大白菜花發(fā)育不同時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組研究

李改珍，齊仙惠，李梅蘭，趙軍良，王秀英，巫東堂*

(1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜研究所，山西 太原 030031；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，山西 太谷 030801)

大白菜花發(fā)育不同時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組研究

李改珍1,2，齊仙惠1，李梅蘭2，趙軍良1，王秀英1，巫東堂1*

(1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜研究所，山西 太原 030031；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，山西 太谷 030801)

[目的]研究大白菜花發(fā)育不同時(shí)期的基因表達(dá)變化，為進(jìn)一步完善成花調(diào)控分子機(jī)理提供依據(jù)。[方法]利用Illumina HiSeq4000測(cè)序平臺(tái)對(duì)大白菜花芽分化1級(jí)和5級(jí)的莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，比較花發(fā)育過(guò)程基因表達(dá)的差異。[結(jié)果]發(fā)現(xiàn)2 859個(gè)差異表達(dá)基因，且差異表達(dá)基因顯著富集在苯丙素生物合成、苯丙氨酸代謝、黃酮類(lèi)化合物生物合成、脂肪酸延長(zhǎng)和植物晝夜節(jié)律這5條代謝通路上；研究表達(dá)差異倍數(shù)在10倍以上的基因功能，篩選出14個(gè)可能影響大白菜花發(fā)育的新基因。[結(jié)論]大白菜花發(fā)育過(guò)程苯丙素生物合成和苯丙氨酸代謝活動(dòng)有所減弱，而黃酮類(lèi)化合物生物合成、脂肪酸延長(zhǎng)和植物晝夜節(jié)律活動(dòng)有所增強(qiáng)；篩選出的14個(gè)基因可能在大白菜花發(fā)育過(guò)程有重要作用，可進(jìn)一步研究。

大白菜；花發(fā)育；轉(zhuǎn)錄組；成花調(diào)控

Abstract:[Objective] Studying on the changes of gene expression of flower development at different stages in Chinese cabbage in order to provide the basis for improving the molecular mechanism of flower regulation. [Methods] In order to compare the differences in gene expression during flower development, the transcriptome of shoot apex in flower bud differentiation stage 1 and 5 were sequenced by Illumina HiSeq4000. [Results] 2 859 differentially expressed genes(DEGs) were found, and they were enriched significantly in 5 KEGG pathways such as Phenylpropanoid biosynthesis, Phenylalanine metabolism, Flavonoid biosynthesis, Fatty acid elongation and Circadian rhythm-plant. 14 new genes which maybe have influences on the flower development were selected by studying the function of genes that FC>10. [Conclusion] During the flower development of Chinese cabbage, the metabolic activity of Phenylpropanoid biosynthesis and Phenylalanine metabolism were declined, while Flavonoid biosynthesis, Fatty acid elongation and Circadian rhythm-plant were increased. The 14 selected genes may play an important role in the flower development of Chinese cabbage, which for further study.

Keywords:Brassicarapasubsp.Pekinensis, Flower development, Transcriptome, Flowering regulation

大白菜(Brassicarapasubsp.pekinensis)是重要的蔬菜作物之一，以營(yíng)養(yǎng)器官為產(chǎn)品，在晚秋及早春栽培中，先期抽薹會(huì)嚴(yán)重影響產(chǎn)量和品質(zhì)，而制種工作則要求植株順利抽薹開(kāi)花，因此，研究大白菜的成花機(jī)理具有重要的理論和實(shí)踐意義。目前對(duì)植物開(kāi)花時(shí)間調(diào)控的理解主要是通過(guò)對(duì)模式植物擬南芥成花的生理學(xué)和遺傳學(xué)研究獲得的，已探明春化、光周期、赤霉素、自主、溫敏和年齡6條成花調(diào)控途徑，克隆到超過(guò)110個(gè)成花基因[1]。近年來(lái)隨著大白菜基因組測(cè)序的完成，成花基因的研究也取得了很大進(jìn)展，大白菜數(shù)據(jù)庫(kù)現(xiàn)公布的成花基因已有136個(gè)，但這些基因多數(shù)為預(yù)測(cè)基因，功能并未得到驗(yàn)證，大白菜成花基因的克隆及功能研究的重點(diǎn)仍只集中在少數(shù)幾個(gè)關(guān)鍵基因上，如延遲開(kāi)花的BrFLC1、BrFLC2、BrFLC3和促進(jìn)開(kāi)花的BrpLFY等[2,3]，可見(jiàn)大白菜成花調(diào)控的分子機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

RNA-Seq技術(shù)能快速檢測(cè)生物組織在特定狀態(tài)下的所有mRNA轉(zhuǎn)錄本，比較不同生長(zhǎng)狀態(tài)下的基因表達(dá)變化[4]，從而在差異表達(dá)基因中挖掘到可能導(dǎo)致生長(zhǎng)狀態(tài)不同的關(guān)鍵基因。該技術(shù)已成功應(yīng)用于菊花、龍眼、仁用杏、大巖桐、普通白菜等植物的成花研究[5～9]。大白菜中也有應(yīng)用RNA-Seq技術(shù)的研究[10,11]，但將其用于花發(fā)育基因挖掘還未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬對(duì)大白菜花發(fā)育不同階段的莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，比較不同樣品間基因表達(dá)的差異，分析差異表達(dá)基因富集的代謝通路，篩選出與花發(fā)育相關(guān)的基因，以期進(jìn)一步完善大白菜成花調(diào)控的分子機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料由山西省農(nóng)科院蔬菜研究所大白菜課題組提供，材料編號(hào)68S，為自交不親和系。分別在花芽分化1級(jí)(V1)和5級(jí)(V2)時(shí)取樣，取樣部位為莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)，約0.1 g，液氮凍存。花芽分化的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照Song[12]對(duì)普通白菜的描述，細(xì)分為0～5級(jí)6個(gè)階段，依次為營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期、營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)過(guò)渡期、花原基分化初期、花原基分化盛期、花柄伸長(zhǎng)期和花萼原基分化期，莖端經(jīng)此過(guò)程完成從葉原基到單花器官的分化。

1.2 RNA提取及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

將樣品用干冰凍存寄送至北京百邁客生物科技有限公司進(jìn)行RNA提取及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。采用Trizol Reagent提取樣品總RNA，對(duì)質(zhì)檢合格的RNA樣品，用帶有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA；合成第一條cDNA鏈后，加入緩沖液、dNTPs、RNase H和DNA polymerase I合成第二條cDNA鏈；純化cDNA，進(jìn)行末端修復(fù)、加A尾并連接測(cè)序接頭；最后通過(guò)PCR富集得到cDNA文庫(kù)。用HiSeq4000進(jìn)行高通量測(cè)序，得到大量原始數(shù)據(jù)(Raw reads)。

1.3測(cè)序數(shù)據(jù)分析

過(guò)濾Raw reads后得到Clean reads，利用TopHat2軟件將這些Clean reads與大白菜基因組進(jìn)行序列比對(duì)，得到Mapped reads。使用Cufflinks對(duì)基因的表達(dá)水平進(jìn)行定量，以FPKM表示。以表達(dá)差異倍數(shù)FC≥2且錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率FDR<0.01為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出2份樣品間的差異表達(dá)基因(DEGs)，并對(duì)DEGs進(jìn)行統(tǒng)計(jì)及代謝通路分析。通過(guò)GO數(shù)據(jù)庫(kù)和擬南芥數(shù)據(jù)庫(kù)中的基因功能注釋?zhuān)Y選與花發(fā)育相關(guān)的基因。

1.4熒光定量PCR驗(yàn)證

從篩選出的大白菜花發(fā)育相關(guān)基因中選取幾個(gè)基因進(jìn)行熒光定量PCR驗(yàn)證，內(nèi)參基因?yàn)榇蟀撞薃CTIN，用Primer3軟件設(shè)計(jì)特異引物。確保各樣品總RNA為500 ng·μL-1，采用PrimeScript?RT reagent kit (Perfect Real Time) (TaKaRa，DRR037A) 試劑盒合成單鏈cDNA。qRT-PCR使用SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus) (TaKaRa，RR820A)試劑盒進(jìn)行，25 μL反應(yīng)體系包含20 ng cDNA。反應(yīng)條件為94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR反應(yīng)在ABI 7500 real-time PCR儀上進(jìn)行，相對(duì)定量采用ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 花發(fā)育過(guò)程差異表達(dá)基因統(tǒng)計(jì)

大白菜花芽分化1級(jí)和5級(jí)樣品測(cè)序得到的Clean reads數(shù)分別為51 790 824條和62 200 282條，Q30堿基百分比均超過(guò)95%，測(cè)序質(zhì)量較好。對(duì)花芽分化1級(jí)和5級(jí)樣品的基因進(jìn)行差異表達(dá)分析(V1_vs_V2)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)圖1?；ㄑ糠只?級(jí)與1級(jí)相比，共有2 859個(gè)差異表達(dá)基因，其中表達(dá)上調(diào)的有977個(gè)，下調(diào)的有1 882個(gè)。統(tǒng)計(jì)這些差異表達(dá)基因的表達(dá)變化倍數(shù)發(fā)現(xiàn)，大部分基因的FC為2～5，有1 575個(gè)，占55.1%，其中表達(dá)上調(diào)的有624個(gè)，下調(diào)的有951個(gè)；FC為5～10和10～100的基因個(gè)數(shù)接近，分別為670個(gè)和588個(gè)；FC>100的基因只有26個(gè)，不到1%。

圖1 V1_vs_V2差異表達(dá)基因統(tǒng)計(jì)Fig.1 Statistics of DEGs in V1_vs_V2

2.2 花發(fā)育過(guò)程差異表達(dá)基因代謝通路分析

為進(jìn)一步解讀基因功能，對(duì)2 859個(gè)大白菜花發(fā)育過(guò)程的DEGs進(jìn)行KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)注釋?zhuān)灿?98個(gè)DEGs注釋到KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)，其中有615個(gè)能注釋到116條代謝通路上。以Qvalue≤0.05為標(biāo)準(zhǔn)，篩選DEGs顯著富集的代謝通路，共5條，統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表1。

排在前3位的代謝通路分別是“苯丙素生物合成”、“苯丙氨酸代謝”和“黃酮類(lèi)化合物生物合成”。苯丙素是具有C6-C3芳香核骨架的一類(lèi)天然化合物的統(tǒng)稱(chēng)，包括簡(jiǎn)單苯丙素類(lèi)(如苯丙酸類(lèi)的阿魏酸、苯丙烯類(lèi)的丁香酚、苯丙醛類(lèi)的桂皮醛、苯丙醇類(lèi)的松柏醇等)、香豆素、木質(zhì)素和黃酮類(lèi)等芳香族化合物[13]。苯丙素可由苯丙氨酸和酪氨酸經(jīng)脫氨、羥基化反應(yīng)生成，在植物生長(zhǎng)發(fā)育、花香、著色及逆境抗性等活動(dòng)中有重要作用[14]。

表1 V1_vs_V2差異表達(dá)基因顯著富集的代謝通路Table 1 Significantly enriched KEGG pathway with DEGs in V1_vs_V2

注：Q-value為多重假設(shè)檢驗(yàn)校正之后的P-value，Q-value值越大表示DEGs的富集顯著性越可靠。
Note: Q-value is the P-value after multiple hypothesis testing. The larger the Q-value, the more reliable the enrichment of DEGs.

本試驗(yàn)中“苯丙氨酸代謝”為下調(diào)基因富集通路，下調(diào)基因占82.0%，其中“苯丙氨酸——苯丙酸”支路包含2個(gè)下調(diào)基因。在“苯丙素生物合成”通路中詳細(xì)介紹了“苯丙氨酸——簡(jiǎn)單苯丙素類(lèi)/香豆素/木質(zhì)素/黃酮類(lèi)化合物”的代謝過(guò)程。其中“苯丙氨酸——香豆素”支路包含1個(gè)上調(diào)基因和9個(gè)下調(diào)基因；“苯丙氨酸——木質(zhì)素”支路包含10個(gè)上調(diào)基因和31個(gè)下調(diào)基因；“苯丙氨酸——黃酮類(lèi)化合物”支路包含1個(gè)上調(diào)基因和2個(gè)下調(diào)基因；此外，“苯丙氨酸——阿魏酸/丁香酚/桂皮醛/松柏醇”等支路也以下調(diào)基因居多?？梢?jiàn)在大白菜花發(fā)育時(shí)期苯丙氨酸代謝和苯丙素生物合成過(guò)程都有所減弱。

“黃酮類(lèi)化合物生物合成”通路以“苯丙素生物合成”為起始，經(jīng)一系列反應(yīng)后生成柑橘素、槲皮素、楊梅素等眾多黃酮類(lèi)化合物，并進(jìn)一步連接“異黃酮生物合成”、“黃酮和黃酮醇生物合成”及“花青素生物合成”等通路。該通路富集的14個(gè)DEGs中有9個(gè)上調(diào)基因，占64.3%，可見(jiàn)在大白菜花發(fā)育時(shí)期黃酮類(lèi)化合物的合成代謝有所增強(qiáng)。

脂肪酸是植物的基本組份，它們既是細(xì)胞膜脂的主要成分又是重要的能源物質(zhì)，還是一些信號(hào)分子的前體，此外還與細(xì)胞識(shí)別和組織免疫等有密切關(guān)系[15]。大白菜花發(fā)育時(shí)期的“脂肪酸延長(zhǎng)”為上調(diào)基因富集的通路，13個(gè)DEGs均發(fā)生上調(diào)，說(shuō)明該時(shí)期脂肪酸大量合成。

晝夜節(jié)律對(duì)調(diào)控植物生理進(jìn)程、環(huán)境響應(yīng)和發(fā)育起著重要作用[16]，其中包括對(duì)開(kāi)花進(jìn)程的調(diào)控?！爸参飼円构?jié)律”通路中表達(dá)上調(diào)的DEGs占66.7%，其中包括構(gòu)成生物鐘反饋環(huán)的假應(yīng)答調(diào)節(jié)因子TOC1和PRR5?？梢?jiàn)在大白菜花發(fā)育過(guò)程中，晝夜節(jié)律發(fā)揮了重要作用。

2.3 花發(fā)育相關(guān)基因篩選

對(duì)2 859個(gè)大白菜花發(fā)育過(guò)程的DEGs進(jìn)行GO數(shù)據(jù)庫(kù)(Gene Ontology)功能注釋?zhuān)灿? 604個(gè)DEGs注釋到2 273個(gè)GO功能節(jié)點(diǎn)。對(duì)這些DEGs進(jìn)行分析，在FC>10的607個(gè)高差異表達(dá)基因中篩選功能描述與花發(fā)育相關(guān)的基因，共151個(gè)，包括48個(gè)上調(diào)基因和103個(gè)下調(diào)基因。研究這些基因的擬南芥同源基因的功能(https://www.arabidopsis.org/)，有29個(gè)基因的同源基因功能描述與擬南芥成花相關(guān)，除去1個(gè)大白菜基因組已公布的開(kāi)花基因Bra007123外，其余28個(gè)基因中有11個(gè)只顯示了在花發(fā)育過(guò)程的表達(dá)時(shí)期，而另17個(gè)則注明了在成花過(guò)程中的具體功能。

這17個(gè)基因的表達(dá)情況及功能描述統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表2。從表中可以看出，Bra013364等前12個(gè)基因的同源基因在擬南芥中參與花器官發(fā)育或促進(jìn)開(kāi)花，本試驗(yàn)中它們?cè)诨òl(fā)育過(guò)程表達(dá)上調(diào)，與功能一致；Bra034100的同源基因促進(jìn)擬南芥營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，延遲開(kāi)花，Bra012010的同源基因抑制擬南芥花芽分化，本試驗(yàn)中這2個(gè)基因在花發(fā)育過(guò)程表達(dá)下調(diào)，與功能一致；Bra034640、Bra004509和Bra003478這3個(gè)基因也參與花器官發(fā)育，但本試驗(yàn)中它們?cè)诨òl(fā)育過(guò)程表達(dá)下調(diào)，與功能描述不符。推測(cè)Bra013364等14個(gè)基因在大白菜中具有與擬南芥相似的功能，可進(jìn)一步研究。

表2 花發(fā)育過(guò)程高差異表達(dá)基因統(tǒng)計(jì)Table 2 Statistics of high expression change DEGs related to flower development

2.4 熒光定量PCR驗(yàn)證

選擇Bra030284、Bra021374和Bra034100基因進(jìn)行熒光定量PCR，結(jié)果見(jiàn)圖2。比較各基因的PCR結(jié)果與表2中的測(cè)序FPKM值，可以看出，二者的變化趨勢(shì)一致且變化倍數(shù)基本相似，表明測(cè)序結(jié)果真實(shí)可靠，也再次說(shuō)明這些基因可能在大白菜花發(fā)育中有著與擬南芥同源基因相似的功能，可深入研究。

圖2 熒光定量PCRFig.2 qRT-PCR

3 討論與結(jié)論

對(duì)大白菜花芽分化1級(jí)和5級(jí)的莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，比較花發(fā)育前后基因表達(dá)的差異，共發(fā)現(xiàn)2 859個(gè)DEGs，其中表達(dá)上調(diào)的有977個(gè)，下調(diào)的有1 882個(gè)。這些DEGs中能注釋到KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)的有998個(gè)，能注釋到GO數(shù)據(jù)庫(kù)的有2 604個(gè)。

在大白菜成花轉(zhuǎn)變時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組分析中[17]，DEGs顯著富集的前3條KEGG代謝通路為苯丙素生物合成、黃酮類(lèi)化合物生物合成和苯丙氨酸代謝，與本試驗(yàn)一致。苯丙素是花香的主要成分，而黃酮類(lèi)化合物是花、果實(shí)和種子的主要顯色物質(zhì)，此外它還能影響花瓣的伸長(zhǎng)，促進(jìn)花粉的萌發(fā)[18]。在大白菜花發(fā)育時(shí)期，苯丙氨酸代謝和苯丙素生物合成過(guò)程都有所減弱，而黃酮類(lèi)化合物的合成則有所增強(qiáng)，說(shuō)明黃酮類(lèi)化合物雖然作用于花瓣和花粉，但其代謝過(guò)程在花芽分化時(shí)期就已經(jīng)有明顯變化。此外，大白菜花發(fā)育過(guò)程還大量合成脂肪酸，并受到晝夜節(jié)律的調(diào)控，這些在普通白菜、水稻、仁用杏[19～21]等的花發(fā)育過(guò)程中都有相同表現(xiàn)。

在FC>10的607個(gè)高差異表達(dá)基因中篩選與花發(fā)育相關(guān)的基因，進(jìn)而通過(guò)研究擬南芥同源基因的功能及在大白菜花發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)變化趨勢(shì)，最終篩選出14個(gè)可能影響大白菜花發(fā)育的新基因。熒光定量PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示，Bra030284、Bra021374和Bra034100基因在大白菜花芽分化1級(jí)和5級(jí)表現(xiàn)出與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序相同的表達(dá)變化趨勢(shì)，說(shuō)明測(cè)序結(jié)果可靠，也說(shuō)明這些基因極有可能在大白菜花發(fā)育中有著與擬南芥同源基因相似的功能，可進(jìn)行進(jìn)一步研究。

[1]張藝能,周玉萍,陳瓊?cè)A,等.擬南芥開(kāi)花時(shí)間調(diào)控的分子基礎(chǔ)[J].植物學(xué)報(bào),2014,49(4):469-482.

[2]Kim S Y,Park BSKwon S J,Kim J,et al.Delayed flowering time inArabidopsisandBrassicarapaby the overexpression ofFLOWERINGLOCUSC(FLC) homologs isolated from Chinese cabbage (BrassicarapaL. ssp.Pekinensis)[J].Plant Cell Reports,2007,26(3):327-336.

[3]Qi X H,Townsley B,Aguilar-Martínez J A,et al. Cloning and characterization of theLFYhomologue from Chinese cabbage (Brassicarapasubsp.pekinensis)[J].Horticulture Environment and Biotechnology,2015,56(6):821-829.

[4]孫健冬.高通量測(cè)序技術(shù)在農(nóng)作物全基因組序列測(cè)定中的應(yīng)用概覽[J].生物技術(shù)進(jìn)展,2012,2(1):11-15.

[5]王翊.甘菊成花相關(guān)基因表達(dá)模式和功能的研究[D].北京:北京林業(yè)大學(xué),2012.

[6]孟珊.四季蜜龍眼LFY基因啟動(dòng)子克隆及嫁接新稍轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué),2013.

[7]宋猜,烏云塔娜,李慧,等.仁用杏花芽3個(gè)發(fā)育時(shí)期數(shù)字基因表達(dá)譜分析[J].園藝學(xué)報(bào),2015,42(8):1559-1568.

[8]費(fèi)元,韓雪,余紅,等.大巖桐花萼和幼葉轉(zhuǎn)錄組研究[J].園藝學(xué)報(bào),2015,42(12):2519-2525.

[9]Sun M,Qi X,Hou L,et al.Gene Expression Analysis of Pak Choi in Response to Vernalization[J].Plos One,2015,10(10)：e0141446.

[10]Wang F,Li L,Liu L,et al.High-throughput sequencing discovery of conserved and novel microRNAs in Chinese cabbage (BrassicarapaL. ssp.pekinensis)[J].Molecular Genetics and Genomics,2012,287(7):555-563.

[11]Wang F,Li H,Zhang Y,et al.MicroRNA expression analysis of rosette and folding leaves in Chinese cabbage using high-throughput Solexa sequencing[J].Gene,2013,532(2):222-229.

[12]Song H X,Fu C,Yin L H,et al.Cloning and expression analysis ofLEAFYhomologue in Pak Choi (Brassicarapasubsp.chinensis)[J].Biotechnology and Biotechnological Equipment,2015,29(6):1035-1042.

[13]劉雪蓮.六種苯丙素類(lèi)天然產(chǎn)物的合成及絕對(duì)構(gòu)型確定[D].哈爾濱:哈爾濱理工大學(xué),2014.

[14]董春娟,李亮,曹寧,等.苯丙氨酸解氨酶在誘導(dǎo)黃瓜幼苗抗寒性中的作用[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2015,26(7):2041-2049.

[15]盧善發(fā).植物脂肪酸的生物合成與基因工程[J].植物學(xué)通報(bào),2000,17(6):481-491.

[16]孫楓,劉裴清,董漢松.晝夜節(jié)律調(diào)控?cái)M南芥核黃素信號(hào)傳導(dǎo)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(2):17-20.

[17]齊仙惠.大白菜成花轉(zhuǎn)變基因篩選及內(nèi)源激素變化研究[D].太谷:山西農(nóng)業(yè)大學(xué),2016.

[18]劉飛.紅花黃酮類(lèi)化合物生物合成途徑關(guān)鍵酶基因的克隆與功能驗(yàn)證[D].上海:第二軍醫(yī)大學(xué),2014.

[19]宋紅霞.普通白菜成花轉(zhuǎn)變基因表達(dá)譜比較及BrcLFY基因克隆與表達(dá)分析[D].太谷:山西農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

[20]付永琦,向妙蓮,蔣海燕,等.水稻穎花開(kāi)放前漿片轉(zhuǎn)錄組變化[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,49(6):1017-1033.

(編輯：張莉)

ResearchontranscriptomeofBrassicarapasubsp.pekinensisflowerbudsatdifferentdevelopmentstages

Li Gaizhen1,2, Qi Xianhui1, Li Meilan2, Zhao Junliang1, Wang Xiuying1, Wu Dongtang1*

(1.InstituteofVegetables，ShanxiAcademyofAgricultureSciences，Taiyuan030031，China；2.CollegeofHorticulture，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu030801，China)

S634.1

A

1671-8151(2017)10-0701-06

2017-05-23

2017-06-20

李改珍(1979-)，女(漢)，山西離石人，副研究員，博士研究生，研究方向：大白菜新品種選育及生物技術(shù)應(yīng)用

*通信作者：巫東堂，研究員，碩士生導(dǎo)師，Tel: 13803430336; E-mail: wudongtangwu@sina.com.

國(guó)家大宗蔬菜太原綜合試驗(yàn)站(CARS-25)；大白菜種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用山西省科技創(chuàng)新重點(diǎn)團(tuán)隊(duì)(2014131016)；山西省財(cái)政支農(nóng)種業(yè)發(fā)展專(zhuān)項(xiàng)(2016zyzx53)；山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院育種工程(17yzgc095)