2型糖尿病基因檢測(cè)與發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究

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2型糖尿病基因檢測(cè)與發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究

王雪濤，朱燕萍

目的評(píng)估2型糖尿病多種基因是否與糖尿病的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。方法選取我院門(mén)診和住院病人260例，130例糖尿病人即為試驗(yàn)組，男130例無(wú)糖尿病者為對(duì)照組。選取試驗(yàn)組1例和對(duì)照組1例按年齡相近和性別相同配比，共配比130對(duì)，進(jìn)行1∶1條件Logistic回歸分析。結(jié)果糖尿病基因檢測(cè)與糖尿病有關(guān)聯(lián)性(P<0.05)。結(jié)論糖尿病基因檢測(cè)陽(yáng)性是糖尿病的危險(xiǎn)因素，但關(guān)聯(lián)程度低于其他3個(gè)因素(糖尿病家族史，TGT或IFG史，肥胖)。

2型糖尿??；基因檢測(cè)；關(guān)聯(lián)性

2型糖尿病(T2DM)是在外在不良環(huán)境的因素下，具有遺傳易感性人群發(fā)生的血糖增高的一種異質(zhì)性疾病。在對(duì)2型糖尿病遺傳方式的研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)疾病的發(fā)生可能與多個(gè)基因有關(guān)。隨著分子生物學(xué)和基因技術(shù)的快速發(fā)展，涉及的相關(guān)基因越來(lái)越多。有胰島素及相關(guān)受體基因，與肥胖和血脂相關(guān)基因，參與糖轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝的基因，與升糖激素有關(guān)的基因，免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的基因等等。不同基因各有各的反映重點(diǎn)，而且單個(gè)基因與糖尿病發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究也很多，如果把多種基因作為一個(gè)整體來(lái)評(píng)估，是否更能關(guān)聯(lián)到糖尿病的發(fā)生？本試驗(yàn)進(jìn)行了此方面研究，進(jìn)一步探討2型糖尿病在基因方面的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取西山煤電有限公司職工總醫(yī)院門(mén)診和住院病人260例。年齡35歲～65歲，除外1型糖尿病、繼發(fā)性糖尿病、妊娠期糖尿病病人，除外糖尿病急性并發(fā)癥病人。

糖尿病和糖耐量減低(IGT)、空腹血糖調(diào)節(jié)受損(IFG)根據(jù)2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)糖尿病防治指南診斷[1]。肥胖采用中國(guó)成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南診斷：體重指數(shù)(BMI)≥28 kg/m2。糖尿病基因檢測(cè)報(bào)告采用聯(lián)合基因集團(tuán)的報(bào)告。

1.2 分組方法 分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。內(nèi)分泌科住院病人130例，為糖尿病人即試驗(yàn)組；另130例各科門(mén)診無(wú)糖尿病者為對(duì)照組 。兩組均抽血行糖尿病基因檢測(cè)，記錄年齡、性別、糖尿病家族史、身高、體重、IGT或IFG史。選取試驗(yàn)組1例和對(duì)照組1例按年齡相近和性別相同配對(duì)，共配比130對(duì)。進(jìn)行1∶1條件Logistic回歸分析。進(jìn)行1∶1配對(duì)時(shí)年齡相差在1歲內(nèi)，嚴(yán)格篩選病例。

1.3 基因檢測(cè)步驟 試劑：10% Chelex-100、蛋白酶K(20 mg/mL)、ddH2O。檢測(cè)試劑盒：糖尿病及糖尿病并發(fā)癥相關(guān)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNP)中以下位點(diǎn)使用美國(guó)Life Tech.生產(chǎn)的Taqman探針專(zhuān)用檢測(cè)試劑盒檢測(cè)。設(shè)備： 單道移液器 、振蕩器、 ABI 9700 PCR儀(Life Tech.)、ABI 7900HT型熒光定量PCR儀(Life Tech)。

用單道微量移液器取20 μL全血，加入1 mL ddH2O，高速振蕩5 s～10 s，12 800 r/min離心3 min。取出棄上清液，留(20～30) μL ，再加入1 mL ddH2O，高速振蕩離心3 min。取出棄上清液，依次加入150 μL 10% Chelex-100和5 μL蛋白酶K(20 mg/mL)，振蕩5 s～10 s。置56℃保溫0.5 h以上，期間每隔10 min振蕩一次。 取上清液，2 ℃～8 ℃保存或凍存剩余DNA。使用專(zhuān)用檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

聯(lián)合基因的2型糖尿病基因檢測(cè)報(bào)告是將16種易感基因放在一起進(jìn)行評(píng)估，最后得出該病人發(fā)生糖尿病的概率。盡管它把發(fā)病概率分為6個(gè)梯度，但一般認(rèn)為，“—”表示患病風(fēng)險(xiǎn)低，“+”表示患病風(fēng)險(xiǎn)高。這16種基因是：血胰島素抵抗相關(guān)基因：亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)、脂聯(lián)素蛋白(ADIPOQ)、鈣激活蛋白酶10(CAPN-10)。胰島B細(xì)胞功能相關(guān)基因：尾加壓素Ⅱ基因(UTS2)、磺脲類(lèi)藥物受體1基因(ABCC8別名SUR1)、維生素D3受體(VDR)。與肥胖和血脂相關(guān)基因：瘦蛋白(LEP)、脂蛋白脂酶基因(LPL)、載脂蛋白B(APOB)、載脂蛋白E(APOE)、解偶聯(lián)蛋白3基因(UCP3)、解偶聯(lián)蛋白2基因(UCP2)。與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)基因：細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4基因(CTLA4)、E-選擇素(SELE)、白細(xì)胞介素1(IL1A)。雌激素受體(ESR1)[2]。表1是1例病人的報(bào)告單。

糖尿病基因檢測(cè)、糖尿病家族史、IGT或IFG史和肥胖都是糖尿病的危險(xiǎn)因素。參照優(yōu)勢(shì)比Exp(B)結(jié)果，可以認(rèn)為在其他自變量固定時(shí)，糖尿病基因檢測(cè)陽(yáng)性病人患糖尿病的危險(xiǎn)性是基因檢測(cè)陰性的2.613倍，糖尿病基因檢測(cè)與糖尿病有關(guān)聯(lián)性，但關(guān)聯(lián)程度低于其他3個(gè)因素。詳見(jiàn)表2、表3。

表1 2型糖尿病基因檢測(cè)報(bào)告單

表2 Logistic回歸分析的各變量賦值說(shuō)明

表3 1∶1條件Logistic回歸擬合結(jié)果

3 討 論

3.1 糖尿病基因熱點(diǎn) 把多種易感基因放在一起，作為一個(gè)系統(tǒng)來(lái)評(píng)估，結(jié)果表明整體性的基因檢測(cè)也與糖尿病的發(fā)病有相關(guān)性。以下介紹了幾個(gè)研究熱點(diǎn)基因。

MTHFR作為葉酸代謝中的關(guān)鍵酶，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起著相當(dāng)重要的作用。常見(jiàn)的MTHFR基因C677T位點(diǎn)突變，可以形成高半胱氨酸血癥(Hcy)，進(jìn)而促進(jìn)多種疾病的發(fā)生。中國(guó)漢族人群亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與2型糖尿病具有相關(guān)性[3]。另有研究證明，糖尿病腎病與MTHFR基因突變也有關(guān)[4]。在對(duì)山西地區(qū)病人研究中，發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病組的血漿Hcy水平明顯高與糖尿病非腎病組，表明糖尿病合并糖尿病腎病(DN)的發(fā)生與MTHFR基因C677T多態(tài)性具有相關(guān)性[5]。

LEP是由白色脂肪組織分泌的肥胖基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。它的代謝紊亂可以影響到肥胖、胰島素抵抗以及糖尿病的發(fā)生、發(fā)展。2010年，German等[6]在對(duì)糖尿病小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，瘦素能輕微降低葡萄糖的水平，并能改善胰島素抵抗，而且這種改善獨(dú)立于其他因素，比如抑制食欲和降體重。Ebihara等[7]研究證明，女性糖尿病病人中，應(yīng)用瘦素可以降低血糖水平，改善胰島素抵抗。正是因?yàn)槭菟卦谂R床上的重要性，應(yīng)用瘦素來(lái)治療代謝性疾病，還需要進(jìn)一步的深入研究[8]。

目前研究最多的是APOE基因。它的多態(tài)性可以導(dǎo)致血脂代謝紊亂，其與動(dòng)脈粥樣脈硬化、冠心病、糖尿病的密切關(guān)系已得到廣泛認(rèn)可。它包括3種基因型：E2、E3、E4 。很多研究說(shuō)明E2、E4均可以提高血漿中膽固醇和低密度脂蛋白的濃度。Anthopoulos 等[9]進(jìn)行的Meta分析表明：ApoE2可能為2型糖尿病的中等危險(xiǎn)因子。 對(duì)14篇文獻(xiàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，DN與載脂蛋白E基因多態(tài)性相關(guān)性的Meta分析中，得出結(jié)論ApoE基因多態(tài)性與T2DM病人DN的發(fā)生相關(guān)[10]。

3.2 實(shí)驗(yàn)的不足 基因檢測(cè)通過(guò)個(gè)體化檢測(cè)，可以提前預(yù)防糖尿病的發(fā)生。 本試驗(yàn)的不足有：①病人范圍局限，樣本量較小，無(wú)法得出大范圍和更專(zhuān)業(yè)的結(jié)論；②我國(guó)基因行業(yè)發(fā)展迅速，缺乏統(tǒng)一規(guī)范和監(jiān)管。本實(shí)驗(yàn)的聯(lián)合基因集團(tuán)在得出陰性或陽(yáng)性結(jié)果之前，要評(píng)估各基因在疾病中比重以及亞洲人該基因的發(fā)病率，在統(tǒng)一國(guó)際模式的基礎(chǔ)上進(jìn)行計(jì)算，這是十分復(fù)雜和精密的過(guò)程。雖然這個(gè)過(guò)程很?chē)?yán)謹(jǐn)，但缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和認(rèn)證。③納入的基因因?yàn)閷?zhuān)利和經(jīng)濟(jì)因素，只是目前全部糖尿病易感基因的一部分，期待其他主要基因的加入。

3.3 展望 糖尿病并發(fā)癥的基因與糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生也有關(guān)聯(lián)性。 患有糖尿病腎病的病人，糖尿病腎病的基因檢測(cè)(多個(gè)基因的整體)也為陽(yáng)性，兩者符合率較高。當(dāng)然缺乏進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)證明。期待大范圍、各民族、多專(zhuān)業(yè)以及大樣本量的糖尿病基因檢測(cè)數(shù)據(jù)，在統(tǒng)一規(guī)范的基礎(chǔ)上，及早預(yù)警糖尿病，由專(zhuān)業(yè)人士給出專(zhuān)業(yè)的預(yù)防措施。

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R587.1 R255.4

B

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.18.039

1672-1349(2017)18-2342-03

2016-06-26)

(本文編輯 王雅潔)

西山煤電集團(tuán)有限公司職工總醫(yī)院(太原 030053)

通訊單位：朱燕萍，E-mail:asd09865@163.com

信息：王雪濤，朱燕萍.2型糖尿病基因檢測(cè)與發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(18)：2342-2344.