• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    北京地區(qū)某醫(yī)院水痘帶狀皰疹病毒基因型的測定

    2017-09-29 12:04:31夏天保劉建軍劉軍連呂世超
    實用皮膚病學雜志 2017年4期
    關鍵詞:北京地區(qū)水痘帶狀皰疹

    夏天保,馮 凱,米 霞,劉建軍,劉軍連,陳 娓,呂世超

    北京地區(qū)某醫(yī)院水痘帶狀皰疹病毒基因型的測定

    夏天保,馮 凱,米 霞,劉建軍,劉軍連,陳 娓,呂世超

    目的 測定北京地區(qū)帶狀皰疹患者水痘帶狀皰疹病毒的基因型。方法 采用測序的方法測定帶狀皰疹患者水痘-帶狀皰疹病毒ORF22、ORF38、ORF54基因序列。結(jié)果 基因分析結(jié)果顯示:北京地區(qū)306醫(yī)院8株水痘帶狀皰疹病毒臨床分離株中基因型均為J型,其中ORF22 序列中37990位點有1例存在A-G的突變。結(jié)論 北京地區(qū)306醫(yī)院的水痘帶狀皰疹病毒臨床分離株中基因型均為J型,其中ORF22 序列中37990位點存在1例A-G的突變。

    帶狀皰疹;水痘-帶狀皰疹病毒;泛昔洛韋;帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛;基因型

    [J Pract Dermatol, 2017, 10(4):197-200]

    水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)是一種人類皰疹病毒,在幼兒通常引起水痘。原發(fā)感染后病毒潛伏終身,并經(jīng)常在成年人或老年人引起帶狀皰疹。VZV基因組包含125 kb的線性雙鏈DNA,包括一長一短獨特的區(qū)域,每個兩側(cè)的反向重復序列[1],和5個內(nèi)部重復區(qū)域(R1~R5)已經(jīng)確定。VZV基因組中至少含有71個開放閱讀框(ORF),編碼許多有功能的蛋白。Loparev 等[2]報道一個簡單的分類方法,就是把野生型VZV菌株分成3個主要的亞型, E(歐洲),J(日本),和M(嵌合型),使用SNP識別ORF22讀碼框的447 bp的區(qū)域。Loparev 等[2]從最近的臨床感染中得到的323株分布在全球各地的病毒株代表目前循環(huán)菌株(歐洲、亞洲、非洲、大洋洲和美洲),可以很容易地被分配到3個基因型中的一個。此外,從這一分析中每個基因型的區(qū)域特異性是顯而易見的,這些數(shù)據(jù)揭示了主要基因型及其地理分布之間的進化關系。結(jié)果將有助于預測未來的進化模式和跟蹤病毒流行病學的變化,這必然伴隨著活躍的疫苗接種計劃。

    中國關于VZV分離株基因型的報道也逐漸增多,楊吉星等[3]2008年報道上海地區(qū)VZV的基因型是J型。馬瑞等[4]2012年報道寧波市的15株VZV基因型中,J型13株,M1型2株,而北京地區(qū)的VZV分型文獻較少。因此,筆者擬測定北京地區(qū)306醫(yī)院帶狀皰疹患者VZV的基因型,對該院的12例水痘和帶狀皰疹患者的皰液進行檢測和分析。

    1 病例與方法

    1.1 病例

    1.1.1 臨床資料 選擇2014年12月1日—2015年1月10日至解放軍306醫(yī)院就診的水痘和帶狀皰疹患者,且能在水皰皮損中收集到皰液。共收集符合條件的患者12例,其中男8例,女4例;年齡18~75歲。均為漢族(無血緣關系),血常規(guī)、肝功能、血脂均正常。

    1.1.2 入選標準 ①臨床明確診斷的水痘或帶狀皰疹,患者的皮損時間為3 d以內(nèi);②年齡18~75歲;③性別不限。排除標準:①惡性腫瘤患者;②患有影響免疫功能的系統(tǒng)性疾病患者(甲亢或甲減或糖尿?。?;③近期內(nèi)應用過糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑患者;④妊娠期和哺乳期婦女;⑤腎功能損害者;⑥人免疫缺陷病毒(HIV)陽性患者。所有入選患者均簽署知情同意書,并經(jīng)過醫(yī)學倫理委員會同意。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 標本處理 采集患者早期的皰液100 μl,置于-20℃低溫冰箱保存待檢。試劑儀器、全血直接聚合酶鏈反應 (PCR)試劑盒、DNA Marker DL2000,瓊脂糖、PCR管、凝膠成像系統(tǒng),PCR VZV DNA,試劑和儀器由北京百奧森泰生物技術有限公司提供。

    1.2.2 檢測方法 對ORF22讀碼框的447 bp的PCR目標區(qū)進行擴增,采用5 μl的DNA提取液(來自水痘或帶狀皰疹患者皮損的DNA提取液)。反應物:每20個堿基的引物100 pmol和2.5 U Taq DNA聚合酶(Applied Biosystems)。運行條件:95℃ 3 min, 95℃ 1 min,25個循環(huán),50℃ 1 min,72℃ 3 min,72℃ 10 min。

    1.2.3 PCR引物 ORF22引物:p22r1f(5 -GGG TTT TGT ATG AGC GTT GG-3 ;positions 37837 to 37856),反 向 引 物 p22r1r(5 -CCC CCG AGG TTC GTA ATA TC-3;positions 38383 to 38356)被設計出來擴增出447 bp的片段(位置37837~38264)。ORF38引物:上游AAG TTT CAG CCA ACG TGC CAA TAA A,下游 AGA CGC GCT TAA CGG AAG TAA CG。ORF54引物:上游(F) CGT AAT GCA TAA CAG GCC AAC AC,下游 (R)GAA ACC TGG CGT CAA ACA TTA CA。

    1.2.4 測序與分析 PCR產(chǎn)物通過1.5%瓊脂糖凝膠電泳(含EB)(Invitrogen)在紫外線下拍照。對分離的產(chǎn)物進行測序。測序的結(jié)果與GeneBank中VZV參考株Dumas進行序列比較,并分析其中的單核苷酸多態(tài)性,判斷北京地區(qū)306醫(yī)院VZV的基因型。

    2 結(jié)果

    2.1 瓊脂糖凝膠水平電泳

    PCR 產(chǎn)物 5 μl,6×Loading Buffer 1 μl混勻后加入泳道;Takara DNA Marker DL2000作為標準分子量對照; 5 V/cm電壓電泳30 min。DNA marker DL 2000(TAKARA)作參照,紫外燈下觀察結(jié)果并攝像(圖1-3)(該DNA marker為DL 2000,分別為100、250、500、750、1 000、2 000 bp)。

    2.2 經(jīng)PCR對所有產(chǎn)物進行測序。

    從臨床采集的12份標本中經(jīng)鑒定得到8株VZV臨床分離株,病毒分離陽性率為66.7%。Loparev等[2]利用ORF22的 37902、38019、38055、38081、38177、38229位這6個位點的核苷酸序列的不同將VZV分為E、J、M 3個基因型?;蚍治鼋Y(jié)果顯示北京地區(qū)306醫(yī)院8株VZV臨床分離株中基因型均為J型,其中ORF22 序列中37990位點存在1例A-G的突變(表1,圖4)。對北京市VZV分離株ORF38、 ORF54測序,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其ORF38 Pstl+,ORF54Bgll+,而Dumas分離株ORF38 Pstl+,ORF54 Bgll-。

    圖1 水痘-帶狀皰疹病毒ORF22 PCR電泳圖 (PCR產(chǎn)物為418 bp)

    圖2 水痘-帶狀皰疹病毒ORF38 PCR電泳圖(PCR產(chǎn)物為602 bp)

    圖3 水痘-帶狀皰疹病毒ORF54 PCR電泳圖(PCR產(chǎn)物為468 bp)

    表1 北京市VZV分離株ORF22的SNPs位點差異

    3 討論

    圖4 水痘帶狀皰疹病毒臨床分離株ORF22 序列測序圖

    VZV基因組具有很好的遺傳穩(wěn)定性,在不同毒株間其基因組變異率僅為0.05%~0.06%,比人類其他皰疹病毒基因組變異率低5~10倍,這種情況給VZV的基因分型帶來了巨大的挑戰(zhàn)。Loparev等[2]報道一個簡單的分類方法,就是把野生型VZV菌株分成3個主要的亞型,E(歐洲),J(日本),和M(嵌合型),使用SNP識別ORF22讀碼框的447 bp的區(qū)域,ORF22讀碼框這部分能夠滿足用于檢測低滴度的臨床標本和可靠地識別病毒DNA的3個主要基因型。無論是多個開放讀碼框的基因單核苷酸多態(tài)性分析和ORF22讀碼框的SNP分析,均能準確無誤地解決VZV基因分型,在高度傳代的歐洲和日本菌株,ORF22對于基因型的區(qū)域高度選擇是穩(wěn)定的。

    在全球各地的VZV分離株中評價ORF38(PstI)和ORF54(BglI)單核苷酸多態(tài)性的分布。直接的測序分析是最準確的和最信息化的方法,它可識別單核苷酸多態(tài)性,單核苷酸多態(tài)性對病毒株的分類是有用的。Loparev等[2]采用這種方法在臨床樣本選定區(qū)域直接測序進行研究。在RFLP分析數(shù)據(jù)的基礎上,對主要目標進行排序;最不同的模式被推定為準確地反映菌株的變化。該作者對全球各地的菌株進行了目標ORF測序,與已發(fā)表的ORF38 PstI位點和ORF54 BglI位點進行比較。

    大多數(shù)在美國收集的VZV菌株參照歐洲的Dumas 菌株具有最大的整體相似性,同樣所有日本的菌株與其他日本菌株表現(xiàn)出最大的相似性,而與Dumas和美國大多數(shù)菌株具有最大的不同。

    本研究采用已經(jīng)建立的SNP分析方法對VZV ORF22、38、54中的SNP位點進行了序列分析。依據(jù)Loparev的分類方法,將野生型VZV菌株分成3個主要的亞型, E(歐洲),J(日本),和M(嵌合型)。筆者從臨床采集的12份標本中經(jīng)鑒定得到8株VZV臨床分離株,病毒分離陽性率為66.7%。基因分析結(jié)果顯示北京地區(qū)8株水痘帶狀皰疹病毒臨床分離株中基因型均為J型,其中ORF22 序列中37990位點存在1例A-G的突變。

    Loparev等也證實了以前的報告[4,6],大多數(shù)現(xiàn)代日本菌株的酶切位點有PstI +BglI+限制性酶切位點(檢查的20株100%)。有趣的是,3種具有PstI - BglI+野生型菌株VZV 2002年在夏威夷被分離出來。所有的PstI / BglI基因分型同時進行RFLP分析和用FRET探針熔點進行分析,兩種方法觀察完全一致。對326份來自不同區(qū)域的菌株進行評估,這項研究證實了使用的LightCycler FRET分析方法來識別單核苷酸多態(tài)性是有效的。

    306醫(yī)院VZV基因分型的意義主要體現(xiàn)在水痘和帶狀皰疹的流行病學和疫苗研制方面。雖然北京地區(qū)現(xiàn)在水痘疫情已經(jīng)大大減少,但有些區(qū)域偶有水痘暴發(fā),且北京地區(qū)人口密集,外來人口較多,因此水痘暴發(fā)的原因很復雜且很難控制。而VZV的基因分型則可以幫助掌握VZV的流行病學特征,快速查明VZV毒株的來源,追蹤VZV在好發(fā)人群的傳播情況,切斷傳播的路線,及時控制疫情的發(fā)展及蔓延。為了更全面地掌握北京地區(qū)VZV基因型的分布,作者下一步應當擴大標本量,同時記錄VZV患者的臨床特征和相關的一些信息,深入探索VZV基因型與病毒感染和疫苗防疫之間以及和地理位置之間的關系。

    [1] Takayama M, Takayama N. Long PCR amplification of varicella-zoster virus DNA in clinical specimens from the patients with varicella and herpes zoster [J]. Kansenshogaku Zasshi, 2002,76(5):347-354.

    [2] Loparev VN, Gonzalez A, Deleon-Carnes M, et al. Global identification of three major genotypes of varicella-zoster virus:longitudinal clustering and strategies for genotyping [J]. J Virol,2004,78(15):8349-8358.

    [3] 楊吉星, 居麗雯, 施強, 等. 上海地區(qū)水痘-帶狀皰疹病毒基因型研究 [J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2008, 2(18):223-224.

    [4] LaRussa P, Lungu O, Hardy I, et al. Restriction fragment length polymorpHism of polymerase chain reaction products from vaccine and wild-type varicella-zoster virus isolates [J]. J Virol, 1992,66(2):1016-1020.

    [5] 馬瑞, 徐國章, 李翔, 等. 寧波市水痘-帶狀皰疹病毒株臨床流行株基因分型 [J]. 中國公共衛(wèi)生, 2012, 28(5):659-660.

    [6] LaRussa P, Steinberg S, Arvin A, et al. Polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorpHism analysis of varicellazoster virus isolates from the United States and other parts of the world [J]. J Infect Dis, 1998, 178(Suppl 1):S64-S66.

    (本文編輯 耿建麗)

    書 訊

    由楊蓉婭、戴耕武、潘寧教授主編的《皮膚外科學》第2版已正式與廣大讀者見面。全書共100余萬字,相比第1版增加了新觀念、新方法和新技術,補充了部分以皮膚外科治療為主的疾病種類,將激光醫(yī)學與注射美容等前沿科學也囊括其中。全書內(nèi)容豐富、資料翔實,通篇配有精美彩圖,可作為皮膚科、美容科醫(yī)生的實用教材和參考書。

    該書由科學出版社出版,第二次增印圖書已到貨。訂購者請與張老師聯(lián)系,電話:010-84008103,13681581612

    Determination of varicella zoster virus genotype in a hospital in Beijing region

    XIA Tian-bao,F(xiàn)ENG Kai,MI Xia,et al
    Department of Dermatology &Venereology,306th Hospital of PLA, Beijing 100101, China

    Objective To detect the genotype of varicella zoster virus(VZV) genotype in 306 hospital in Beijing region.Methods VZV ORF22, ORF38, ORF54 gene sequence were detected by sequencing method. Results The results of gene analysis showed that the genotypes of the clinical isolates of 8 strains of VZV in Beijing region were J. There was a case of A-G mutation in the 37990 site of ORF22 fragement. Conclusion The genotype of the clinical isolates of VZV in 306 hospital in Beijing region was J. There was a case of A-G mutation in the 37990 site of ORF22 fragement.

    Herpes zoster;Varicella zoster virus(VZV); Famciclovir; Postherpetic neuralgia;Genotype

    R752.12

    A

    1674-1293(2017)04-0197-04

    夏天保

    2016-11-20

    2017-05-14)

    10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170402

    100101北京,解放軍306醫(yī)院皮膚性病科(夏天保,米霞,劉建軍,劉軍連,陳娓,呂世超);解放軍306醫(yī)院病理科(馮凱)

    夏天保,醫(yī)學博士,副主任醫(yī)師,研究方向:帶狀皰疹及皮膚激光美容,E-mail: xtb78@163.com

    呂世超,E-mail: lvshichao@sina.com

    猜你喜歡
    北京地區(qū)水痘帶狀皰疹
    帶狀皰疹診治釋疑
    中老年保健(2022年7期)2022-09-20 01:05:06
    警惕帶狀皰疹潛伏惡性腫瘤
    水痘源流考
    北京地區(qū)居民鎘攝入量評估
    老年帶狀皰疹藥物治療的對比觀察
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:55
    “水痘”離您的孩子很近,您做好準備了嗎?
    水痘王國
    某部2011—2015年水痘發(fā)病分析
    1949—1966年北京地區(qū)貞操觀的變革——解放與進步
    一部治療帶狀皰疹的創(chuàng)新之作——讀《帶狀皰疹治療學》有感
    麻豆久久精品国产亚洲av | 国产野战对白在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 丝袜在线中文字幕| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 91字幕亚洲| 男女午夜视频在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 男人舔女人下体高潮全视频| 91成人精品电影| 亚洲国产精品999在线| 国产av在哪里看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99re在线观看精品视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产欧美日韩一区二区三| 丰满的人妻完整版| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 成人免费观看视频高清| 亚洲av电影在线进入| 午夜福利免费观看在线| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品久久久久久久毛片微露脸| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 日韩av在线大香蕉| 中国美女看黄片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| a在线观看视频网站| 十八禁人妻一区二区| 久久性视频一级片| 国产精品久久视频播放| 午夜免费激情av| 免费看十八禁软件| 中文欧美无线码| 波多野结衣一区麻豆| 黄片大片在线免费观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 高清毛片免费观看视频网站 | 亚洲欧美精品综合久久99| 校园春色视频在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩大尺度精品在线看网址 | 在线观看舔阴道视频| 女性被躁到高潮视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 老司机在亚洲福利影院| 国产视频一区二区在线看| 国产精品99久久99久久久不卡| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 老司机靠b影院| 波多野结衣高清无吗| 国产野战对白在线观看| 午夜a级毛片| 精品乱码久久久久久99久播| 深夜精品福利| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品一区二区三区四区久久 | 精品日产1卡2卡| 伦理电影免费视频| 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产精品综合久久久久久久免费 | 黄网站色视频无遮挡免费观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 国产91精品成人一区二区三区| 久久精品人人爽人人爽视色| 一级a爱片免费观看的视频| 免费看a级黄色片| 男女午夜视频在线观看| 99re在线观看精品视频| 国产不卡一卡二| 一区二区日韩欧美中文字幕| 1024香蕉在线观看| 深夜精品福利| 免费高清在线观看日韩| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产高清激情床上av| 亚洲激情在线av| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 黄片播放在线免费| 热re99久久国产66热| 日韩免费高清中文字幕av| a级毛片黄视频| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产精品免费视频内射| 老汉色∧v一级毛片| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 精品福利观看| 精品国产亚洲在线| 日韩国内少妇激情av| 精品福利观看| 在线观看www视频免费| 亚洲伊人色综图| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 99精品欧美一区二区三区四区| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久中文字幕一级| 免费人成视频x8x8入口观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 日本一区二区免费在线视频| 中出人妻视频一区二区| 久久影院123| 啦啦啦在线免费观看视频4| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久久久久免费高清国产稀缺| 男人舔女人的私密视频| 亚洲国产精品999在线| 宅男免费午夜| 99精国产麻豆久久婷婷| 夜夜爽天天搞| 视频区图区小说| 国产成人欧美在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲国产欧美网| 美女国产高潮福利片在线看| 国产99白浆流出| 91成人精品电影| 黄片小视频在线播放| 90打野战视频偷拍视频| cao死你这个sao货| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产视频一区二区在线看| av中文乱码字幕在线| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲av美国av| 亚洲性夜色夜夜综合| 在线观看日韩欧美| 成人影院久久| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产99白浆流出| 在线观看一区二区三区| 成年人免费黄色播放视频| 黑丝袜美女国产一区| 1024视频免费在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 韩国av一区二区三区四区| 三上悠亚av全集在线观看| avwww免费| 黑丝袜美女国产一区| 超色免费av| 亚洲成a人片在线一区二区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 女性被躁到高潮视频| www.自偷自拍.com| 亚洲久久久国产精品| 69av精品久久久久久| 日本一区二区免费在线视频| av天堂久久9| 国产精品久久久久成人av| 成人av一区二区三区在线看| 精品一品国产午夜福利视频| 黄色视频,在线免费观看| 男人操女人黄网站| aaaaa片日本免费| 午夜免费鲁丝| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 日韩成人在线观看一区二区三区| 日本黄色日本黄色录像| 精品福利永久在线观看| 不卡一级毛片| 美女午夜性视频免费| 成人免费观看视频高清| 久久九九热精品免费| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲一区二区三区不卡视频| 丝袜在线中文字幕| 丰满的人妻完整版| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品永久免费网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产成人欧美| 欧美黑人精品巨大| av在线天堂中文字幕 | 午夜日韩欧美国产| 精品国产亚洲在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 99香蕉大伊视频| 天堂影院成人在线观看| www日本在线高清视频| 新久久久久国产一级毛片| av有码第一页| 高清毛片免费观看视频网站 | 一区二区三区激情视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| av有码第一页| 午夜免费激情av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美日韩av久久| 一a级毛片在线观看| 满18在线观看网站| 亚洲免费av在线视频| 久久 成人 亚洲| 黄色 视频免费看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 电影成人av| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产不卡一卡二| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 三级毛片av免费| 亚洲色图综合在线观看| 一区二区三区激情视频| 精品乱码久久久久久99久播| 中国美女看黄片| 国产片内射在线| 女同久久另类99精品国产91| 午夜a级毛片| 欧美在线一区亚洲| 日韩欧美在线二视频| 色老头精品视频在线观看| 亚洲国产精品999在线| 黄色视频,在线免费观看| 最新在线观看一区二区三区| 咕卡用的链子| 免费看a级黄色片| av在线天堂中文字幕 | 国产伦一二天堂av在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲人成77777在线视频| 免费在线观看亚洲国产| netflix在线观看网站| 久久人人97超碰香蕉20202| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久国产成人免费| 9色porny在线观看| 黄色成人免费大全| 丰满的人妻完整版| 视频在线观看一区二区三区| 免费av中文字幕在线| 久久国产精品影院| 国产精品国产av在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 成人免费观看视频高清| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 波多野结衣av一区二区av| 欧美激情高清一区二区三区| 精品无人区乱码1区二区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产高清视频在线播放一区| 成年人免费黄色播放视频| 在线观看免费午夜福利视频| 在线国产一区二区在线| 18禁观看日本| 久久久国产精品麻豆| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久久久久久久中文| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久久精品欧美日韩精品| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产又爽黄色视频| 日本a在线网址| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 最好的美女福利视频网| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产中文字幕在线视频| 少妇 在线观看| 日韩欧美三级三区| 久久九九热精品免费| 免费观看精品视频网站| 日韩精品青青久久久久久| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 高清欧美精品videossex| 亚洲成人精品中文字幕电影 | av片东京热男人的天堂| 丝袜美足系列| 日本五十路高清| 亚洲av熟女| 91大片在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 嫩草影院精品99| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 9热在线视频观看99| 88av欧美| 在线观看日韩欧美| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲美女黄片视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产精品九九99| 午夜免费激情av| 欧美最黄视频在线播放免费 | 女性生殖器流出的白浆| e午夜精品久久久久久久| 亚洲国产精品合色在线| 国产在线观看jvid| 日韩人妻精品一区2区三区| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99热只有精品国产| 久久午夜亚洲精品久久| 国产成人免费无遮挡视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久伊人香网站| 欧美亚洲日本最大视频资源| 91成年电影在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 桃红色精品国产亚洲av| 麻豆一二三区av精品| 日本欧美视频一区| 久久久久九九精品影院| 高潮久久久久久久久久久不卡| 午夜免费成人在线视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品综合久久久久久久免费 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久九九热精品免费| 国产激情欧美一区二区| 韩国精品一区二区三区| 亚洲黑人精品在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲全国av大片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产在线精品亚洲第一网站| 涩涩av久久男人的天堂| 一级片免费观看大全| 黄色毛片三级朝国网站| 三上悠亚av全集在线观看| 国产免费现黄频在线看| 精品久久蜜臀av无| 午夜两性在线视频| videosex国产| 人妻久久中文字幕网| 老司机靠b影院| 国产伦人伦偷精品视频| 高清av免费在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 女性生殖器流出的白浆| 校园春色视频在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 黄色成人免费大全| 成年人免费黄色播放视频| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品免费视频内射| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久久国产一区二区| 激情视频va一区二区三区| 18禁美女被吸乳视频| 9色porny在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| av超薄肉色丝袜交足视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 又黄又爽又免费观看的视频| 日本欧美视频一区| 大型av网站在线播放| 性少妇av在线| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久久久久久午夜电影 | 国产主播在线观看一区二区| 在线观看免费午夜福利视频| 免费日韩欧美在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲成国产人片在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品av久久久久免费| 久久伊人香网站| 99国产极品粉嫩在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 美女福利国产在线| 日本 av在线| 99香蕉大伊视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 91精品三级在线观看| 成人亚洲精品av一区二区 | 成人黄色视频免费在线看| 成年版毛片免费区| 视频区欧美日本亚洲| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 亚洲精品久久午夜乱码| 99re在线观看精品视频| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久热爱精品视频在线9| 午夜福利在线免费观看网站| 高清在线国产一区| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美乱码精品一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 中文字幕色久视频| 麻豆久久精品国产亚洲av | 亚洲专区字幕在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 成人国语在线视频| 午夜视频精品福利| 国产精品 国内视频| 在线观看舔阴道视频| 91精品三级在线观看| 在线播放国产精品三级| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日韩高清综合在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 人妻久久中文字幕网| 18禁观看日本| 这个男人来自地球电影免费观看| 无限看片的www在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| √禁漫天堂资源中文www| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 在线观看午夜福利视频| 国产免费男女视频| 亚洲av电影在线进入| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲片人在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 中文字幕人妻丝袜制服| 人人澡人人妻人| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久国产精品影院| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产1区2区3区精品| 女性生殖器流出的白浆| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产不卡一卡二| 色婷婷av一区二区三区视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 9色porny在线观看| av视频免费观看在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久久久人人人人人| 一级作爱视频免费观看| 12—13女人毛片做爰片一| 69精品国产乱码久久久| 老司机靠b影院| 欧美日韩一级在线毛片| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 大型黄色视频在线免费观看| 久久久国产成人免费| 色哟哟哟哟哟哟| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产成人欧美| 亚洲人成电影免费在线| 999久久久国产精品视频| 国产成人av教育| 亚洲伊人色综图| 一进一出抽搐动态| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产精品成人在线| 亚洲精品国产区一区二| 久久久国产成人免费| 日韩免费av在线播放| 中文字幕人妻熟女乱码| 三上悠亚av全集在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 韩国精品一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲伊人色综图| 日本vs欧美在线观看视频| 涩涩av久久男人的天堂| 国产成人欧美在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产高清videossex| 午夜免费观看网址| 久久影院123| 亚洲激情在线av| 性欧美人与动物交配| 波多野结衣高清无吗| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 91成人精品电影| 中出人妻视频一区二区| 国产主播在线观看一区二区| 国产片内射在线| 88av欧美| 日韩大尺度精品在线看网址 | 久久人妻熟女aⅴ| www日本在线高清视频| 免费搜索国产男女视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久久久九九精品影院| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 精品国产国语对白av| 丝袜美腿诱惑在线| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 母亲3免费完整高清在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜精品国产一区二区电影| aaaaa片日本免费| 天天影视国产精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 1024香蕉在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费 | 久久久国产一区二区| 国产高清激情床上av| 久久人妻av系列| 在线天堂中文资源库| 精品国产国语对白av| 18禁美女被吸乳视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 黄片大片在线免费观看| 成人av一区二区三区在线看| 美女 人体艺术 gogo| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美中文综合在线视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久久久久大精品| 亚洲专区字幕在线| av网站免费在线观看视频| 亚洲欧美激情在线| 欧美日韩一级在线毛片| 国产深夜福利视频在线观看| 国产单亲对白刺激| 国产av一区二区精品久久| 国产高清国产精品国产三级| 长腿黑丝高跟| 在线国产一区二区在线| 91av网站免费观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 91精品国产国语对白视频| 久久久久久久午夜电影 | 亚洲,欧美精品.| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| avwww免费| 亚洲avbb在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 大码成人一级视频| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜免费成人在线视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 999精品在线视频| 久久九九热精品免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美不卡视频在线免费观看 | 欧美色视频一区免费| 欧美亚洲日本最大视频资源| 后天国语完整版免费观看| 亚洲三区欧美一区| 大香蕉久久成人网| 成人特级黄色片久久久久久久| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品一区二区精品视频观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 色老头精品视频在线观看| 在线看a的网站| 色老头精品视频在线观看| 国产成人精品无人区| 色老头精品视频在线观看| 亚洲精华国产精华精| 国产精品98久久久久久宅男小说| a级毛片在线看网站| 国产视频一区二区在线看| 在线观看免费日韩欧美大片| 激情视频va一区二区三区| 青草久久国产| 久久婷婷成人综合色麻豆| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 一区二区三区精品91| 999久久久精品免费观看国产| 青草久久国产| 丝袜在线中文字幕| 热99re8久久精品国产| 亚洲精品在线观看二区| 精品国产一区二区久久| 好男人电影高清在线观看| 午夜老司机福利片| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品国产av在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 啦啦啦 在线观看视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美激情久久久久久爽电影 | 这个男人来自地球电影免费观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频|