鹿茸口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

張鶴婷，葛月

摘 要：目的：建立了鹿茸口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究方法。方法：TLC法定性鑒別鹿茸，HPLC法測(cè)定10-羥基-2-癸烯酸含量，凱氏定氮法測(cè)定樣品中氨基酸含量（以含氮量計(jì)）。結(jié)果：TLC法斑點(diǎn)清晰，分離度好。10-羥基-2-癸烯酸在15.41μg·mL-1～308.20μg·mL-1濃度范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，R=0.99996；平均回收率為99.15%，RSD（%）=0.46%。氨基酸含量測(cè)定方法重復(fù)性、回收率良好。結(jié)論：該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法準(zhǔn)確可靠，可用于鹿茸口服液的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：鹿茸口服液；鹿茸；10-羥基-2-癸烯酸；氮；TLC；HPLC

鹿茸口服液功能是溫腎，生精養(yǎng)血，補(bǔ)髓健骨。臨床用于畏寒無力，血虛眩暈，腰膝痿軟。主要成分為鹿茸、蜂蜜，輔料成分為枸櫞酸鈉和香精。其中鹿茸和蜂蜜均含有豐富的氨基酸（以含氮量計(jì)），是藥效的主要成分。蜂蜜中含有10-羥基二癸烯酸成分，具有抗菌、強(qiáng)壯機(jī)體、增強(qiáng)免疫力的作用，為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，建立了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了準(zhǔn)確、科學(xué)的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)考察。

1 儀器、試藥和材料

Thermo高效液相色譜儀；凱氏定氮蒸餾裝置；10-羥基-2-癸烯酸（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110812-200506，含量：97.6%），氯化銨標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，純度：98.7%）；甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀、磷酸、硫酸銅、硫酸鉀、硼酸、氫氧化鈉、三氯醋酸、硫酸均為分析純；鹿茸口服液（市售樣品，規(guī)格：10ml/支）。硅膠G板（100mm×200mm，青島海洋化工廠）。

2 方法

2.1 TLC定性鑒別

鹿茸。取鹿茸對(duì)照藥材0.4g，加70%乙醇5ml，超聲處理15分鐘，濾過，取濾液對(duì)照藥材溶液。取本品10ml，置水浴上揮醇，再加水10ml溶解，加20ml正丁醇萃取，振搖，離心10min（3000r/min），取正丁醇層，揮干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇一冰醋酸一水（3：l：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。

2.2 HPLC法定量測(cè)定

（1）10-羥基-2-癸烯酸。

2.2.1色譜條件：Diamond C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05mol/L磷酸二鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（75：25）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；流速：1.0ml/min；柱溫：35℃。進(jìn)樣量：20μl。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備：取10-羥基-2-癸烯酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1ml約含10-羥基-2-癸烯酸0.15mg）

2.2.3 供試品溶液的制備：精密量取本品10ml，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理15分鐘，用甲醇定容至刻度，搖勻，離心5min（3000r/min），取上清液1ml，至10ml量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察：精密稱取對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml約含1.5mg 10-羥基-2-癸烯酸的儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成一系列濃度的對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣20μl，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸?；貧w方程為Y=5.1437X-13.452（r=0.99996），10-羥基-2-癸烯酸在15.41μg·mL-1～308.20μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批次樣品，按供試品溶液制備方法，平行處理6份樣品，精密吸取20μl注入液相色譜儀，測(cè)得6份樣品各自含量，結(jié)果重復(fù)性試驗(yàn)含量RSD為0.74%，該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 回收率試驗(yàn)：精密量取已知含量的本品5ml，共9份，分別加入已知量80%、100%、120%水平的對(duì)照品溶液各3份，按供試品溶液的制備方法，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，10-羥基-2-癸烯酸各濃度下的回收率均在98～102%之間，RSD小于2.0%，該方法準(zhǔn)確可靠。

2.3 氮定量分析

2.3.1 供試品溶液制備：精密量取本品20ml，置500mL定氮瓶中，加硫酸鉀8g、硫酸銅0.3g和硫酸20ml，將瓶以45°角斜置，開始用較低溫度緩緩加熱，使溶液溫度保持在沸點(diǎn)以下，等泡沸停止后，逐步加大電力，待消化溶液沸騰，待溶液呈澄明的綠色后，繼續(xù)加熱30min，冷卻后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻備用。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。

2.3.2 蒸餾：取20g/L硼酸溶液10ml，置100ml錐形瓶中，加混合指示液（0.1%甲基紅乙醇溶液2份，加0.2%溴甲酚綠乙醇溶液3份，混勻）3滴，將冷凝管尖端插入液面下，精密量取供試品溶液10ml，再加入400g/L氫氧化鈉溶液10ml，用少量水洗漏斗數(shù)次，夾緊螺旋夾，進(jìn)行水蒸汽蒸餾，從硼酸溶液開始由酒紅色變?yōu)樗{(lán)綠色時(shí)起，蒸餾10分鐘后，將冷凝管尖端提出液面，使蒸汽繼續(xù)沖洗1分鐘，用少量水沖洗尖端后，停止蒸餾。

2.3.3 滴定計(jì)算：將吸收液用餾出液用0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由藍(lán)綠色變?yōu)榛易仙珵榻K點(diǎn)。每1ml鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于0.1401mg的N。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批次樣品，平行測(cè)定6次，計(jì)算含量，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.22%，該方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 回收率試驗(yàn)：精密量取已知含量的本品10ml，共9份，分別置500mL定氮瓶中，精密加入氯化銨純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（約相當(dāng)于上述已有含氮量的80%、100%、120%水平各3份），按供試品溶液的制備、蒸餾、滴定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

結(jié)果表明，氮定量測(cè)定方法下各濃度的平均回收率均在98～102%之間，回收率RSD為0.91%，該方法準(zhǔn)確，符合規(guī)定。

3 討論

3.1 TLC鑒別：由于萃取過程中，不易分層，所以必須采取離心的方法，離心后分層效果明顯。供試品點(diǎn)樣量超過5μl，已飽和有水印，確定點(diǎn)樣量為5μl。展開劑中正丁醇粘度比較大，展開速度慢。

3.2 氮定量分析：樣品放入定氮瓶?jī)?nèi)時(shí)，不要粘附頸上，萬一沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結(jié)果偏低。如硫酸缺少，過多的硫酸鉀會(huì)引起氨的損失，會(huì)形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。以硼酸為氨的吸收液，可省去標(biāo)定堿液的操作，且硼酸的體積要求并不嚴(yán)格，可免去用移液管，操作比較簡(jiǎn)便。

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