參附注射液在家兔單肺通氣中的肺保護作用

薛劍鋒 陳東昊 陳春婷

（1.牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157011；2.黑龍江省牡丹江市腫瘤醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157000）

參附注射液在家兔單肺通氣中的肺保護作用

薛劍鋒1陳東昊1陳春婷2

（1.牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157011；2.黑龍江省牡丹江市腫瘤醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157000）

目的 觀察參附注射液對兔單肺通氣中的肺保護作用。方法 家兔36只，隨機分成雙肺通氣組（Z組）、單肺通氣組（D組）和單肺通氣用藥組（S組）各12只。測量肺通氣前、中、后肺組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量，單肺通氣后檢測兩組臟器組織超氧化物歧化酶（SOD）、肺含水率、肺組織濕/干質量比（W/D）、對組織切片進行肺損傷評分。結果 與Z組相比，D組、S組的TNF-α含量、W/D值升高（P＜0.05），肺組織中SOD值降低（P＜0.05）。與Z組相比，D組肺臟肺間質水腫，肺泡壁炎性細胞浸潤。S組組織切片肺泡壁擴大，沒有明顯的炎性細胞浸潤。結論 參附注射液在家兔單肺通氣中有降低肺組織損傷的作用。

參附注射液 家兔 單肺通氣 肺保護

臨床胸外科手術過程中，為給術者提供更好的手術野，單肺通氣技術的應用已經非常廣泛，隨著雙腔支氣管導管技術不斷改進，單肺通氣的安全性及成功率有顯著提高。但是，單肺通氣多數(shù)采取側臥位，使通氣/血流比例失調，非通氣側肺內產生分流，極易發(fā)生低氧血癥，據(jù)報道發(fā)生率為9%～27%［1］，易引起肺損傷等并發(fā)癥。據(jù)報道，隨著單肺通氣時間的延長，損傷的程度逐漸加重，且非通氣側比通氣側嚴重［2］。本研究通過探索參附注射液對家兔單肺通氣中肺組織的保護作用。以期為臨床治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 動物 已成年的健康雄性大白兔36只，體質量（2.0～2.5）kg，由牡丹江醫(yī)學院實驗動物中心提供。隨后將動物采用隨機數(shù)字表法隨機分成3組，雙肺通氣組（Z組）、單肺通氣組（D組）和單肺通氣用藥組（S組）各12只。

1.2 試劑與藥物 兔腫瘤壞死因子-α（TNF-α）測定試劑盒，超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒，參附注射液（999藥業(yè)有限公司）。

1.3 造模與給藥 制作雙腔支氣管導管.按照臨床使用的雙腔氣管導管原理進行制造，將一根內徑為1.6 cm的塑料管和一根外徑2.0 cm的塑料管緊密固定在一起，長約20 cm左右。管路連接的地方用膠進行密封，防止漏氣。最外層用隱形膠帶加以固定。雙腔管左側管腔比右側的管腔長出約0.9 cm左右，高溫定型成略向左側翹起，這樣進入左側支氣管的幾率大；離左側支氣管頭部約5.5 mm的地方用布條包繞，用隱形膠帶固定布條，制作成長約2.9 mm、橫徑約3.1 mm的膨大區(qū)域，防止機械通氣時漏氣。塑料導管均做成向右側開口的斜口，斜口的長徑2.4～2.6 mm。雙腔氣管導管與麻醉機接頭為T形管，采用水下吹氣的方法檢測各接頭處的氣密性，并檢測整個管道的內容積為 1．7 mL［2］。 36只大白兔行肌肉注射異丙酚2 mg/kg，用1.33%的利多卡因進行局部麻醉，游離出右側的股靜脈和股動脈。股靜脈用于輸液，0.9%氯化鈉注射液按 8 mL/（kg·h）的速度輸注以補充血容量，股動脈用于采血以及測量血壓，鈍性分離主支氣管，同時靜脈注射維庫溴銨1 mg/kg，進行氣管插管并行機械通氣，呼吸頻率40次/min，潮氣量8 mL/kg。持續(xù)泵注丙泊酚和瑞芬太尼來維持麻醉深度。術中維持心率血壓的平穩(wěn)。

1.4 指標檢測 1）TNF-α：TNF-α 含量于插管前、插管后1 h、插管后2 h分別經動脈取血1 mL，通過離心制取血漿，零下70℃以上留存，根據(jù)TNF-α放射免疫分析測定試劑盒描述方式測定TNF-α含量。2）肺組織中超氧化物歧化酶（SOD）含量：用已經制備好的家兔肺臟勻漿，根據(jù)試劑盒的相關要求和方法測定肺臟SOD的含量。3）肺組織含水率按照公式：肺組織含水率肺組織的濕質量與干質量的差，與肺組織濕質量的比值。分別取下左、右兩側肺葉，直接稱重，然后再稱經過處理的肺組織干質量，計算家兔肺組織濕／干質量比（W／D）。4）形態(tài)學觀察：研究實驗結束后，取小塊家兔肺臟組織，在光鏡下觀察肺組織形態(tài)血方面的變化。再取一塊家兔肺組織，浸泡于甲醛溶液中24～48 h，制作石蠟切片，應用HE染色后，用光學顯微鏡觀察家兔肺組織病理形態(tài)，根據(jù)鏡下形態(tài)進行評分。評分內容包括肺泡內充血情況、肺泡水腫、肺組織中性粒細胞浸潤及肺組織間質水腫等，依據(jù)觀察的嚴重程度評分（非常輕微、無病變計0分；輕度病變計1分；組織中度病變計2分；重度病變計3分；非常重度病變計4分），同時計算各項指標的總得分為肺損傷評分［3-4］。

1.5 統(tǒng)計學處理 應用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。包括資料錄入、數(shù)據(jù)整理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析處理，計量資料以（s）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組血漿TNF-α及SOD檢測結果 見表1。與單肺通氣前相比，3組在單肺通氣后TNF-α的值均逐漸增加，單肺通氣后2 h升高最明顯（P＜0.05）。與Z組相比，D組、S組的TNF-α含量在單肺通氣后1 h和2 h顯著增高（P＜0.05），但是在單肺通氣后 2 h，S組增高的幅度顯著低于D組（P＜0.05）。

表1 各組血漿中TNF-α變化及SOD值比較s）

表1 各組血漿中TNF-α變化及SOD值比較s）

組 別 單肺通氣前 單肺通氣后1 h 單肺通氣后2 h SOD值Z組D組73.47±3.12 84.62±5.79 90.72±8.02 8.82±0.12 73.72±3.59 161.29±6.96 471.00±23.15 4.01±0.11 S組73.91±3.82 151.80±8.14 343.86±10.34 6.97±0.16

2.2 各組肺組織損傷評分結果 見表2。Z組左右側肺損傷評分沒有睡眠差異，其余兩組左側評分比右側高，D組左側肺損傷評分最高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。肺組織W/D比值比較發(fā)現(xiàn)，Z組左右側比較沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05），D組，S組左右側比較，W/D值左側高于右側。各組間左側比較D組升高最多。

表2 各組肺部W/D比及損傷評分比較s）

表2 各組肺部W/D比及損傷評分比較s）

組 別 時 間 W/D比 損傷評分Z組 左肺 3.82±0.06 2.16±0.04右肺 3.83±0.07 2.16±0.06 D 組 左肺 5.05±0.22 7.43±0.14右肺 4.59±0.15 4.06±0.15 S組 左肺 4.86±0.14 5.32±0.14右肺 3.99±0.13 2.36±0.06

3 討 論

單肺通氣就是兩側肺單獨通氣，患側肺萎陷停止通氣，在胸科手術中得到廣泛應用，為手術提供良好視野，為手術提供了極大的便利。長時間的接受單側肺通氣可導致急性肺臟損傷，肺臟損傷的程度與單肺通氣的時間相關，并且非通氣側肺臟損傷的程度要比通氣側肺臟損傷的嚴重［2，5］。參附注射液系從古方《校注婦人良方·卷九》“參附湯”化裁而來。參附注射液以現(xiàn)代化的先進技術提取附子和人參中的有效成分，包括紅參皂苷、多根烏頭堿等生物活性成分，對于因多種疾病而致氣陰兩虛的患者有大補元氣、溫陽、回逆救脫、益氣攝血的功效［6］。

有研究報道［7-8］，參附注射液對于肺臟損傷有很好的保護作用。據(jù)艾宇航等［9］研究報道，根據(jù)他們對肺臟組織中NF-κB及血液早期細胞因子TNF-α的觀察，發(fā)現(xiàn)參附注射液能夠使肺損傷時活化的NF-κB含量明顯降低，且能有效的降低血液中TNF-α含量，證明參附注射液具有保護肺臟的作用。NF-κB信號轉導通路與細胞凋亡及炎癥反應有密切關系，參附注射液能夠增加心肌組織中NF-κB抑制蛋白IκB-α的水平，阻斷NF-κB調控的炎癥反應，減輕組織損傷［10］。

本研究中，3組血漿中TNF-α含量在研究中都有增加，S組與D組在單肺通氣1 h后TNF-α的含量增加很多，與Z組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。單肺通氣后 2 h，D組 TNF-α升高的幅度很大，S組TNF-α的升高幅度有所下降。根據(jù)作用和產生的時間不同，細胞因子可以分為兩類：促炎細胞因子或早期細胞因子，TNF-α、IL-1等?？寡准毎蜃踊蜻h期細胞因子，IL-10、IL-4等。TNF-α是促炎細胞因子，也可以叫早期細胞因子，它可以誘導抗炎細胞因子的產生，使促炎因子和抗炎因子同時升高，表明機體此時的損傷程度比較重。TNF-α在3組中都有所升高，并且在2 h后升高的最明顯，應用參附注射液的S組中，血漿TNF-α的升高程度明顯減輕，說明參附注射液在一定程度上抑制TNF-α的升高，抑制機體過度炎癥反應。這可能是由于參附注射液降低血漿中TNF-α，IL-1β水平，并下調TNF-α、IL-1β的mRNA表達，參附注射液通過抑制細胞因子產生，從而達到減輕炎癥反應對單肺通氣時肺臟的損傷，從而改善肺臟功能。

SOD是一種活性物質，它能夠清除新陳代謝的有害物質，清除氧自由基保護細胞免受損害。應用氧自由基清除劑可以減少多器官損傷的發(fā)生率，這可為減輕組織損傷提供方法［11-12］。測量SOD的含量能夠間接的反映出組織對抗炎抗氧化反應的狀態(tài)。與Z組相比，D組的SOD含量較低，說明D組SOD消耗較大，同其他兩組炎癥反應嚴重。根據(jù)文獻報道［13-14］，參附注射液能夠增強SOD的活性、并抑制內皮素合成與釋放、增加一氧化氮合成與釋放及其代謝產物的水平，調節(jié)一氧化氮和內皮素之間的平衡，從而改善內皮細胞功能，調節(jié)家兔心肌缺血/再灌注時自由基介導的內皮功能紊亂，減輕心肌細胞損傷。參附注射液可提高超氧化物歧化酶的活性，并減少細胞內游離鈣離子濃度，防止鈣超載，清除氧自由基，抑制脂質過氧化物產生，改善微循環(huán)，保護內皮細胞不受損傷［15-16］。本研究中，S組應用參附注射液，SOD活力增強，能夠有效的清除氧自由基，減少受損細胞的數(shù)目達到保護肺臟的目的。

參附注射液在家兔單肺通氣中，通過降低TNF-α在血液中的含量，增強SOD的活性，起到降低肺組織損傷的作用。

［1］Slinger P，Triolet W，Wilson J．Improving oxygenation during one-lungventilation［J］．Anesthesiology，1988，68（2）：291-295．

［2］游志堅，姚尚龍，梁華根.不同時間單肺通氣后兔兩側肺損傷程度比較［J］.中國急救醫(yī)學，2007，27（2）：133-135.

［3］Sinclair SE，Ktegenow DA，Lamm WJ，et al．Hyperoapnic acidosis is protective in an in vivo model of ventilator-induced lung injury［J］．Am J Respir Crit Care Med，2002，166（3）：403-408．

［4］張波，劉又寧．氣管內吹氣對機械通氣相關性急性肺損傷保護作用的實驗研究［J］．中國危重病急救醫(yī)學，2000，12（1）：42-l7．

［5］王利華，黃利群，呂紅博，等．參附注射液的藥理作用與臨床應用［J］．華北國防醫(yī)藥，2010，22（6）：535-536．

［6］許濟群．方劑學［M］．5 版．上海：上?？茖W技術出版社，1985：6．

［7］羅魂，萬蘭青．馬超英，等．參附注射液對兔內毒素休克肺損傷的保護作用［J］．中國危重病急救醫(yī)學，1995，7（2）：68．

［8］邵豐，鄭世營，趙軍，等．參附注射液對免離體肺缺血／再灌注保護作用的實驗研究［J］．中國急救醫(yī)學，2006，26（3）：195-197．

［9］艾宇航，彭鎏，張麗娜．參附注射液對內毒素所致肺損傷的保護作用［J］．中國急救醫(yī)學，2006，26（4）：285-286．

［10］薛建軍，呼薈茹，齊兵獻，等．參附注射液對心肌缺血再灌注老年大鼠NF-KB及IKB-α表達的影響［J］．西部中醫(yī)藥，2013，26（2）：18-21．

［11］Fan J，Kapus A，Li YH，et al.Priming for enhanced dveolar fibrin deposition after hemorrhagic shock：role of tumor netrosis factory［J］.Am J Respir Cell Mol Biol，2000，22（5）：412.

［12］Mota Filipe H，Mcbonald MC，Cuzzocrea S．A membrane-permeable radical scavenger reduces the organ injuly in hemorrhagic shock［J］．Shock，1999，12（3）：225．

［13］金旭鵬，郭敬姝．參附注射液對充血性心衰患者內皮功能的影響［J］．中國中醫(yī)急癥，2007，16（4）：424-425．

［14］崔巍，郭蓮怡．參附注射液對兔心肌缺血再灌注損傷中內皮功能的影響 （英文）［J］．中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2007，17（21）：2561-2564．

［15］劉欣，楊引，劉新．參附注射液預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷時心肌能量代謝的影響［J］．中國中醫(yī)急癥，2009，18（7）：1117-1118．

［16］Cao J，Zheng CD，Zheng GX，et al．Protective effect of Shenfu injection on myocardial mitochondfia injured by ischemiareperfusion in rabbits［J］．Chin Med J（Eng1），2005，118（6）：505-507．

R285.5

A

1004-745X（2017）09-1593-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.09.027

2017-05-03）