芹菜素抗乳腺癌多藥耐藥MCF-7/ADR細胞作用的研究

趙亞新，劉潔凡，江明華，錢海鑫

1. 蘇州大學附屬第一醫(yī)院普外科，江蘇 蘇州，215006；2. 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院全科醫(yī)學腫瘤科，浙江 溫州，325000；3. 溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院檢驗科，浙江 溫州，325000；4.溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院普外科，浙江 溫州，32500

芹菜素抗乳腺癌多藥耐藥MCF-7/ADR細胞作用的研究

趙亞新1,4，劉潔凡2，江明華3，錢海鑫1

1. 蘇州大學附屬第一醫(yī)院普外科，江蘇 蘇州，215006；2. 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院全科醫(yī)學腫瘤科，浙江 溫州，325000；3. 溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院檢驗科，浙江 溫州，325000；4.溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院普外科，浙江 溫州，32500

背景與目的：腫瘤多藥耐藥細胞是腫瘤化療失敗的主要原因，也是惡性腫瘤復發(fā)、轉移等的重要因素。目前發(fā)現(xiàn)芹菜素對多種惡性腫瘤細胞具有抗腫瘤作用，但對腫瘤多藥耐藥細胞的作用研究較少。該研究擬了解芹菜素對乳腺癌多藥耐藥MCF-7/ADR細胞的作用，初步探討芹菜素逆轉腫瘤多藥耐藥性的作用。方法：選取人乳腺癌多藥耐藥MCF-7/ADR細胞為主要研究對象，以芹菜素作用為實驗組，以ADR作用為對照組，用MTT法檢測細胞生長增殖情況，PI染色法檢測細胞周期分布情況，Annexin V/PI法檢測細胞凋亡狀態(tài)情況，MTT法進行體外藥物敏感性分析，Rhodamine-123儲留檢測細胞內藥物蓄積和外排情況，采用蛋白［質］印跡法(Western blot)檢測細胞內P-gp蛋白的表達情況，采用反轉錄聚合酶鏈式反應(reverse transcription-PCR，RT-PCR)檢測多藥耐藥MDR1基因的轉錄情況。結果：與對照組相比，芹菜素明顯抑制了MCF-7/ADR細胞增殖，阻滯了MCF-7/ADR細胞周期的進展，明顯誘導了MCF-7/ADR細胞凋亡的增加；芹菜素作用下ADR對MCF-7/ADR細胞的IC50為(12.37±0.18)μg/mL，明顯低于單用ADR對MCF-7/ADR的IC50(39.83±0.29)μg/mL (P<0.05)，其逆轉倍數(shù)為3.22；芹菜素增加了MCF-7/ADR細胞內Rhodamine-123的蓄積；與親本細胞MCF-7相比，MCF-7/ADR細胞內的MDR1基因為高轉錄水平、P-gp蛋白為高表達狀態(tài)；芹菜素作用下MCF-7/ADR細胞內的MDR1基因轉錄水平和P-gp蛋白的表達水平均下降。結論：芹菜素具有明顯的抗MCF-7/ADR細胞作用，同時具有逆轉MCF-7/ADR細胞腫瘤多藥耐藥性功能，其機制可能與降低MDR1基因轉錄和下調P-gp蛋白介導的藥物外轉運功能有關。

芹菜素；乳腺癌多藥耐藥；細胞凋亡；逆轉

腫瘤多藥耐藥細胞的存在是導致腫瘤化療失敗的主要原因，也是惡性腫瘤復發(fā)、轉移等的重要因素。對腫瘤多藥耐藥的研究是目前腫瘤領域研究的熱門。芹菜素(apigenin，AP)是一種天然的黃酮類化合物，以植物黃色素的形式廣泛存在于茶葉、蔬菜、水果和香料中。目前研究發(fā)現(xiàn)芹菜素對多種惡性腫瘤細胞具有抗腫瘤作用，但對腫瘤多藥耐藥細胞的作用研究較少。本研究通過研究芹菜素對乳腺癌多藥耐藥細胞株(MCF-7/ADR)的作用，初步探討芹菜素抗腫瘤多藥耐藥細胞的作用。

1 材料和方法

1.1 主要材料

人乳腺癌MCF-7/ADR、MCF-7細胞購自中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所細胞庫；芹菜素(貨號與規(guī)格：42251-10MG，CAS號，520-36-5)購自美國Sigma公司，純度大于99%，用DMSO配制，于-20 ℃條件下保存；碘化丙啶(propidium iodide，PI)、噻唑藍[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT]、AnnexinⅤ-FITC/PI凋亡檢測試劑盒、鼠抗人P-gp單抗、鼠抗人GAPDH單抗、鼠HRP標記羊抗鼠二抗、即用反轉錄聚合酶鏈式反應(reverse transcription-PCR，RT-PCR)擴增試劑盒(Taq)、 Taq DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)等均購自美國Sigma公司；多藥耐藥基因(multidrug resistance gene，MDR)家族的MDR1基因，其上游引物：5’-CTGTTATTCGTTGTCTGCACCACGA-3’，下游引物：5’-AGGGTGTCAAATTTATCT GCACTT-3；GAPDH上游引物：5’-ACCACAC TTCCATCTCCATCAC-3’，下游引物：5’-ACCACACTTCCATCTCCATCAC-3’，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；多柔比星(adriamycin，ADR)購自中國山東齊魯制藥有限公司。

1.2 細胞培養(yǎng)

乳腺癌MCF-7細胞于RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，MCF-7/ADR細胞株在加入1.0 μmo1/L ADR的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)以維持其耐藥性。實驗前兩周將其置于無ADR的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。兩者均于37 ℃，CO2體積分數(shù)為5%培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用0.25%胰蛋白酶消化，2～3 d傳代1次。實驗時取各對數(shù)生長周期的細胞按需接種。試驗中不同濃度的芹菜素是指10、20、 40和80 μmol/L。

1.3 細胞增殖

采用MTT比色法檢測細胞增殖情況。取對數(shù)生長周期的MCF-7/ADR細胞，制成單細胞懸液，每孔100 μL接種于96孔板，每組設3個復孔。實驗組：不同濃度芹菜素組；對照組：ADR組。繼續(xù)培養(yǎng)；分別于第1、2、3、4、5和6 d，加入MTT溶液20 μL(5g/L)，選495 nm波長，以不加細胞只加培養(yǎng)液為空白對照凋零，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測各孔吸光度(D)值。以吸收值為縱坐標，時間為橫坐標繪制細胞生長曲線。

1.4 細胞周期檢測

采用PI單染色法檢測細胞周期。同前進行MCF-7/ADR細胞接種，給予不同濃度的芹菜素處理后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，制成單細胞懸液離心洗滌后加入400 μL PI(50 μg/mL)、10 μL RnaseA(20 μg/mL)，用300目尼龍膜過濾樣品，選488 nm波長在流式細胞儀上測定，進行細胞周期的分析。

1.5 細胞凋亡實驗

采用AnnexinⅤ/PI雙染色法檢測細胞凋亡情況。同前進行細胞接種，給予不同濃度的芹菜素處理，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后制成單細胞懸液，離心洗滌后加入5 μL AnnexinⅤ-FITC和10 μL PI混勻，用流式細胞儀進行檢測，并以儀器所配軟件進行數(shù)據(jù)處理，計算細胞凋亡率。細胞凋亡率=凋亡細胞數(shù)/(凋亡細胞數(shù)+正常細胞數(shù)) ×100%。

1.6 體外藥物敏感性

采用MTT比色法觀測體外藥物敏感性。根據(jù)前期實驗結果，選濃度為10 μmol/L的芹菜素和作用時間為24 h用于體外藥物敏感性，以免芹菜素自身毒性過大，干擾增敏實驗。同前進行細胞接種，實驗組加芹菜素(10 μmol/L)+不同濃度的ADR，對照組給予加不同濃度的ADR，培養(yǎng)24 h后于酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上，檢測波長570 nm的每孔光密度值(D570nm)；抑制率(%)=(1-D實驗孔/D對照孔)×100%，由線性回歸分析，計算ADR半數(shù)抑制濃度IC50。逆轉指數(shù)為ADR的IC50值與芹菜素作用下ADR的IC50值的比值。

1.7 藥物轉運功能

采用Rhodamine123儲留實驗檢測藥物轉運功能。同前進行細胞接種，加入不同濃度芹菜素，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，將濃度為5 μg/mL的Rhodamine123液上流式細胞儀，同時設定不含Rhodamine123的細胞作為對照，檢測熒光強度，激發(fā)波長為488 nm，發(fā)射波長為530 nm。以平均熒光強度值表示細胞內Rhodamine123的濃度，計算藥物蓄積濃度。

1.8 P-gp蛋白表達情況檢測

采用蛋白［質］印跡法(Western blot)技術檢測P-gp蛋白的表達情況。同前進行細胞接種，給予不同濃度的芹菜素，收集細胞蛋白樣本，SDS-PAGE，轉膜，封閉，加一抗、二抗，以GAPDH為參照，采用ECL化學發(fā)光試劑盒進行化學發(fā)光法顯影，以每條蛋白電泳帶的灰度值表示P-gp蛋白的表達量。同時用Western blot技術測定親本細胞MCF-7的P-gp蛋白表達作對照組。

1.9 多藥耐藥基因MDR1 mRNA的表達

采用RT-PCR檢測多藥耐藥基因MDR1的mRNA的表達。同前進行細胞接種，給予不同濃度的芹菜素，收集細胞加入l mL TRIzol裂解細胞，取RNA樣本，應用反轉錄反應系統(tǒng)。設置反應參數(shù)：預變性94 ℃，5 min；94 ℃變性、退火、延伸，30 s；55 ℃，60 s；72 ℃，70 s，共35個循環(huán)；末次延伸：72 ℃，7 min。進行PCR擴增，取PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上電泳，溴化乙錠染色。將凝膠電泳圖像輸入凝膠分析系統(tǒng)，以GAPDH作為內參照，應用Image Analysis Software進行表達強度分析，按下公式計算相對表達量。相對表達量=細胞PCR產(chǎn)物表達強度/GAPDH表達強度。同時用RT-PCR技術測定親本細胞MCF-7的MDR1 mRNA的表達作對照組。

1.10 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計學處理。計量資料采用表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析；計數(shù)資料以絕對值表示，采用χ2檢驗進行分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 芹菜素對MCF-7/ADR細胞生長的影響

結果顯示，芹菜素對MCF-7/ADR細胞增殖有抑制作用，濃度為20、40和80 μmol/L的3組與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；芹菜素濃度組別兩兩相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，圖1)。

圖 1 芹菜素對乳腺癌MCF-7/ADR細胞增殖的影響Fig. 1 E ff ects of apigenin on proliferation of MCF-7/ADR cells

2.2 芹菜素對MCF-7/ADR細胞周期的影響

芹菜素對MCF-7/ADR細胞周期的影響見表1。在芹菜素的作用下，MCF-7/ADR細胞周期分布出現(xiàn)變化，主要表現(xiàn)在G1期細胞減少，S期細胞增加。與對照組相比，除芹菜素濃度為10 μmol/L的組別外，其他各濃度組與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。濃度組別間相比，各芹菜素濃度組別兩兩相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.3 芹菜素對MCF-7/ADR細胞凋亡的影響

在芹菜素的作用下，MCF-7/ADR細胞的凋亡率出現(xiàn)變化，主要表現(xiàn)為凋亡率有不同程度的增加。除芹菜素濃度為10 μmol/L的組別外，其他各濃度組與對照組相比有差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；濃度組別間相比，各芹菜素濃度組別間兩兩相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，表1，圖2)。

表 1 芹菜素對乳腺癌MCF-7/ADR細胞周期及凋亡的影響Tab. 1 E ff ects of apigenin on cell cycle and apoptosis of MCF-7/ADR cells

圖 2 芹菜素對乳腺癌MCF-7/ADR細胞凋亡的影響Fig. 2 E ff ects of apigenin on cell apoptosis of MCF-7/ADR cells

2.4 芹菜素作用下MCF-7/ADR細胞對化療藥物敏感性的變化

研究結果顯示，隨著ADR濃度的升高，對MCF-7/ADR細胞抑制率隨之上升。對比單用ADR組和ADR聯(lián)合芹菜素組發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合應用組的ADR對MCF-7/ADR細胞的抑制率要高，兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。單藥ADR對MCF-7/ADR的IC50為(39.83±0.29)μg/mL，在芹菜素聯(lián)合作用下，ADR對MCF-7/ADR的IC50下降為(12.37±0.58)μg/mL(P<0.01)，芹菜素對ADR在乳腺癌多藥耐藥細胞MCF-7/ADR上的逆轉倍數(shù)為3.22(表2)。

2.5 芹菜素作用下MCF-7/ADR細胞對藥物轉運功能的變化情況

在芹菜素的作用下，Rhodamine123在MCF-7/ADR細胞內的潴留率出現(xiàn)增加，外排減少。芹菜素組與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；芹菜素濃度組別兩兩相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，圖3、4)。

2.6 芹菜素對MCF-7/ADR細胞P-gp蛋白表達的影響

研究結果顯示，P-gp蛋白在親本細胞MCF-7內為低表達，在耐藥細胞MCF-7/ADR內為高表達。同時發(fā)現(xiàn)在芹菜素作用下，MCF-7/ADR細胞內P-gp蛋白的表達減少?；叶葤呙瓒糠治鲲@示，10、20、40和80 μmol/L等各組MCF-7/ADR內P-gp蛋白的表達為對照組的83.61%、72.7%、53.49%和49.26%，提示隨著芹菜素濃度增加，MCF-7/ADR內P-gp蛋白的表達水平逐漸下調，部分組間比較差異有統(tǒng)計學意義(圖5、6，P<0.05)。

表 2 不同濃度ADR對MCF-7/ADR的抑制率Tab. 2 Inhibition rate of ADR by di ff erent concentrations for MCF-7/ADR(%)

圖 3 芹菜素對MCF-7/ADR細胞內Rhodamine123熒光強度的影響Fig. 3 E ff ect of apigenin on Rhodamine123 fl uorescence intensity in MCF-7/ADR cells

圖 4 芹菜素對MCF-7/ADR細胞內Rhodamine123蓄積的影響Fig. 4 E ff ect of apigenin on Rhodamine123 accumulation in MCF-7/ADR cells

圖 5 芹菜素對MCF-7/ADR細胞內P-gp蛋白表達的影響Fig. 5 E ff ect of apigenin on the expression of P-gp protein in MCF-7/ADR cells

圖 6 芹菜素對MCF-7/ADR細胞內P-gp蛋白表達的影響Fig. 6 E ff ect of apigenin on the expression of P-gp protein in MCF-7/ADR cells

2.7 芹菜素對MCF-7/ADR細胞的MDR1基因轉錄的影響

MDR1基因轉錄在親本細胞MCF-7內為低水平轉錄，在耐藥細胞MCF-7/ADR內為高水平轉錄。同時發(fā)現(xiàn)在芹菜素作用下，MCF-7/ADR細胞內MDR1基因轉錄水平出現(xiàn)變化，表現(xiàn)為隨著芹菜素濃度的增加，MCF-7/ADR細胞內MDR1基因的mRNA表達逐漸下調(圖7)。

圖 7 芹菜素對MCF-7/ADR細胞MDR1基因轉錄的影響Fig. 7 E ff ects of apigenin on the transcription ofMDR1 gene in MCF-7/ADR cells

3 討 論

腫瘤多藥耐藥細胞是惡性腫瘤組織中一類特殊的腫瘤細胞，可從腫瘤干細胞分化產(chǎn)生，也可由一般腫瘤細胞轉化產(chǎn)生；可原本存在，也可通過化療藥物或其他因素誘導產(chǎn)生。由于腫瘤多藥耐藥細胞具有腫瘤多藥耐藥性，即對所有的抗腫瘤藥物(化療藥物)均產(chǎn)生耐藥，因此腫瘤多藥耐藥細胞是腫瘤多藥耐藥的主要根源。在臨床治療中，腫瘤多藥耐藥細胞的存在嚴重影響化療效果和患者預后，逆轉腫瘤多藥耐藥可明顯提高臨床治療惡性腫瘤的預后。

自1981年首次發(fā)現(xiàn)鈣通道拮抗劑維拉帕米對腫瘤多藥耐藥有逆轉作用起［1］，逆轉腫瘤多藥耐藥的逆轉劑研究一直沒有停止。理想的逆轉劑應具有多個特性：作用靶點廣泛，抗腫瘤活性同時又兼有明顯的逆轉腫瘤多藥耐藥特性，中毒劑量與逆轉劑量差距明顯，來源廣泛。但目前發(fā)現(xiàn)這些逆轉劑的逆轉作用靶點單一、逆轉效果不明顯、逆轉劑量與中毒劑量接近等原因無法應用于臨床。芹菜素又名芹黃素，分子式C15H10O6，相對分子質量為270。芹菜素結構式中的5、7、4位置3個羥基和C2C3雙鍵決定其獨特的藥理學效應和生物學特性。研究發(fā)現(xiàn)芹菜素在抗炎［2］、抗氧化［3］、心腦血管系統(tǒng)疾?。?-5］以及抗腫瘤方面［6-10］均有廣泛的研究。其中抗腫瘤作用的研究是目前研究的熱點，在人體大部分腫瘤，如乳腺癌［6］、胃癌［7］、肺癌［8］、前列腺癌［9］、卵巢癌［10］等的研究中均發(fā)現(xiàn)芹菜素具有抑制腫瘤細胞增殖作用。但是，芹菜素抗腫瘤多藥耐藥細胞作用的相關研究報道較少，其逆轉腫瘤多藥耐藥領域的研究更少。該研究選用人乳腺癌ADR多藥耐藥MCF-7/ADR細胞，初步探討芹菜素抗腫瘤多藥耐藥細胞的作用，探索芹菜素逆轉腫瘤多藥耐藥的可能性。從芹菜素抗MCF-7/ADR細胞增殖等相關實驗中發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，芹菜素可明顯抑制MCF-7/ADR細胞的生長增殖，可明顯阻滯MCF-7/ADR細胞從S期進入G2/M期，也具有誘導MCF-7/ADR細胞凋亡的作用，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，芹菜素濃度在20 μmol/L以上各組與ADR對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。另外實驗還發(fā)現(xiàn)，芹菜素對MCF-7/ADR細胞的上述作用與芹菜素的濃度有一定的相關性。通過不同芹菜素濃度組間對比發(fā)現(xiàn)，上述作用效應隨著芹菜素的濃度的增加而增強。上述結果得出，芹菜素具有抗MCF-7/ADR細胞的作用，這拓廣了我們對芹菜素抗腫瘤作用領域的研究，也為后續(xù)研究芹菜素對其他腫瘤多藥耐藥細胞的作用奠定了基礎。體外MCF-7/ADR細胞藥物敏感性實驗發(fā)現(xiàn)，在低濃度芹菜素(10 μmol/L)的作用下，MCF-7/ADR細胞對ADR的敏感性明顯提高，其逆轉倍數(shù)達3.22，提示芹菜素同時還具有一定的逆轉腫瘤多藥耐藥的功能。Rhodamine123外排主要由細胞膜上P-gp蛋白介導。P-gp蛋白由Juliano和Ling等于1976年發(fā)現(xiàn)，其編碼基因位于人染色體7q21，也稱為MDR基因。由MDR1基因編碼產(chǎn)生的P-gp是一個ATP依賴性藥物外排泵，能利用ATP水解釋放的能量，主動地將疏水親脂性藥物轉運至細胞外，導致細胞內藥物濃度低于殺傷濃度，從而產(chǎn)生耐藥［11］。由P-gp介導的藥物外排機制稱為經(jīng)典的MDR機制，抑制MDR1轉錄及編碼產(chǎn)物P-gp的表達，可以達到逆轉多藥耐藥作用。本研究中Rhodamine123蓄積實驗發(fā)現(xiàn)，在芹菜素作用下Rhodamine123在MCF-7/ADR細胞內潴留率增加，外排率減少，且芹菜素的作用濃度越高，其MCF-7/ADR細胞內Rhodamine123潴留率越高。因此推測芹菜素可能是通過細胞膜上P-gp蛋白的作用，提高了ADR對MCF-7/ADR細胞敏感性而產(chǎn)生逆轉多藥耐藥性作用。為進一步證實，應用Western blot實驗檢測芹菜素作用下的MCF-7/ADR細胞內P-gp蛋白表達情況和應用RT-PCR技術檢測芹菜素作用下的MCF-7/ADR細胞內MDR1基因的轉錄情況。實驗結果發(fā)現(xiàn)，原先MCF-7/ADR細胞內高表達的P-gp蛋白和高水平轉錄的MDR1基因，在芹菜素的作用下兩者均出現(xiàn)了下調，且P-gp蛋白的表達和MDR1基因的轉錄水平下調強度與芹菜素的作用濃度有關，具體的信號調控機制仍待后續(xù)的進一步研究。綜上所述，芹菜素具有明顯的抗MCF-7/ ADR細胞作用，同時具有逆轉MCF-7/ADR細胞腫瘤多藥耐藥性功能，其機制可能與降低MDR1基因轉錄和下調P-gp蛋白介導的藥物外轉運功能有關。

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E ff ect of apigenin on the multidrug resistant breast cancer cell line MCF-7/ADR

ZHAO Yaxin1,4, LIU Jiefan2, JIANG Minghua3, QIAN Haixin1
(1. Department of General Surgery, the First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215006, Jiangsu Province, China; 2. Department of General Medicine, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, Zhejiang Province, China; 3. Department of Clinical Laboratory, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, Zhejiang Province, China; 4. Department of General Surgery, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, Zhejiang Province, China)

Background and purpose:Multidrug resistance of tumor cells is the main factor for the failure of chemotherapy. It is found that the apigenin has the anti-tumor e ff ect, but its role in multidrug resistant cells was rarely reported. This study aimed to investigate the e ff ect of apigenin on multidrug resistant breast cancer cell line MCF-7/ ADR, and to explore the role of apigenin in reversing multidrug resistance.Methods:The MCF-7/ADR cells were cultured with di ff erent concentrations of apigenin, and the same cells were cultured with ADR in the control group. Thecell proliferation was detected by MTT, the cell cycle distribution was detected by PI, and the cell apoptosis was detected by Annexin V/PI. The drug sensitivityin vitrowas detected by the method of MTT, and the drug retention rate was detected by rhodamine 123 accumulation. The expression of P-gp protein was measured by Western blot, the RT-PCR method was used to detect the transcription of multidrug resistance geneMDR1.Results:The MCF-7/ADR cell proliferation was inhibited by the apigenin, the cell cycle progression was blocked by the apigenin, and the cell apoptosis was induced by the apigenin. There were signi fi cant di ff erences between the apigenin group and the ADR group (P<0.05). The IC50of ADR on MCF-7/ADR cell was (12.37±0.18) μg/mL with the apigenin e ff ect, while the IC50of ADR on MCF-7/ADR cell was (39.83±0.29) μg/mL without the apigenin effect (P＜0.05). The reversal index was 3.22. The retention rate of rhodamine 123 in MCF-7/ADR cells in the apigenin group was higher than that in the ADR group. TheMDR1 gene transcription level in MCF-7/ADR cells was higher than that in the MCF-7 cells, and the P-gp expression in MCF-7/ADR cells was higher than that in the MCF-7 cells. However, the level ofMDR1 gene transcription and P-gp expression were down-regulated by the apigenin in the MCF-7/ADR cells.Conclusion:The apigenin had anti-MCF-7/ ADR e ff ect, and played the role of reversing multidrug resistance in the MCF-7/ADR cells. The mechanism may be related to down-regulation of theMDR1gene transcription and the P-gp mediated drug efflux function.

Apigenin; Breast cancer; Multiple drug resistance; Apoptosis; Reverse

QIAN Haixin E-mail： Qianhaixin1@hotmail.com

10.19401/j.cnki.1007-3639.2017.08.008

R737.9

A

1007-3639(2017)08-0648-07

2017-02-20

2017-06-25）

溫州市科技局項目(Y20100257；Y20160403)；浙江省中醫(yī)藥管理局項目(2009YB024)。

錢海鑫 E-mail: qianhaixin1@hotmail.com