白疕膠囊對銀屑病小鼠模型的干預(yù)機制研究

張 倩，彭 陶，石紅喬

? 中醫(yī)中藥 ?

白疕膠囊對銀屑病小鼠模型的干預(yù)機制研究

張 倩，彭 陶，石紅喬

目的 觀察白疕膠囊（土鱉蟲，穿心蓮，珍珠母，烏梢蛇）對銀屑病小鼠陰道上皮有絲分裂及尾部鱗片表皮顆粒層的影響及其量效關(guān)系，并探討其作用機制。方法 采用雌激素灌胃刺激小鼠陰道上皮組織增生的方法制作銀屑病小鼠動物模型，直接利用小鼠尾部鱗片模型，給予白疕膠囊不同劑量（0.72 g/kg，0.36 g/kg），甲氨蝶呤（MTX）2 mg/kg及生理鹽水（NS）進行干預(yù)，14 d后計數(shù)小鼠陰道上皮有絲分裂指數(shù)和小鼠尾部顆粒層鱗片數(shù)。結(jié)果 與對照組相比，白疕膠囊的各劑量組及MTX組對小鼠陰道上皮基底細胞有絲分裂均具有不同程度的抑制作用（P＜0.05）；且均能促進鼠尾鱗片表皮顆粒層的形成（P＜0.05），從而促進表皮的正常分化。結(jié)論 白疕膠囊可通過抑制上皮細胞有絲分裂和促進表皮顆粒層生成發(fā)揮治療銀屑病的作用。

銀屑??；白疕膠囊；陰道上皮有絲分裂指數(shù)；尾部顆粒層鱗片數(shù)

[J Pract Dermatol, 2017, 10(4):234-236]

銀屑病是一種以紅斑鱗屑為主要表現(xiàn)的常見并易復(fù)發(fā)的慢性炎癥性皮膚病。在臨床治療中，中醫(yī)藥治療銀屑病用藥靈活、不良反應(yīng)少，具有明顯的優(yōu)勢。銀屑病至今病因不明，是內(nèi)、外因素共同作用的結(jié)果。筆者在多年的臨床治療中發(fā)現(xiàn)，血分有熱雖然是銀屑病的主因[1]，但血熱而夾風(fēng)夾瘀，則是該病的重要病理因素。對本病的治療，不僅強調(diào)清熱涼血，也應(yīng)重視搜風(fēng)和活血，在治療中往往采用清熱活血搜風(fēng)法而取得佳效。正常小鼠尾部鱗片表皮天然缺少顆粒層，類似人類銀屑病表皮分化障礙的組織病理改變，是目前該領(lǐng)域研究中公認的經(jīng)典動物模型。本研究利用銀屑病小鼠陰道上皮和鼠尾鱗片動物模型，觀察白疕膠囊對小鼠陰道上皮細胞有絲分裂及鼠尾鱗片表皮顆粒層生成的影響，探討其治療銀屑病的可能機制。

1 材料與方法

1.1 材料

白疕膠囊（南京市中醫(yī)院自制制劑，主要成分：穿心蓮葉，烏梢蛇，土茯苓，珍珠母），苯甲酸雌二醇注射液（上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號：06080501），甲氨蝶呤（MTX）片（上海醫(yī)藥信誼制藥總廠，準(zhǔn)字號H31020644）。SPF級KM小鼠，體重（26±2）g，雌雄不限，上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供。電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進醫(yī)療器械廠）、石蠟包埋機（ECll50型，德國徠卡公司生產(chǎn)）。旋轉(zhuǎn)式組織脫水機（型號：4634，規(guī)格：24114）。舒適切片機（型號：CRM硝0，規(guī)格：22950）。

1.2 方法

1.2.1 雌激素周期小鼠陰道上皮模型 實驗開始前3 d，向雌鼠灌胃苯甲酸雌二醇，每次10 mg/kg，每日1次，連續(xù)3 d，使小鼠陰道上皮處于雌激素期，模擬銀屑病表皮增生過快的特點。各組動物分別稱質(zhì)量，按體質(zhì)量灌飼器灌胃給藥，每日1次，連用3 d。

1.2.2 小鼠尾部鱗片表皮模型 小鼠尾部鱗片表皮因正常角化無顆粒層形成，可直接模擬銀屑病分化障礙、角化不全的特點。

1.2.3 分組及給藥 ① 白疕膠囊對各組小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響：實驗選擇雄性健康小鼠40只，隨機分為生理鹽水（NS）組、白疕高劑量組、白疕低劑量組、MTX組，每組10只，按10 ml/kg的劑量灌胃給藥。低劑量組予白疕膠囊水溶液0.36 g/kg,高劑量組予白疕膠囊水溶液0.72 g/ kg，MTX組為MTX水溶液4 mg/kg，NS組給予等容積NS。每日1次,連續(xù)14 d。14 d后處死小鼠，取尾部，行常規(guī)組織病理檢查。②白疕膠囊對小鼠雌激素期陰道上皮有絲分裂的影響：實驗選擇雌性健康小鼠50只，隨機分5組，每組10只。除正常對照組外，其余各組均制成雌激素周期小鼠陰道上皮模型，各組分別進行以下干預(yù)：陽性對照組用MTX水溶液(4 mg/kg)，模型對照組用NS 0.1 ml/10 g，白疕膠囊低劑量組用白疕膠囊水溶液0.36 g/kg，白疕膠囊高劑量組用白疕膠囊水溶液0.72 g/kg，正常對照組系未灌胃苯甲酸雌二醇組，給以相同體積的NS 0.1 ml/10 g。每日1次，連續(xù)3 d。末次給藥后2 h腹腔注射秋水仙堿2 mg/kg，6 h后處死小鼠。取其陰道組織，用10%福爾馬林固定，行組織病理檢查。

1.2.4 實驗方法與指標(biāo)檢測①小鼠陰道上皮細胞有絲分裂指數(shù)：給藥2 h后腹腔注射秋水仙堿2 mg/kg， 6 h后處死小鼠，取其陰道組織，l0%甲醛溶液固定，石蠟包埋，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡下計數(shù)300個基底細胞中的有絲分裂個數(shù)，折算出每100個基底細胞中的有絲分裂數(shù)，稱為有絲分裂指數(shù)，比較各組小鼠陰道上皮細胞的有絲分裂指數(shù)。②小鼠尾部表皮有顆粒層的鱗片：在光學(xué)顯微鏡下觀察每個小鼠的尾部鱗片，凡鱗片表皮有連續(xù)成行的顆粒細胞者，稱為有顆粒層形成的鱗片。分別計數(shù)每100個鱗片中有顆粒層的鱗片數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0軟件，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，組間比較采用多個獨立樣本的非參數(shù)檢驗及兩兩比較，采用最小顯著差異檢驗，非正態(tài)或方差不齊，采用單因素方差分析，檢驗水平a=0.05。

2 結(jié)果

2.1 白疕膠囊對各組小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響

NS組缺乏或僅有少量的顆粒層，白疕膠囊高、低劑量組和MTX組顆粒層細胞均有不同程度的增加，各劑量組分別與NS組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。白疕膠囊各劑量組之間比較，白疕膠囊高劑量組與MTX組比較，有絲分裂指數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；而白疕膠囊低劑量組與MTX組比較，有絲分裂指數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明白疕膠囊和MTX均能顯著促進鼠尾鱗片表皮顆粒層的形成，從而促進表皮的正常分化。結(jié)果見表1、圖1。

表1 白疕膠囊對鼠尾鱗片顆粒層的影響 （xˉ±s）

圖1 白疕膠囊對各組小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響（HE染色×100）

2.2 白疕膠囊對小鼠雌激素期陰道上皮有絲分裂的影響

光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，灌胃過苯甲酸雌二醇的模型組小鼠陰道上皮呈多層上皮, 出現(xiàn)角化, 與正常組相比,上皮基底細胞有絲分裂明顯，證明屬于雌激素周期的陰道上皮。正常對照組與模型對照組比較，有絲分裂指數(shù)明顯較低（P＜0.05），造模成功。與模型對照組相比，白疕低劑量組、白疕高劑量組、甲氨蝶呤組對小鼠陰道上皮基底細胞有絲分裂均具有顯著的抑制作用，有絲分裂指數(shù)明顯降低（P＜0.05）。白疕膠囊高、低劑量組之間比較，白疕膠囊高劑量組與MTX組比較，有絲分裂指數(shù)均無明顯差異（P＞0.05）；而白疕膠囊低劑量組與MTX組比較，有絲分裂指數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表2、圖2。

表2 白疕膠囊對小鼠雌激素期陰道上皮有絲分裂的影響 （xˉ±s）

3 討論

銀屑病的發(fā)病機制復(fù)雜，是由多種因素共同參與的慢性免疫性疾病，其發(fā)病率高，在目前的臨床中也是較難攻克的皮膚疾病之一。

中醫(yī)認為銀屑病從血分辨證是重點，血熱論、血瘀論、血虛論三大學(xué)說占重要地位。3 種分型在銀屑病的病情轉(zhuǎn)化時間上無明確界限，是逐漸過渡的[1,2]。筆者在多年的臨床治療中發(fā)現(xiàn)，血分有熱雖然是銀屑病的主要因素[3,4]，但血熱伴隨有夾風(fēng)夾瘀，則是該病的重要病理因素。血熱是發(fā)病的關(guān)鍵，因熱可以致瘀，因熱也可以致虛，血虛亦可致瘀，瘀久又可化熱，形成不良循環(huán)，導(dǎo)致瘀熱互結(jié)，經(jīng)絡(luò)阻滯，氣血失常。白疕屬實證范疇，且不會由實轉(zhuǎn)虛，但可兼夾虛證。風(fēng)為百病之長，兼顧五氣，銀屑病患者既有外感風(fēng)邪，亦見熱極生風(fēng)，風(fēng)熱之邪，交織于肌膚，則有癢感，久之生燥，出現(xiàn)紅斑上厚厚的皮屑。因此，對本病的治療，除了重視清熱涼血之外，還應(yīng)重視搜風(fēng)和活血，在治療中經(jīng)常采用清熱活血搜風(fēng)法而取得良好的效果。

白疕膠囊由地鱉蟲，穿心蓮，珍珠母，烏梢蛇4味藥物組成，其中地鱉蟲破血逐瘀，祛除沉積肌膚之瘀邪，祛瘀生新?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，銀屑病患者血瘀型血液黏度、紅細胞壓積增高；血燥證紅細胞沉降率增快[5]，而地鱉蟲能改善血液流變學(xué)指標(biāo)，可使血細胞比容、高切黏度、全血低切黏度等均明顯降低，具有明顯的抗凝血和抗血栓作用[6]。穿心蓮具有清熱解毒、涼血消腫的功效。臨床研究表明，穿心蓮有消炎抗菌、抗病毒作用，其提取物能降低血液黏度，增強纖溶性，擴張血管，促進血栓溶解。珍珠母平肝清肝，祛風(fēng)養(yǎng)顏濡膚，清熱安神，能改善患者焦慮情緒。烏梢蛇搜風(fēng)剔邪、止癢，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實，烏梢蛇有消炎、鎮(zhèn)靜作用。諸藥合用，以活血化瘀藥物為君，祛瘀活血，用清熱藥物來清除血熱，消除紅斑，在搜風(fēng)藥物的輔助下，剔除沉疴積邪，達到清熱活血搜風(fēng)的作用，從而能安全有效治療血瘀型銀屑病。

正常小鼠尾部鱗片表皮天然缺少顆粒層，類似人類銀屑病表皮分化障礙的組織病理改變，因此本實驗采用此模型來評價藥物促進顆粒層形成的作用。實驗結(jié)果表明，白疕膠囊對鼠尾鱗片顆粒層有一定的誘導(dǎo)作用，因而可以認為白疕膠囊對銀屑病的角化不全等主要組織病理表現(xiàn)有良好的治療作用。

圖2 白疕膠囊對各組小鼠雌激素期陰道上皮有絲分裂的影響（HE染色 ×100）

其次，銀屑病的組織病理主要表現(xiàn)為角質(zhì)增厚，角化不全。本實驗選用雌激素周期的小鼠陰道上皮模擬銀屑病的皮損，因為其有表皮細胞增殖活躍，有絲分裂增多的共同特點，故以此為據(jù)評價和探討白疕膠囊的治療效果。白疕膠囊對小鼠雌激素期陰道上皮有絲分裂有明顯抑制作用，可能是因為免疫功能紊亂引起細胞核分裂旺盛，角質(zhì)形成細胞增殖加速，表皮更替時間縮短，而造成表皮增厚的銀屑病，由于白疕膠囊對有絲分裂的抑制而產(chǎn)生的治療作用。

本文實驗證實了白疕膠囊對銀屑病的治療作用，彌補了循證醫(yī)學(xué)的結(jié)果缺乏實驗證明的空白，為臨床繼續(xù)應(yīng)用該藥治療銀屑病提供了實驗依據(jù)。本文實驗同時發(fā)現(xiàn)，不同劑量白疕膠囊藥物組與MTX組比較，低劑量組與MTX組結(jié)果有差異，而高劑量組與MTX組比較統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異?？赡茉谥委熯^程中，如果要達到其他類藥物的同等預(yù)期療效，在該藥物劑量的把握控制使用方面有待進一步細化探究，臨床醫(yī)生可根據(jù)自己的經(jīng)驗掌握，適時調(diào)整用藥量，同時也為后期的臨床試驗設(shè)計起到指導(dǎo)作用。

[1] 秦萬章. 血燥證理論在皮膚科中的應(yīng)用 [J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志, 2014, 13(1):1-6.

[2] 姜燕生. 尋常型銀屑病辯證論治思路 [J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志,2014, 4(21):4.

[3] 周博, 魏躍鋼. 魏躍鋼教授治療尋常型銀屑病血熱證的臨床經(jīng)驗[J]. 中醫(yī)藥導(dǎo)報, 2011, 17(2):4-5.

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Effects of BAIBI capsules on psoriatic mice and its mechanism of action

ZHANG Qian，PENG Tao，SHI Hong-qiao
Department of Dermatology, Jiangsu Nanjing Traditional Chinese Medicine Hospital, Nanjing 210000, China

Objective To investigate the effects of BAIBI capsules on mice models of psoriasis, including estrogen induced vaginal epidermis mouse model and mouse tails’ model, and to explore its mechanism of action. Methods The induced vaginal epidermis mouse model was established by feeding the mouse with estrogen to facilitate the formation of their vaginal epidermis, meanwhile the mouse tails’model was built by using mouse tails that were born without stratum granulosum. BAIBI capsules of the different concentrations (0.72 g/kg,0.36 g/kg), normal saline and MTX were given to mouse models for 14 days, then the mitotic index of the mouse’s vaginal epithelia and the number of mouse-tails’ granular fakes were evaluated. Results Compared with the control groups, each dose of the two medicine inhibited mouse vaginal epithelial mitosis(P＜0.05), and the medicines also facilitated the formation of the granular layers in the flakes of the mousetails(P＜0.05). Conclusion BAIBI capsules could help alleviate psoriasis through inhibiting mouse vaginal epithelial mitosis and facilitating the formation of the granular layers in the fakes of the mouse tails.

Psoriasis；BAIBI capsule；Mitotic vaginal epithelial mitosis；Formation of the granular layers

R758.5

A

1674-1293(2017)04-0234-03

張 倩

2016-02-02

2016-06-20）

（本文編輯 耿建麗）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170414

210000 南京，南京市中醫(yī)院皮膚科 （張倩，彭陶，石紅喬）

張倩，主治醫(yī)師，碩士研究生，研究方向：痤瘡，銀屑病，E-mail: zq_njmu@126.com

石紅喬，E-mail: 454758088@qq.com