰性,試紙條在常溫下可保存1年。膠體金試劑條具有快速、靈敏、特異、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn),非常適用于基層單位。

    3.3.4 IFA方法 間接免疫熒光(IFA)檢測(cè)方法可利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原的定位,且該方法具有特異性強(qiáng)、敏感性高和操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn),在病原檢測(cè)、病毒感染及致病機(jī)理研究中得到廣泛應(yīng)用。朱蘊(yùn)暖等[69]將TGEV接種PK-15細(xì)胞后,以抗TGEV N蛋白的單克隆抗體為一抗,熒光素FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG為二抗,通過(guò)反應(yīng)條件優(yōu)化,建立了TGEV的IFA檢測(cè)方法。該方法檢測(cè)常見(jiàn)的PEDV、PoRV和 PCV2等豬病病原均為陰性,為TGEV的臨床鑒別診斷提供了一種免疫學(xué)診斷技術(shù)。

    4 小結(jié)與展望

    現(xiàn)階段的流行現(xiàn)狀分析表明TGEV在我國(guó)豬群中呈散發(fā)性、區(qū)域性流行,其整體感染率一直穩(wěn)定在較低水平,表明我國(guó)采取的TGE綜合防控措施發(fā)揮了功效,但分析中發(fā)現(xiàn)TGEV的隱性感染以及與其它致病原的混合感染均普遍存在,應(yīng)加強(qiáng)重視。對(duì)于TGEV的各種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù),病毒分離鑒定、IPMA、IHA、基因芯片方法均存在試驗(yàn)條件要求高、操作復(fù)雜、過(guò)程繁瑣、費(fèi)用成本高等條件限制,不利于基層實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)。RT-LAMP和膠體金方法對(duì)儀器設(shè)備要求較低,但敏感性太高,易導(dǎo)致假陽(yáng)性。RT-PCR、ELSA方法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、高通量,是目前TGEV診斷和流行病學(xué)監(jiān)測(cè)使用的主要方法,但RT-PCR方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳時(shí)需使用溴化乙錠(EB),對(duì)環(huán)境和人體健康產(chǎn)生一定的威脅。熒光RT-PCR方法彌補(bǔ)了常規(guī)RT-PCR不能定量以及EB的污染問(wèn)題,但對(duì)儀器、試劑、操作人員技術(shù)水平要求均較高,有條件的實(shí)驗(yàn)室可選擇使用。相信隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的不斷完善與標(biāo)準(zhǔn)化,以及我國(guó)對(duì)TGE研究的不斷深入和防控措施的不斷完善,TGE的各種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)必將會(huì)走向不斷成熟與完善,TGE的流行也將會(huì)得到進(jìn)一步控制,從而逐步實(shí)現(xiàn)TGEV在我國(guó)的凈化。

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    (編輯:郭玉翠)

    S858.28

    A

    1002-1957(2017)05-0123-06

    2017-08-09

    山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(ZR2016CM35);山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(SDAIT-08-17)

    祖立闖(1981-),男,黑龍江賓縣人,助理研究員,碩士,主要從事動(dòng)物疫病診斷技術(shù)研究工作.E-mail:zulichuang2008@126.com

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