DAT和D2R在垂體腺瘤組織中的表達(dá)及其意義

任志文，謝巖，趙冬，劉祺，王洋，許健，王業(yè)忠

（新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 1.神經(jīng)外科，2.老干一科，新疆 石河子 832008）

DAT和D2R在垂體腺瘤組織中的表達(dá)及其意義

任志文1，謝巖2，趙冬1，劉祺1，王洋1，許健1，王業(yè)忠1

（新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 1.神經(jīng)外科，2.老干一科，新疆 石河子 832008）

目的 探討垂體腺瘤組織中多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（DAT）和多巴胺D2受體（D2R）的表達(dá)變化及其意義。方法選取179例手術(shù)治療的垂體腺瘤患者，根據(jù)術(shù)前內(nèi)分泌激素檢查和術(shù)后病理學(xué)檢查結(jié)果，將患者分為泌乳腺瘤（PRL）45例、生長(zhǎng)激素腺瘤（GH）43例、促腎上腺皮質(zhì)激素腺瘤（ACTH）32例及無(wú)功能垂體腺瘤（NFPA）59例，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)垂體腺瘤組織和瘤旁正常組織中DAT、D2R的表達(dá)，分析D2R、DAT在垂體腺瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果 PRL、GH及ACTH組織中D2R、DAT表達(dá)高于NFPA和瘤旁正常組織，PRL和GH組織中D2R、DAT表達(dá)高于ACTH組織（P＜0.05）；D2R、DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤質(zhì)地、KNOSP分級(jí)、是否侵襲及是否復(fù)發(fā)無(wú)關(guān)（P＞0.05）；Spearman相關(guān)分析顯示，D2R在垂體腺瘤組織中的表達(dá)與DAT呈正相關(guān)（r=0.571，P=0.000）。結(jié)論 D2R、DAT在PRL和GH腺瘤組織中呈高表達(dá)，而在ACTH和NFPA腺瘤中組織呈低表達(dá)，提示多巴胺代謝紊亂可能參與不同病理學(xué)類(lèi)型垂體腺瘤的發(fā)生。

垂體腺瘤；多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體；多巴胺D2受體；表達(dá)

Abstract:Objective To investigate the changes of expressions of dopamine transporter (DAT)and dopamine D2 receptor (D2R)in pituitary adenomas and their significance.Methods In this study,179 cases of patients with pituitary adenomas undergoing surgical treatment were selected.According to the results of preoperative hormone examination and postoperative pathologic test,the patients were divided into prolactinoma(PRL,n=45),growth hormone adenoma (GH,n=43),adrenocorticotropic adenoma (ACTH,n=32)and nonfunctioning pituitary adenoma (NFPA,n=59)groups.The expressions of DAT and D2R in the pituitary adenomas and the adjacent normal tissues were detected using immunohistochemistry.The correlations between the expressions of D2R and DAT in the pituitary adenoma tissues were analyzed by Spearman correlation analysis.Results Qualitative and semi-quantitative analysis results showed that,the expressions of D2R and DAT in the PRL,GH and ACTH tissues were higher than those in the NFPA and adjacent normal tissues,and the expressions of D2R and DAT in the PRL and GH tissues were higher than those in the ACTH tissues,the differences were statistically significant (P＜0.05).The expressions of D2R and DAT in the pituitary adenoma tissues were notrelated with gender,age,tumordiameter,tumortexture,KNOSP classification,tumor invasion or recurrence(P＞0.05).Spearman correlation analysis showed that the expression of D2R in the pituitary adenoma tissues was positively correlated with the expression of DAT (r=0.571,P=0.000).Conclusions D2R and DAT are highly expressed in PRL and GH adenoma tissues,but lowly expressed in ACTH and NFPA tissues.It suggested that dopamine metabolic disorders may be involved in thepathogenesis of different types of pituitary adenomas.

Keywords:pituitary adenoma;dopamine transporter;dopamine D2 receptor;expression

近年來(lái)垂體腺瘤發(fā)病率呈升高趨勢(shì)[1]，常影響神經(jīng)及內(nèi)分泌功能，部分甚至具有惡性腫瘤特質(zhì)而侵襲鞍區(qū)[2]。多巴胺受體激動(dòng)劑作為一線藥物常用于泌乳腺瘤（prolactinoma，PRL）的治療，但對(duì)其他病理類(lèi)型垂體腺瘤療效有限[3]，多巴胺D2受體（dopamine D2receptor，D2R）作為多巴胺直接作用位點(diǎn)，與多巴胺受體激動(dòng)劑療效密切相關(guān)[4]。多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（dopamine transporter，DAT）在多巴胺重新攝取及維持腦內(nèi)多巴胺平衡中發(fā)揮重要作用[5]。本研究擬分析D2R、DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年2月-2015年3月新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科行手術(shù)治療的垂體腺瘤患者179例，其中，男性94例，女性85例；平均年齡（45.9±11.8）歲。所有患者術(shù)前行鞍區(qū)影像學(xué)檢查明確鞍區(qū)占位病變，排除垂體腺瘤囊變或卒中、混合性垂體腺瘤，以及標(biāo)本組織較小或血塊較多無(wú)法完成檢查者。根據(jù)術(shù)前內(nèi)分泌激素檢查和術(shù)后病理學(xué)檢查結(jié)果，將患者分為功能性垂體腺瘤：PRL45例、生長(zhǎng)激素腺瘤（growth hormone adenoma，GH）43例、促腎上腺皮質(zhì)激素腺瘤（adrenocorticotropic hormone adenoma，ACTH）32例，以及無(wú)功能垂體腺瘤（no functional pituitary adenoma，NFPA）59例。所有研究對(duì)象術(shù)中留取垂體腺瘤及瘤旁正常組織標(biāo)本，甲醛固定，石蠟包埋，切片，保存于4℃條件備檢。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 D2R和DAT單克隆抗體購(gòu)自上海信裕生物科技有限公司，免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB染色劑均購(gòu)自福州邁新生物公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)法染色 取石蠟組織標(biāo)本切片，脫落后，用梯度乙醇水化，用檸檬酸鹽抗原修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)，加入過(guò)氧化物酶阻斷液。分別加入D2R、DAT單克隆抗體（稀釋比例1∶200），4℃過(guò)夜孵育。PBS洗滌3次，加入通用型二抗羊抗兔IgG，室溫下孵育20 min，PBS洗滌3次，DAB染色，蘇木素復(fù)染、返藍(lán)、脫水、封片。以PBS替代一抗作為空白對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判定 由2位副主任以上職稱(chēng)的病理科醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行閱片，每張切片隨機(jī)取5個(gè)高倍視野，根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行綜合判定：①染色強(qiáng)度：無(wú)染色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，深棕褐色3分；②陽(yáng)性細(xì)胞百分比：＜10%為1分，11%～50%為 2分，51%～75%為 3分；＞75%為4分；③兩部分相乘，≥3分為陽(yáng)性表達(dá)，＜3分為陰性表達(dá)。利用日本Nikon公司ECLIPSE 80i圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組織化學(xué)法染色切片進(jìn)行半定量分析，在同一條件下對(duì)切片進(jìn)行掃描采集，每張切片隨機(jī)取5個(gè)高倍視野，測(cè)定圖像吸光度（A值），以5個(gè)視野的均值作為該例的測(cè)量結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，用χ2檢驗(yàn)，兩兩比較校正檢驗(yàn)水準(zhǔn)，相關(guān)分析用Spearman法，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 D2R、DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá)

免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示，D2R主要集中在細(xì)胞核，染色呈黃褐色，在瘤旁正常組織中，可見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞，而在垂體腺瘤組織中，可見(jiàn)大量的細(xì)胞核被染成黃褐色，呈強(qiáng)陽(yáng)性細(xì)胞（見(jiàn)圖1）。DAT主要集中在細(xì)胞質(zhì)中，染色呈黃褐色，在瘤旁正常組織中表達(dá)，可見(jiàn)少量細(xì)胞核周?chē)?xì)胞質(zhì)呈棕黃色染色，而在垂體腺瘤組織中，可見(jiàn)大量的細(xì)胞質(zhì)呈黃褐色染色（見(jiàn)圖 2）。

定性分析結(jié)果顯示，PRL、GH、ACTH、NFPA 及瘤旁正常組織中D2R陽(yáng)性表達(dá)率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），PRL、GH及ACTH組織中D2R表達(dá)高于NFPA和瘤旁正常組織，PRL和GH組織中 D2R表達(dá)高于 ACTH組織；PRL、GH、ACTH、NFPA及瘤旁正常組織中DAT陽(yáng)性表達(dá)率比較，經(jīng) χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），PRL、GH及ACTH組織中DAT表達(dá)高于NFPA和瘤旁正常組織，PRL和GH組織中DAT表達(dá)高于ACTH組織。見(jiàn)表1。

半定量分析結(jié)果顯示，PRL、GH、ACTH、NFPA及瘤旁正常組織中D2R、DAT吸光度A值比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩兩比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，PRL、GH及ACTH組織中D2R、DAT表達(dá)高于NFPA和瘤旁正常組織，PRL和GH組織中D2R、DAT表達(dá)高于ACTH組織。見(jiàn)表2。

圖1 D2R在垂體腺瘤組織中的表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

圖2 DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

表1 D2R、DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá)比較

表2 D2R、DAT在垂體腺瘤組織中表達(dá)的A值比較

2.2 D2R、DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

D2R、DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤質(zhì)地、KNOSP分級(jí)、是否侵襲及是否復(fù)發(fā)無(wú)關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 臨床病理特征與D2R、DAT在垂體腺瘤組織中表達(dá)的關(guān)系

續(xù)表3

2.3 D2R、DAT在垂體腺瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，D2R在垂體腺瘤組織中的表達(dá)與DAT呈正相關(guān)（r=0.571，P=0.000）。見(jiàn)表4。

表4 D2R、DAT在垂體腺瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性 例

3 討論

垂體腺瘤作為顱腦常見(jiàn)良性腫瘤類(lèi)型，其危害不容小視，可導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)分泌功能發(fā)生改變，而引起一系列病理改變，破壞人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，嚴(yán)重影響人體正常生理功能[6]。臨床上在對(duì)垂體腺瘤進(jìn)行藥物治療時(shí)發(fā)現(xiàn)[7]，不同病理學(xué)類(lèi)型的垂體腺瘤對(duì)不同藥物治療敏感性不同。多巴胺受體激動(dòng)劑（以溴隱亭為代表）對(duì)PRL腺瘤治療有效，可使76%～93%患者的血清PRL水平恢復(fù)正常，并使瘤體變小[8]，而在治療其他病理類(lèi)型垂體腺瘤時(shí)卻作用有限，只對(duì)部分患者有效。有研究指出，多巴胺受體激動(dòng)劑在治療垂體腺瘤時(shí)的療效差異可能與不同垂體腺瘤中D2R有關(guān)[4]。DAT在多巴胺信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。研究表明，D2R和DAT在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中出現(xiàn)表達(dá)異常[9-10]。

本研究結(jié)果顯示，PRL、GH及 ACTH組織中D2R、DAT陽(yáng)性表達(dá)率高于NFPA和瘤旁組織，PRL和GH組織中D2R、DAT陽(yáng)性表達(dá)率高于ACTH，說(shuō)明在不同病理學(xué)類(lèi)型垂體腺瘤中，D2R、DAT出現(xiàn)表達(dá)差異，而這也正解釋不同病理類(lèi)型垂體腺瘤對(duì)多巴胺受體激動(dòng)劑敏感性不同，垂體腺瘤組織中D2R越多，多巴胺受體激動(dòng)劑作用靶點(diǎn)越多，從而使其更好地發(fā)揮效果，同時(shí)，DAT在調(diào)控多巴胺穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用[11]，高表達(dá)的DAT可能導(dǎo)致多巴胺穩(wěn)態(tài)被打亂。本研究顯示，D2R、DAT在垂體腺瘤組織中的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤質(zhì)地、KNOSP分級(jí)、是否侵襲及是否復(fù)發(fā)無(wú)關(guān)，說(shuō)明垂體腺瘤組織中D2R、DAT表達(dá)并不受一般臨床特征的影響，只與病理學(xué)分型有關(guān)。Spearman相關(guān)分析顯示，D2R在垂體腺瘤組織中表達(dá)與DAT呈正相關(guān)，過(guò)表達(dá)的D2R可能與DAT相互作用而使多巴胺作用減弱，使多巴胺對(duì)PRL細(xì)胞分泌、增殖的抑制作用減縮[12]，具體作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究明確。

綜上所述，D2R、DAT在不同病理學(xué)類(lèi)型垂體腺瘤組織中表達(dá)不同，多巴胺代謝紊亂可能參與不同病理學(xué)類(lèi)型垂體腺瘤的發(fā)生，但具體機(jī)制待進(jìn)一步研究明確。

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（童穎丹 編輯）

Expressions and significance of DAT and D2R in pituitary adenoma tissues

Zhi-wen Ren1,Yan Xie2,Dong Zhao1,Qi Liu1,Yang Wang1,Jian Xu1,Ye-zhong Wang1
(1.Department of Neurosurgery,2.Department of Geriatrics,the First Affiliated Hospital of Medical College,Shihezi University,Shihezi,Xinjiang 832008,China)

R736.4

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.23.007

1005-8982（2017）23-0038-05

2016-12-21

王業(yè)忠，E-mail：3081217747@qq.com；Tel：13899526062