氣陰兩虛夾瘀型消渴目病血清細(xì)胞因子表達(dá)變化的研究

張文賢，曹明芳，王珊珊，吳 爽，李 婧

（1.福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建福州350100； 2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院眼科，福建福州350004；3.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350100）

氣陰兩虛夾瘀型消渴目病血清細(xì)胞因子表達(dá)變化的研究

張文賢1，曹明芳2，王珊珊1，吳 爽3，李 婧3

（1.福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建福州350100； 2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院眼科，福建福州350004；3.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350100）

目的：研究氣陰兩虛夾瘀型糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）患者血清血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、色素上皮細(xì)胞衍生因子（PEDF）含量的變化。方法：從福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院收集隨機(jī)健康體檢者30例為正常組、消渴病患者30例為DM組、氣陰兩虛夾瘀型消渴目病患者30例為DR組。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測正常組、DM組和DR組血清VEGF、PEDF含量，比較3組間血清VEGF、PEDF含量差異。結(jié)果：正常組、DM組和DR組血清VEGF含量逐漸上升，3組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=35.84，P＜0.01）；正常組、DM組和DR組血清PEDF含量逐漸下降，3組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=16.29，P＜0.01）。結(jié)論：血清VEGF、PEDF含量與消渴目病發(fā)生、發(fā)展有一定關(guān)系，血清VEGF含量隨著消渴目病病情發(fā)展逐漸上升，血清PEDF含量隨著消渴目病病情發(fā)展逐漸下降，二者可作為消渴目病發(fā)生、發(fā)展評估的指標(biāo)。

消渴目?。谎軆?nèi)皮生長因子；色素上皮衍生因子

消渴目病相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)糖尿病視網(wǎng)膜病變，有較高的致盲性。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WTO）估算，到2025年，全世界將有超過3億糖尿病患者［1］。隨著醫(yī)療技術(shù)水平的提高，消渴病患者壽命越來越長，而消渴目病引起失明的人數(shù)卻一直在升高，對消渴病患者生存及生活質(zhì)量造成不可估量的影響。本研究探討消渴目病的發(fā)生、發(fā)展機(jī)理，旨在預(yù)防消渴病向消渴目病的發(fā)展以及延緩已明確診斷的消渴目病患者的病情發(fā)展，提高消渴目病患者的生活質(zhì)量。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 一般資料 從福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院收集隨機(jī)健康體檢者30例為正常組、消渴病患者30例為DM組、氣陰兩虛夾瘀型消渴目病患者30例為DR組。正常組男23例，女7例，平均年齡（62.63±2.89）歲；DM 組中男 18 例，女 12例，平均年齡（65.10±7.13）歲；DR 組中男 18 例，女 12 例，平均年齡（65.80±9.29）歲。三組年齡經(jīng)單因素方差檢驗(yàn)，P=0.187＞0.05，三組性別經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P=0.292＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照1999年世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）制定的標(biāo)準(zhǔn)。DR診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)2002年國際臨床分級標(biāo)準(zhǔn)，將DR分為兩大類、六期。

1.1.2.2 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 氣陰兩虛夾瘀型消渴目病中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》制定。

1.1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 符合以上西醫(yī)、中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)，血壓、血糖控制平穩(wěn)；符合氣陰兩虛夾瘀型消渴目病中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)；患者年齡30～75歲；自愿加入本研究。

1.1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病患者；妊娠、哺乳期婦女；合并有糖尿病腎病等并發(fā)癥；依從性差，不能配合治療或者中途脫離以及失訪的患者。

1.2 方 法

標(biāo)本采集、檢測方法：3組病例均在采血前晚21：00點(diǎn)后禁食，第2天7：00點(diǎn)空腹抽取肘靜脈血，離心機(jī) 3 000 r/min 離心 15 min，取 2.0 mL 血清，分裝入兩個(gè)1.5 mL的離心管，－70℃冰箱密封保存，待收集完整血清后采用ELISA檢測血清VEGF、PEDF含量。檢測步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件進(jìn)行分析，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊，則采用單因素方差分析；若有一組不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

3組血清VEGF含量經(jīng)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)后，Z=35.84，P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血清PEDF 含量經(jīng) Kruskal-Wallis檢驗(yàn)后，Z=16.29，P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常組、DM組和DR組血清VEGF含量逐漸上升，血清PEDF含量逐漸下降，3 組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表13組血清VEGF、PEDF含量 （pg/mL）

表13組血清VEGF、PEDF含量 （pg/mL）

組別 例數(shù) 血清VEGF 血清PEDF正常組 30 16.85±8.73 2 359.17±317.79 DM 組 30 23.48±5.14 2 324.66±786.47 DR 組 30 28.68±5.24 1 860.44±678.15

3 討論

消渴目病以“氣陰兩虛為本、血瘀為標(biāo)”為基本病機(jī)，氣陰兩虛夾瘀為其病機(jī)特點(diǎn)，血瘀貫穿病程的始終［2］。研究發(fā)現(xiàn)，VEGF是導(dǎo)致視網(wǎng)膜新生血管形成的主要原因之一，VEGF也與糖尿病性黃斑水腫關(guān)系密切，PEDF是對新生血管生長有抑制作用的主要因子［3］。臨床醫(yī)學(xué)研究顯示，VEGF和PEDF動(dòng)態(tài)平衡的打破是糖尿病微血管病變的基礎(chǔ)［4］，糖尿病患者高血糖狀態(tài)引起視網(wǎng)膜缺血、缺氧，使視網(wǎng)膜內(nèi)VEGF水平逐漸上升，而PEDF水平逐漸下降，打破VEGF與PEDF之間的動(dòng)態(tài)平衡，造成DM患者眼底微血管病變。VEGF可以促進(jìn)DM患者血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及新生血管生成，VEGF與DR患者視網(wǎng)膜新生血管的生成有密切關(guān)系［5－7］。DR 患者血清內(nèi) VEGF 含量遠(yuǎn)高于健康體檢者，這也證實(shí)了血清VEGF含量與DR病情發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［8］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示，眼內(nèi)液VEGF和PEDF含量與糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生、發(fā)展有相關(guān)性［9－10］，隨著 DM 病程的發(fā)展，DM大鼠視網(wǎng)膜組織里VEGF陽性表達(dá)逐漸增強(qiáng)［11］，視網(wǎng)膜內(nèi)PEDF的陽性表達(dá)卻逐漸減弱，從而打破VEGF與PEDF之間的動(dòng)態(tài)平衡。研究顯示，VEGF的上調(diào)與PEDF的下調(diào)與糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生、發(fā)展有相關(guān)性［12－13］。PEDF 是通過抑制VEGF促糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移的作用，從而抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠眼底視網(wǎng)膜新生血管形成［14－15］。

本研究結(jié)果顯示，正常組、DM組和DR組3組血清VEGF含量逐漸上升，血清PEDF含量比較逐漸下降，3組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。查閱相關(guān)文獻(xiàn)，并結(jié)合本研究可以推測眼內(nèi)液中高含量VEGF一方面可能是由于糖尿病患者高糖狀態(tài)下缺血、缺氧的視網(wǎng)膜分泌的，另一方面可能是消渴目病患者由于血－視網(wǎng)膜屏障受損，VEGF從血清轉(zhuǎn)移至眼球內(nèi)。

通過本試驗(yàn)我們可證實(shí)，血清VEGF、PEDF含量與DR的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，血清VEGF含量隨著消渴目病病程發(fā)展呈逐漸上升趨勢，血清PEDF含量隨著消渴目病病程發(fā)展呈逐漸下降趨勢，二者可作為消渴目病發(fā)生、發(fā)展評估的指標(biāo)。

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（編輯：張世霞）

Study on the changes of serum cytokine expression in patients with diabetic retinopathy（deficiency of Qi and Yin with blood stasis syndrome）

Zhang Wenxian1，Cao Mingfang2，Wang Shanshan1，Wu Suang3，Li Jing3
（1.Fujian Health College，F(xiàn)uzhou Fujian 350100；2.Ophthalmology Department，People′s Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou Fujian 350004；3.Fujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou Fujian 350100）

Objective：To study the expression of VEGF and PEDF in patients with diabetic retinopathy（DR）.Method：30 normal volunteers（normal group）in medical center，30 cases of patients with diabetesbut without DR （DM group）in endocrinology，30 cases of patients with DR in ophthalmology（DR group）were collected.The serum VEGF and PEDF levels were detected by enzyme－linked immunosorbent assay（ELISA）in three groups.Result：Serum VEGF levels were risen gradually and PEDF levels were decreased of normal group，DM group and DR group，the difference among three groups was significant（P＜0.01）.Conclusion：Serum VEGF and PEDF levels may be related to occurrence and development of DR.With progression of DR，VEGF level was increased，but PEDF was decreased gradually.Both VEGF and PEDF can be used as indicators to assess development of DR.

diabetic retinopathy；vascular endothelial growth factor；pigment epithelium derived factor

R755.4

：A

：1671-0258（2017）03-0057-03

福建省中醫(yī)臨床研究基地重點(diǎn)中醫(yī)?？疲▽２。┲饕》N臨床診療優(yōu)化方案科研項(xiàng)目（zlcyk02）；福建省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥重點(diǎn)課題（wzzyb090）

張文賢，助教，醫(yī)學(xué)碩士，E－mail：326351089@qq.com

曹明芳，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，E－mail：332079294@qq.com