益氣活血組方對(duì)急性心梗模型大鼠SDF-1、CXCR4、VEGF變化的影響*

李偉欽

（四川省樂山市人民醫(yī)院，四川 樂山 614000）

益氣活血組方對(duì)急性心梗模型大鼠SDF-1、CXCR4、VEGF變化的影響*

李偉欽

（四川省樂山市人民醫(yī)院，四川 樂山 614000）

目的 觀察益氣活血組方對(duì)AMI大鼠缺血區(qū)心肌組織SDF-1、CXCR4、VEGF含量變化的影響。方法80只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、麝香保心丸組和益氣活血組方組，每組20只。根據(jù)處死時(shí)間再將各組分為3 d，7 d，14 d 3個(gè)時(shí)相組；藥物干預(yù)后通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)大鼠心肌組織SDF-1、CXCR4、VEGFmRNA 的表達(dá)；Western-blot法檢測(cè)大鼠心肌組織 SDF-1、CXCR4、VEGF 蛋白的表達(dá)。結(jié)果 麝香保心丸和益氣活血組方表達(dá)SDF-1/CXCR4 mRNA水平均與假手術(shù)組、對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），麝香保心丸與益氣活血方比較，其表達(dá)SDF-1/CXCR4 mRNA水平差別不大（P>0.05）。麝香保心丸組表達(dá)CXCR4 mRNA水平高于益氣活血組方組（P<0.05）。益氣活血組方組、麝香保心丸干預(yù)組較假手術(shù)組和模型組的CXCR4和SDF-1蛋白表達(dá)量明顯增高（P<0.05）。結(jié)論 益氣活血組方對(duì)急性心肌梗死模型大鼠有較好的治療作用，其作用機(jī)理可能是通過增加VEGF和CXCR4、SDF-1來發(fā)揮促進(jìn)毛細(xì)血管新生、EPCs動(dòng)員和趨化的作用。

急性心梗大鼠 益氣活血組方 血管新生 EPCs動(dòng)員

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。–HD），簡(jiǎn)稱冠心病，是由多種原因?qū)е鹿跔顒?dòng)脈老化，從而導(dǎo)致其狹窄，栓塞，進(jìn)而造成心肌缺血缺氧的一種心臟?。?］。近年來，醫(yī)學(xué)界提出的“治療性血管新生”概念［2］。血管新生是血管穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵特點(diǎn)，它是指通過促進(jìn)缺血心肌血管的生成，從而建立側(cè)支循環(huán)，進(jìn)而有效恢復(fù)缺血心肌血供。既往研究表明，益氣活血組方單藥及復(fù)方具有促進(jìn)局部血管新生，從而增加心臟側(cè)支循環(huán)，延緩心肌缺血的作用［3］。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）具有強(qiáng)烈的促進(jìn)毛細(xì)血管新生的作用，而與毛細(xì)血管新生的重要環(huán)節(jié)是EPCs的動(dòng)員、趨化，這個(gè)過程主要集中在SDF-1的活化及與其相關(guān)的上下游分子調(diào)節(jié)。本研究提出猜想，益氣活血組方促進(jìn)缺血性心肌損傷毛細(xì)血管新生機(jī)理可能與調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子（SDF-1）的活化及其相關(guān)的趨化因子受體4（CXCR4）、VEGF表達(dá)有較大關(guān)系。因此本研究采用AMI模型大鼠探討該方對(duì)SDF-1、CXCR4、VEGF變化的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)SD大鼠 25只，雄性，8～10周齡，體質(zhì)量（280±20）g，購自斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［動(dòng)物許可證號(hào) SYXK（湘）2013-0005］。

1.2 藥物與試劑 益氣活血組方灌胃液按60 kg成人每日所需服用的益氣活血組方劑量如下：黃芪50 g，當(dāng)歸10 g，川芎25 g，丹參25 g。均購于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，經(jīng)鑒定為道地藥材。麝香保心丸灌胃液按60 kg成人每日所需服用的麝香保心丸劑量為18 g，于正規(guī)藥店購買麝香保心丸（國藥準(zhǔn)字Z31020068；規(guī)格22.5 mg/丸，42丸/瓶；上海和黃藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）。DAB顯色試劑盒，購自博士德生物公司（武漢）；兔抗大鼠單克隆抗體VEGFR-2-FITC、兔抗大鼠單克隆抗體Sca-1–PE均購自SIGMA公司（美國）；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）試劑盒購自 Promega公司（美國）；BCA蛋白定量試劑盒購自博士德生物公司（武漢）；蛋白提取試劑盒購自凱基生物有限公司（南京）。

1.3 主要儀器與設(shè)備 Du-640核算蛋白分析儀購自貝克曼庫爾特公司（美國）；PCR基因擴(kuò)增儀購自Bio-Rad公司（美國）；酶標(biāo)儀購自賽默飛世爾公司（上海）；轉(zhuǎn)膜儀購自天能科技有限公司（上海）；圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0購自 Olympus公司 （日本）；Du-640核算蛋白分析儀購自貝克曼庫爾特公司（美國）。1.4 造模與分組 將80只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組（20只）、模型制備組（60只）兩組。模型制備組再次按照隨機(jī)數(shù)字表法將分為模型組、麝香保心丸組和益氣活血組方組，每組20只。造模方法：1）將小鼠以10%水合氯醛腹腔注射（40 mg/kg）麻醉，麻醉滿意后置于手術(shù)臺(tái)；2）四肢及頭部仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，四肢皮下連接心電圖電極，記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖，小鼠頸部及左腋下脫毛頸部和左前胸的皮膚備皮消毒；3）胸骨上窩上正中切開皮膚0.5 cm，向上鈍性分離推開下頜下腺，剪除氣管前肌肉，使氣管在沒有任何拉鉤牽引的情況下能充分顯露，徹底止血后于第2～3氣管環(huán)間行氣管橫行切開，注意不要切斷氣管軟骨環(huán)，切口長度不超過氣管周徑1/3，擦干其內(nèi)分泌物后插入氣管插管（用小兒吸痰管自制），深度為0.5～1 cm。連接空氣呼吸機(jī)進(jìn)行人工控制呼吸，（流量4～6 mL/100 g，呼吸頻率 80～90 min，呼吸預(yù)設(shè)比 1∶1）同時(shí)觀察胸廓起伏，呼吸支持建立成功的標(biāo)志是胸廓的起伏要與呼吸機(jī)工作頻率保持一致，且聲音順暢無阻塞感；4）在確定自主呼吸和呼吸機(jī)頻率一致后，進(jìn)行左前胸消毒鋪巾，順肋間隙方向于胸骨左旁第3～4肋間切開皮膚，長約1 cm，逐層分離皮下組織、肌肉，于2～3肋骨間撐開進(jìn)胸，向右上方推開胸腺，可暴露心臟及大血管根部，切開心包，輕擠大鼠胸廓，將心臟擠出，有部分動(dòng)物在左心耳下緣與肺動(dòng)脈圓錐間可以看見左冠脈前降支起始部，用6-0可吸收縫合線結(jié)扎血管縫針，進(jìn)針深度控制在0.1 cm，寬度為0.1～0.2 cm；觀察打結(jié)位置是否準(zhǔn)確，造模成功的評(píng)判標(biāo)志為肉眼可見打結(jié)處周圍及以下心肌變白，跳動(dòng)減弱，心電圖示ST段或T段抬高；5）徹底止血后逐層關(guān)胸。關(guān)胸過程中于切口內(nèi)放置排氣管（用小兒頭皮針的軟管自制），關(guān)胸畢，抽空胸腔積氣后撥除?；謴?fù)大鼠自主呼吸，撥出氣管內(nèi)插管，清除氣管內(nèi)分泌物，氣管切口不作縫合。頸部使用4-0號(hào)手術(shù)線縫合；6）手術(shù)過程中分別在開胸后、縫針后、結(jié)扎后和關(guān)胸后4個(gè)點(diǎn)記錄心電圖變化；7）考慮使用水合氯醛麻醉后容易導(dǎo)致大鼠體溫降低，采用37℃恒溫塾保暖，并采取俯臥位幫助大鼠排痰，并輕柔按壓其胸部，幫助脫離呼吸機(jī)的大鼠恢復(fù)自主呼吸，腹腔注射青霉素（8萬 U/只，連續(xù) 3 d）抗感染；8）假手術(shù)組大鼠除在相應(yīng)位置穿線不接扎外，控制其于其他組在手術(shù)流程和時(shí)間上保持相同。

1.5 給藥方法 于術(shù)后24 h灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14 d。假手術(shù)組、模型組予等體積蒸餾水灌胃，麝香保心丸組予麝香保心丸 （濃度按照60 kg體質(zhì)量的成人每日劑量為18 g換算成大鼠的劑量并溶于等體積蒸餾水），益氣活血組方組（濃度按照60 kg體質(zhì)量的成人每日劑量為原方粉碎化后100 g，換算成大鼠的劑量并溶于等體積蒸餾水灌胃）。末次給藥后禁食24 h，不禁水，予頸髓離斷法處死后，立即開胸，留心臟標(biāo)本。因術(shù)后大鼠死亡及取材時(shí)標(biāo)本篩選，最后每組取6個(gè)心臟標(biāo)本用于指標(biāo)檢測(cè)。

1.6 檢測(cè)指標(biāo) 1）RT-PCR對(duì)大鼠心肌組織SDF-1、CXCR4、VEGF、mRNA 表達(dá)的測(cè)定 （1）心肌細(xì)胞組織液的制備收集各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心臟組織，使用生理鹽水清洗3遍，洗去紅細(xì)胞和各種組織液。然后在吸水紙上吸干水分，稱質(zhì)量并記錄。將新鮮心臟組織放于研缽中，傾倒入液氮，在液氮作用下，心臟組織快速結(jié)冰，然后用力碾磨，將心臟組織制備成組織液。研磨過程中一定要及時(shí)添加液氮，邊研磨邊添加，在液氮沒有揮發(fā)盡時(shí)就應(yīng)該添加。將研缽放在大小合適的泡沫盒里面研磨，這樣可以保溫，減小液氮揮發(fā)的速度。研磨成粉末后，在液氮揮發(fā)盡后，應(yīng)立即加入裂解溶液（裂解溶液含有抗氧化劑，防止DNA被氧化降解。使用的抗氧化劑有PVP，b-巰基乙醇）。裂解液加入后，會(huì)凍成冰塊，可以繼續(xù)研磨，直至融化成液態(tài)。（2）核酸提取采用RT-PCR法檢測(cè)造模后不同時(shí)點(diǎn)大鼠缺血心肌組織SDF-1、CXCR4、VEGF表達(dá)情況。應(yīng)用TRIZOL試劑盒提取總RNA，以紫外分光光度計(jì)A280、A260定量測(cè)定濃度；將總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定，可見明顯的28S、18 S兩條區(qū)帶，證明其完整性。利用NCBI數(shù)據(jù)庫分別查詢大鼠SDF-1、CXCR4、VEGF和作為內(nèi)參基因的三磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）序列，通過Primer Premier 5.0引物設(shè)計(jì)軟件引物序列，如表1。將標(biāo)本mRNA逆轉(zhuǎn)為cDNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。用SYBR法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR。 采用 2-ΔΔCt法，以 2-ΔΔCt值反映目的基因表達(dá)水平，其數(shù)值越大，表達(dá)越強(qiáng)。2）Western Blotting 檢測(cè)大鼠心肌 SDF-1、CXCR4、VEGF蛋白表達(dá)水平：剪取約0.5 mg組織置于勻漿器中，加入1 mL總蛋白提取液（RIPA裂解液、蛋白酶抑制劑）勻漿，低溫下超聲細(xì)胞破碎儀裂解3次，每次3 s，將勻漿液吸出放到1.5 mL離心管中，9000 r/min離心10 min后取上清液。 將樣品體積：5×loading buffer體積=5∶1，拌勻，于100℃條件下加熱3 min，使蛋白質(zhì)變性。BCA法定量20 μg蛋白，經(jīng)10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，通過電轉(zhuǎn)儀將蛋白轉(zhuǎn)移至NC膜。電轉(zhuǎn)結(jié)束后，將電轉(zhuǎn)膜置于37℃下5%的脫脂奶粉（PBS配制）中封閉2 h。封閉的膜用PBST漂洗2～3次，切下膜條（3～5 mm寬左右）按順序置于加樣槽中，分別加入一抗約1 mL（按照體積比為1∶1000稀釋），室溫下于搖床孵育2 h。棄去一抗，每個(gè)加樣槽加2～3 mL PBST，搖床洗滌5～10 min，加入二抗1 mL 4℃過夜。每條膜加入適量的發(fā)光底物試劑，以浸潤膜條為宜，盡快行化學(xué)發(fā)光，得到膠片。陽性條帶以Gel pro4.0版凝膠光密度分析軟件進(jìn)行分析，測(cè)其IOD累積光密度參考值。

表1 引物序列表

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示。組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的均數(shù)比較采用單因素方差（ANOVA）分析，其中3組以上兩兩比較在方差齊性時(shí)采用SNK檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用Dunnett-T3檢驗(yàn)。同一時(shí)間點(diǎn)的組間的均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果 見表2。1）益氣活血組方對(duì)VEGF mRNA的影響：麝香保心丸和益氣活血組方表達(dá)VEGF mRNA水平均與假手術(shù)組、對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.01），麝香保心丸和益氣活血組方表VEGF mRNA水平差別不大（P>0.05），結(jié)果說明，益氣活血組方的功效與麝香保心丸功效相似，但較優(yōu)于麝香保心丸。2）益氣活血組方對(duì)SDF-1/CXCR4 mRNA的影響：麝香保心丸和益氣活血組方表達(dá)SDF-1/CXCR4 mRNA水平均與假手術(shù)組、對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），麝香保心丸與益氣活血方比較，其表達(dá)SDF-1/CXCR4 mRNA水平無明顯差異（P>0.05）。麝香保心丸組表達(dá)CXCR4 mRNA水平高于益氣活血組方組（P<0.05）。

表2 各組VEGF mRNA及SDF-1/CXCR4 mRNA的表達(dá)水平

表2 各組VEGF mRNA及SDF-1/CXCR4 mRNA的表達(dá)水平

與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組較，△P＜0.05。下同。

組 別 n CXCR4 VEGF SDF-1假手術(shù)組 15 0.002±0.001模型組 15 0.004±0.002麝香保心丸組 15 0.009±0.002*△1.28±0.34 0.007±0.002 0.98±0.23 0.012±0.001 3.10±0.43*△ 0.033±0.003*△益氣活血方組 15 0.007±0.001*△5.45±0.42*△ 0.028±0.004*△

2.2 Western Blot結(jié)果 見圖1，表3。1）益氣活血組方對(duì)VEGF蛋白表達(dá)的影響：麝香保心丸和益氣活血組方均能增加心梗邊緣區(qū)VEGF蛋白表達(dá)，且與假手術(shù)組，模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；麝香保心丸和益氣活血組方表VEGF蛋白表達(dá)水平差別不大（P>0.05）。2）益氣活血組方對(duì)SDF-1/CXCR4蛋白表達(dá)的影響：益氣活血組方組、麝香保心丸干預(yù)組的SDF-1/CXCR4蛋白表達(dá)量明顯升高，麝香保心丸和益氣活血組方表達(dá)SDF-1/CXCR4蛋白水平均與假手術(shù)組、對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；麝香保心丸組表達(dá)CXCR4蛋白水平高于益氣活血方組（P>0.05）。

圖1 分子蛋白免疫印跡法（WB）檢測(cè)各組對(duì)VEGF以及SDF-1/CXCR4蛋白表達(dá)

表3 各組對(duì)VEGF及SDF-1/CXCR4 mRNA蛋白表達(dá)情況

表3 各組對(duì)VEGF及SDF-1/CXCR4 mRNA蛋白表達(dá)情況

組 別 n CXCR4 VEGF SDF-1假手術(shù)組 15 0.03±0.001模型組 15 0.04±0.002麝香保心丸組 15 0.05±0.002*△1.28±0.34 0.04±0.002 0.98±0.23 0.05±0.001 3.10±0.43*△ 0.06±0.003*△益氣活血方組 15 0.04±0.004*△5.45±0.42*△ 0.05±0.002*△

3 討 論

3.1 內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員 EPCs是成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，屬于干細(xì)胞群體。出生后EPCs主要存在于骨髓中，在正常的生理狀態(tài)下，外周循環(huán)中EPCs數(shù)目很少。當(dāng)機(jī)體遭受某種應(yīng)激刺激后，骨髓中EPCs釋放出來，向外周循環(huán)中遷移，增加外周血中EPCs的數(shù)量，這一過程成為EPCs的動(dòng)員。

3.2 SDF-1/CXCR4對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的調(diào)控作用 現(xiàn)已證實(shí)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子 （SDF）-1及趨化因子受體4（CXCR4）在EPCs的動(dòng)員行為中起到了關(guān)鍵的作用，SDF-1是趨化因子蛋白家族中的一種小分子細(xì)胞因子，又被稱為趨化因子12（CXCL12），是目前已知的最強(qiáng)大的趨化因子，對(duì)CD34+/CXCR4+細(xì)胞具有強(qiáng)大的趨化作用。CXCR4是SDF-1的高度特異性受體，SDF-1和CXCR4配對(duì)結(jié)合后，產(chǎn)生二級(jí)信使，發(fā)揮細(xì)胞遷徙、黏附、增殖、凋亡等多種功能，而且誘導(dǎo)細(xì)胞管樣結(jié)構(gòu)的形成［4］。大量研究證明SDF-1在損傷部位表達(dá)的增加是組織對(duì)損傷產(chǎn)生反應(yīng)的體現(xiàn)，SDF-1/CXCR4在ECPs向損傷部位的遷移過程中發(fā)揮重要作用［5］。

3.3 VEGF與SDF-1/CXCR4 同時(shí)，VEGF也是血管發(fā)生及發(fā)育過程中重要的細(xì)胞因子，VEGF通過作用EPCs表面的兩種受體VEGFR1和VEGFR2來誘導(dǎo)EPCs的增殖、調(diào)節(jié)黏附分子的表達(dá)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)EPCs的動(dòng)員，促使其增殖、分裂、移行、誘導(dǎo)新生血管的形成，同時(shí)它還可以組織新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，上調(diào)EPCs的CXCR4的表達(dá)，增加ECPs對(duì)SDF-1的反應(yīng)，這種正反饋?zhàn)饔眠M(jìn)一步加速了新生血管的形成。在血管新生過程中，不僅可以出現(xiàn)SDF-1的高表達(dá)，VEGF的表達(dá)也明顯升高，但SDF-1增高的比例明顯高于VEGF；同時(shí)，SDF-1能夠誘導(dǎo)ECPs和血管內(nèi)皮細(xì)VEGF的表達(dá)，因此猜想SDF-1是VEGF的上游信號(hào)分子，而VEGF也同樣能夠誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中SDF-1的表達(dá)［6］，SDF-1與 VEGF共同促進(jìn) EPCs的動(dòng)員，從而促進(jìn)缺血區(qū)血管的新生。

3.4 中醫(yī)“祛瘀生新”理論與缺血區(qū)心肌血管生成的聯(lián)系 有研究表明［7］，丹參、丹參黃芪藥對(duì)等藥物可以達(dá)到促進(jìn)血管生成的目的，因此推測(cè)其機(jī)制可能便是通過促進(jìn)SDF-1、CXCR4蛋白及mRNA表達(dá)水平，從而增加SDF-1、CXCR4的含量，最終得以促進(jìn)新生血管的生成。胡國恒教授認(rèn)為，這種促血管新生的概念可能會(huì)對(duì)闡明“祛瘀生新”中所謂“新”的微觀物質(zhì)基礎(chǔ)意義重大。因此，推測(cè)益氣活血組方改善心肌缺血、防治冠心病的機(jī)制之一有可能便是促血管新生。筆者前期實(shí)驗(yàn)研究也表明，本方延緩冠心病病情加重可能與其改善或者逆轉(zhuǎn)心肌缺血，通過上調(diào)Ang-1的表達(dá)、抑制Ang-2的表達(dá)，促進(jìn)局部血管新生，從而增加心臟側(cè)支循環(huán)，達(dá)到延緩心肌缺血的目的有關(guān)［8］。同時(shí)，益氣活血組方既往研究也表明，該方能使大鼠心肌梗面積明顯減少，同時(shí)能夠促進(jìn)缺血心肌血管新生，而促進(jìn)HGF的表達(dá)可能與其機(jī)制有關(guān)［9］。同時(shí)，在研究過程中也有多項(xiàng)證據(jù)表明益氣活血組方具有促進(jìn)VEGF表達(dá)，加強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂，從而促進(jìn)血管新生的作用?；赩EGF具有強(qiáng)烈的促進(jìn)毛細(xì)血管新生的作用，而與毛細(xì)血管新生的重要環(huán)節(jié)是EPCs的動(dòng)員、趨化，這個(gè)過程主要集中在SDF-1的活化及與其相關(guān)的上下游分子調(diào)節(jié)。因此本研究提出猜想，益氣活血組方促進(jìn)缺血性心肌損傷毛細(xì)血管新生機(jī)理可能與調(diào)節(jié)SDF-1的活化及其相關(guān)的CXCR4、VEGF表達(dá)有較大關(guān)系，所以設(shè)計(jì)本課題的相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目以驗(yàn)證上述現(xiàn)象。通過這一系列研究可以深入揭示中醫(yī)藥通過促進(jìn)EPCs動(dòng)員，從而促進(jìn)血管新生、側(cè)支循環(huán)重建，發(fā)揮治療缺血性心肌梗死的作用［10-12］。3.5 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.5.1 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 現(xiàn)益氣活血組方組、麝香保心丸干預(yù)組較假手術(shù)組和模型組的CXCR4和SDF-1 mRNA表達(dá)量明顯增高。

3.5.2 應(yīng)用Western Blot方法 灌胃1周后Western blot條帶經(jīng)過ECL化學(xué)發(fā)光技術(shù)顯影后，進(jìn)行灰度分析。發(fā)現(xiàn)益氣活血組方組、麝香保心丸干預(yù)組的VEGF和CXCR4蛋白表達(dá)量明顯升高，而假手術(shù)組和模型組的CXCR4和SDF-1蛋白表達(dá)量沒有明顯變化。提示VEGF和CXCR4、SDF-1蛋白的表達(dá)與心肌細(xì)胞的再生具有相關(guān)性。

綜合上述結(jié)果，筆者推測(cè)麝香保心丸與益氣活血組方均能增加VEGF和CXCR4、SDF-1蛋白和基因的表達(dá)。通過測(cè)定VEGF和CXCR4、SDF-1基因和蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)麝香保心丸與益氣活血組方均能上調(diào)VEGF和CXCR4、SDF-1蛋白和基因的表達(dá)水平。那么筆者推測(cè)益氣活血組方對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的可能作用機(jī)制可能與上調(diào)SDF-1/CXCR4、VEGF因子的表達(dá)有關(guān)。VEGF和CXCR4、SDF-1可以作為研究益氣活血組方動(dòng)員EPCs促進(jìn)缺血區(qū)心肌血管新生的靶點(diǎn)［13-15］。

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Effect of Yiqi Huoxue Decoction on the Change of SDF-1，CXCR4 and VEGF in Model Rats with Acute Myocardial Infarction

LI Weiqin. Leshan Hospital of Traditional Chinese Medicine of Sichuan Province，

Sichuan，Leshan 614000，China.

Objective： To explore the effect of Yiqi Huoxue Decoction on the change of SDF-1，CXCR4 and VEGF of myocardial tissue in ischemic zone of AMI rats.Methods：80 SD rats were divided into the sham operation group，the model group，Shexiang Baoxin Decoction group and Yiqi Huoxue Decoction group by random number table，20 rats in each group.According to the execution time，each group was divided into three phase group： 3 d，7 d and 14 d.After the intervention of the drugs，mRNA expression of SDF-1，CXCR4 and VEGF in myocardial tissue of the rat was detected by polymerase chain reaction （PCR）.The protein expression of SDF-1，CXCR4，VEGF in myocardial tissue of the rat was detected by Western-blot.Results： Compared with the sham operation group and the control group，mRNA levels of SDF-1/CXCR4 expression in Shexiang Baoxin Decoction group and Yiqi Huoxue Decoction group were statistically significant（P<0.05），but there was little difference between Shexiang Baoxin Decoction group and Yiqi Huoxue Decoction group （P>0.05）.mRNA level of CXCR4 expression in Shexiang Baoxin Decoction group was higher than that of Yiqi Huoxue Decoction group （P<0.05）.The protein expression of CXCR4 and SDF-1 in Shexiang Baoxin Decoction group and Yiqi Huoxue Decoction group was obviously higher than that of the sham operation group and the model group （P<0.05）.Conclusion：Yiqi Huoxue Decoction has a good therapeutic effect on rat model of acute myocardial infarction and its mechanism may be related to the increase of VEGF，CXCR4 and SDF-1 to play a role in promoting capillary regeneration，EPCs mobilization and chemotaxis.

Rats with acute myocardial infarction；Yiqi Huoxue Decoction；Angiogenesis；EPCs mobilization

R285.5

A

1004-745X（2017）09-1541-05

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.09.011

2016-05-14）

四川省衛(wèi)計(jì)委課題（17PJ560）