三波長分光光度法測茄子中總黃酮含量*

李玉紅，韓露露，王秋紅，馬榮榮

（咸陽師范學(xué)院 化學(xué)與化工學(xué)院,陜西 咸陽 712000）

分析測試

三波長分光光度法測茄子中總黃酮含量*

李玉紅，韓露露，王秋紅，馬榮榮

（咸陽師范學(xué)院 化學(xué)與化工學(xué)院,陜西 咸陽 712000）

采用以AlCl3為顯色的蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)三波長分光光度法測定茄子中的總黃酮含量，方法有效地消除了吸收峰不對稱及干擾組分對定量分析造成的影響。分別在波長為λ1=500nm,λ2=423nm,λ3=350nm處測吸光度時(shí),則ΔA與濃度C之間呈良好的線性關(guān)系線性，方程為ΔA=0.0002C(μg·mL-1)-0.0139，R2=0.9988，線性范圍為0～3380μg·mL-1。按標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析，測得總黃酮量紫茄子為48.3 mg·g-1及綠茄子為27.8mg·g-1，方法回收率為96.9%～102%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差3.66%～4.65%（n=6）。該方法操作簡單，易于操作，可為果蔬總黃酮含量的測定提供理論基礎(chǔ)。

茄子；黃酮；三波長分光光度法

茄科植物茄子（Solanum melongena L），又叫落蘇，富含蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)及其它蔬菜所無的維生素E和維生素P，維生素P黃酮化合物的一種且生物活性成分豐富，具有降脂，降壓、消腫止痛、清熱活血、清熱解毒、抗衰老、防治胃癌、保護(hù)心血管、等藥理活性。茄子的藥理活性與其含有的黃酮類化合物是密不可分在醫(yī)學(xué)界已得到證明，有不可多得的治病防病作用[1，2]，因此，從茄子中提取黃酮具有一定的開發(fā)價(jià)值。

黃酮含量的檢測采用分光光度法而此法存在缺陷，本文建立了氯化鋁對茄子中總黃酮物質(zhì)進(jìn)行充分顯色，采用已成功運(yùn)用鋁離子與黃酮類化合物形成的穩(wěn)定配合物測沙棘果汁中黃酮［3］的三波長分光光度法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

BS-224-S電子天平（上?？茖W(xué)儀器有限公司）；DZF-6020真空干燥箱（上海瑯玕實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HH-1恒溫水浴鍋（上海光地儀器設(shè)備有限公司）；KQ5200DE超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SPECORD 50型雙光束紫外可見分光光度計(jì)（德國DENA公司。）

準(zhǔn)確稱（純度≥98%）蘆丁0.3380g，用30%乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，搖勻即得蘆丁對照品溶液。準(zhǔn)確稱取1.3334g無水AlCl3固體，用蒸餾水定容到100mL，即得到1%AlCl3溶液。其它試劑均為分析純。

1.2 茄子樣品處理

茄子樣品洗凈切片，且60℃下烘干粉碎。準(zhǔn)確取茄子粉末10.0g，利用超聲波輔助索氏提取法提取[4]，加入95%乙醇溶液120mL，水浴溫度40℃，不斷用高沸點(diǎn)石油醚回流80min，放入超聲波儀中進(jìn)行提取，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，濃縮至5～10mL，粗制黃酮樣品離心1min，取清液于50mL容量瓶中用30%乙醇溶液定容至100mL。

1.3 定性試驗(yàn)[5]

取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?.5min，立即在紫外光下觀察，呈現(xiàn)明顯淡黃褐色熒光斑點(diǎn)；紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，可見光呈灰黃色，紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)；鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取樣品提取液1mL于試管中，加入鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。

1.4 定量試驗(yàn)

準(zhǔn)確移取不同體積的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液至10mL容量瓶中，用30%乙醇水溶液定容至刻度，加入一定量1%的AlCl3溶液充分顯色，參比是以30%乙醇水溶液，用1cm的比色皿在波長335～525nm范圍內(nèi)掃描，繪制其吸收曲線[3]。

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)三波長原理結(jié)合蘆丁吸收光譜實(shí)驗(yàn)選擇確定了波長分別為λ1＝500nm，λ2＝423nm，λ3＝350nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 光譜曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別預(yù)10mL的容量瓶中移取一系列不同體積蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入1%的AlCl3溶液，充分混合30%乙醇溶液定容至刻度，用1cm的比色皿在波長325～525nm范圍內(nèi)掃描，繪制其吸收曲線（圖1），以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)三波長原理結(jié)合蘆丁吸收光譜實(shí)驗(yàn)選擇確定了波長分別為λ1＝500nm，λ2＝423nm，λ3＝350nm。其相應(yīng)波長處吸光度為 A500、A423、A350，計(jì)算相應(yīng)波長處不同濃度的ΔA（表1），ΔA=A423-（73A500+77A350/150），繪制ΔA與蘆丁濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖 2）。所得線性方程為：ΔA=0.0002C（μg·mL-1）-0.0139，R2=0.9988，線性范圍為 0～3380μg·mL-1。

圖1 蘆丁吸收光譜曲線Fig.1 Absorption spectra of rutin

表1 蘆丁濃度與ΔΑ的關(guān)系Tab.1 Relationship between ΔΑ and rutin concentrations

圖2 蘆丁標(biāo)注曲線Fig.2 standard curve of Rutin

2.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

用移液管精密量取對照品溶液0.2mL置于10mL容量瓶中，用30%乙醇定容，每隔30min測一次吸光度即在 0、30、60、90、120min 測其吸光度。見表2。計(jì)算得出RSD為0.51%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明提取液在120min內(nèi)較穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)Tab.2 Results of stability test

2.3 回收率實(shí)驗(yàn)

量取不同體積蘆丁對照品溶液于10mL容量瓶中，用30%乙醇定容，采用三波長分光光度法計(jì)算吸光度ΔA，見表3。計(jì)算結(jié)果RSD為2.04%～4.23%說明儀器精密度良好。

表3 精密度實(shí)驗(yàn)Tab.3 Results of recovery test

2.4 樣品分析

采集不同品種的茄子,按上述實(shí)驗(yàn)方法提取樣品黃酮,按操作條件測定波長處吸光度且計(jì)算ΔA，分析結(jié)果見表4。

表4 茄子樣品測定結(jié)果Tab.4 Analytical results of different samples of eggplant

3 結(jié)論

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立的三波長分光光度方法測定茄子中的總黃酮含量的方法，結(jié)果滿意。有效地消除了吸收峰不對稱給定量分析造成的影響,并校正了基于干擾組分的吸收光譜具有線性吸收產(chǎn)生的基線傾斜。

［1］ 周寶利,張琦,陳志霞,等.不同品種茄子果皮花青素含量及其穩(wěn)定性研究［J］.食品科學(xué),2011,32（1）:99-103.

［2］ 周寶利，李興寶，李騰飛，等.茄子果實(shí)中黃酮提取工藝優(yōu)化及不同茄子品種黃酮含量比較［J］.食品科學(xué),2012,33（10）:103-106.

［3］ 回瑞華,侯冬巖,關(guān)崇新,等.三波長-光譜法測定沙棘果汁中黃酮的含量［J］.光譜學(xué)與光譜分析,2005,25（2）:266-269.

［4］ 馬國剛,王建中.響應(yīng)面分析法優(yōu)化槐米蘆丁超聲波提取工藝的研究［J］.分離與提取,2007,33（8）:167-170.

［5］ 吳立軍.天然藥物化學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003.177-179.

Determination of total flavonoids in eggplant by three wavelength spectrophotometry*

LI Yu-hong1，HAN Lu-lu，WANG Qiu-hong，MA Rong-rong
（School of Chemisitry and Chemical Engineering,Xianyang Normal College,Xianyang 712000，China）

A three-wavelength spectrophotometric method for the determination of total flavonoids in Eggplant was developed using rutin for standard material and AlCl3as chromogenic.the effects of the asymmetric absorption peak and interfering components on the analytical results can be eliminated.By selecting three wavelengths appropriately,in the wavelength λ1＝500nm,λ2＝423nm,λ3＝350nm when measured at an absorbance,the ΔA between the concentration c and a good linear relationship between the linear equation was ΔA＝0.0002C(μg·mL-1)-0.0139,R2＝0.9988,linear range is 0～3380μg·mL-1.The linear range was 0～3380μg·mL-1,The measured amount of total flavonoids purple eggplants was 48.3mg·g-1and green eggplants was 27.8mg·g-1,the recoveries was from 97%～102%and the relative standard deviation was 3.66%～4.65%（n＝6）.The method is simple and easy to operate,can provide a theoretical basis for the determination of total flavonoids in fruits and vegetables.

eggplant;flavonoids;three wavelength spectrophotometry

O657.31

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20170921

2017-04-24

陜西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2013JM2016）；陜西省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目（1721）；咸陽師范學(xué)院專項(xiàng)科研項(xiàng)目（15XS YK042）

李玉紅（1980-），女，漢，陜西咸陽人，主要從事分析方面研究。