HPLC法測定六味頸康膠囊中川續(xù)斷皂苷VI的含量

范桂強(qiáng)，張李莉，蔣曉蕊，魏建良，郝江濤

(1.河北省衡水市食品藥品檢驗檢測中心，河北 衡水 053000；2.河北省深州市醫(yī)院，河北 衡水 053800)

·中藥工業(yè)·

HPLC法測定六味頸康膠囊中川續(xù)斷皂苷VI的含量

范桂強(qiáng)1*，張李莉1，蔣曉蕊1，魏建良2，郝江濤2

(1.河北省衡水市食品藥品檢驗檢測中心，河北 衡水 053000；2.河北省深州市醫(yī)院，河北 衡水 053800)

目的：建立高效液相色譜法測定六味頸康膠囊中川續(xù)斷皂苷VI含量的方法。方法：色譜柱為ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.1%鹽酸水溶液(68∶32)；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測波長206 nm；進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果：川續(xù)斷皂苷VI線性范圍為0.0941～0.941 mg·mL-1(r=0.999 7)，平均加樣回收率為97.79%，RSD為0.75%(n=6)。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高，結(jié)果可靠，重復(fù)性好，可有效控制六味頸康膠囊的產(chǎn)品質(zhì)量。

六味頸康膠囊；含量測定；高效液相色譜法；川續(xù)斷皂苷VI

六味頸康膠囊為河北省深州市醫(yī)院制劑(冀藥制字Z20051536)，由續(xù)斷、白芍、甘草、醋乳香、醋沒藥和粉葛六味中藥制成。該藥具有活血、通絡(luò)、止痛之功能，適用于氣血瘀滯，經(jīng)絡(luò)痹阻引起的頭疼頭暈、頸項強(qiáng)直、脊背酸痛、四肢麻木的治療。處方中續(xù)斷為君藥，其主要成分包括三萜及其苷類、環(huán)烯醚萜苷、生物堿、揮發(fā)油等化合物[1-2]，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、續(xù)折傷、止崩漏的功能[3]。本文以其三萜類皂苷中川續(xù)斷皂苷VI進(jìn)行定量研究，作為六味頸康膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀、DAD檢測器；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；XS205 DU電子分析天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]。

1.2 試藥

對照品川續(xù)斷皂苷VI(中國食品藥品檢定研究院，批號：111685-201506，含量：90.2%)；甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純。

續(xù)斷(產(chǎn)地：四川涼州)、白芍、甘草、醋乳香、醋沒藥和粉葛藥材(河北省深州市醫(yī)院提供)，由河北省藥品檢驗研究院專家鑒定為正品。六味頸康膠囊由河北省深州市醫(yī)院制劑室提供(規(guī)格：0.4 g，批號分別為：141226、150713、151102)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

ZORBAX SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；檢測器：二極管陣列檢測器；以甲醇-0.1%鹽酸水溶液(68∶32)為流動相；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為206 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

2.2.1 對照儲備液的制備 精密稱取川續(xù)斷皂苷VI對照品適量，置25 mL容量瓶中，用甲醇10 mL超聲5 min，使溶解，并用流動相稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為1.882 mg·mL-1的儲備液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密量取2.2.1項下對照品儲備液3 mL，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20粒，精密稱定，研細(xì)，稱取約4粒量，精密加入70%甲醇25 mL，加熱回流30 min，濾液蒸干，加水30 mL溶解，用乙醚振搖提取3次，每次25 mL，棄去乙醚液，用水飽和的正丁醇提取振搖3次，每次25 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次25 mL，正丁醇液蒸干，用流動相定容至10 mL，搖勻，濾過。

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方配制不含續(xù)斷的陰性空白制劑，按照2.3項下方法處理，制成陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

分別精密吸取2.2.2、2.3、2.4項下溶液，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

注：a.對照品溶液;b.樣品溶液;c.陰性對照溶液;1.川續(xù)斷皂苷VI。圖1 液相色譜圖

川續(xù)斷皂苷VI的保留時間為7.69 min，與相鄰雜質(zhì)峰分離度均大于1.5，拖尾因子為0.97，峰形良好。陰性對照色譜圖在主成分色譜峰位置處無干擾，理論塔板數(shù)按川續(xù)斷皂苷VI計，不低于4800。

2.6 檢測限及定量限

將川續(xù)斷皂苷VI對照品色譜峰測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，分別以信噪比為3∶1及10∶1時注入液相色譜儀的量確定檢測限與定量限，檢測限為0.63 ng，定量限為2.10 ng。

2.7 線性關(guān)系考察

精密量取2.2.1項下對照品儲備液各0.5、1、2、3、5 mL，分別置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。各吸取20 μL分別注入液相色譜儀，測定。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，對照品濃度(X，mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸計算，得回歸方程：Y=5845.84X+19.96，r=0.999 7。結(jié)果表明，川續(xù)斷皂苷VI在0.094 1～0.941 0 mg·mL-1所測對照品的濃度與HPLC色譜峰面積存在良好的線性關(guān)系。

2.8 精密度試驗

精密吸取2.2.2項下對照品溶液20 μL，按照2.1項下色譜條件連續(xù)測定6次，以峰面積計算，川續(xù)斷皂苷VI的RSD為0.86%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.9 重復(fù)性試驗

精密稱取批號為151102的六味頸康膠囊細(xì)粉約4粒，共6份，按2.3項下的方法制備供試品溶液，測定其含量。川續(xù)斷皂苷VI平均含量為1.686 mg/粒，RSD為0.98%(n=6)，表明重復(fù)性良好。

2.10 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，在0、2、4、6、8、12 h，按照2.1項下色譜條件分別進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。結(jié)果得川續(xù)斷皂苷VI峰面積的RSD為0.73%。表明供試液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.11 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品(批號：151102，平均裝量0.404 8 g)細(xì)粉適量(約為2粒)，加入對照品儲備液(1.882 mg·mL-1)2 mL，按2.3制備供試品溶液，按2.1色譜條件進(jìn)樣20 μL，計算各組分平均回收率。見表1。

表1 加樣回收試驗(n=6)

結(jié)果表明，平均回收率均介于95%～105%，符合要求。

2.12 樣品含量測定

取1.2項下3個批次的六味頸康膠囊，按2.3項下供試品的制備方法，按2.1項下色譜條件測定，用外標(biāo)法計算川續(xù)斷皂苷VI的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(含量mg/粒，n=3)

3 討論

3.1 定量分析目標(biāo)的確定

六味頸康膠囊是河北省深州市醫(yī)院經(jīng)過多年臨床經(jīng)驗積累研制的醫(yī)院制劑，續(xù)斷為君藥，具活血化瘀、消腫止痛之功能，近年對續(xù)斷化學(xué)成分研究[4]日益加深，現(xiàn)選取其主要成分川續(xù)斷皂苷IV作為控制制劑質(zhì)量的首選目標(biāo)，根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015版規(guī)定[3]，川續(xù)斷藥材按干燥品計算，含川續(xù)斷皂苷IV不得少于2.0%，依據(jù)六味頸康膠囊處方，建議含量標(biāo)準(zhǔn)定為不得低于1.26 mg/粒。

3.2 溶劑與提取方法的確定

比較了甲醇超聲30 min[5]、乙腈超聲30 min、50%乙醇水浴回流1 h等，發(fā)現(xiàn)本文采用的提取方法可有效去除雜質(zhì)，基線平直，同時也能獲得較大提取量，較其他方法提高10%以上。

3.3 檢測波長的確定

利用DAD檢測器，發(fā)現(xiàn)川續(xù)斷皂苷VI在靠近200 nm處有較大吸收，由于190～200 nm處于紫外吸收末端，基線不穩(wěn)，因而選擇206 nm作為檢測波長。

3.4 流動相的選擇

實驗過程中，采用甲醇-水、乙腈-0.05%磷酸水溶液、乙腈-水[5-6]等作為流動相進(jìn)行洗脫，峰形對稱性較差，采用甲醇-0.1%鹽酸水溶液(68∶32)，與相鄰雜質(zhì)分離良好，色譜峰峰形對稱，操作簡便。

[1] 吳帥，劉二偉，張祎，等.川續(xù)斷中化學(xué)成分的研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，29(3)：147-150.

[2] 韋英杰，賈曉斌，樊宏偉，等.續(xù)斷的色譜指紋及LC-ESI-MS分析[J].中國中藥雜志，2011，36(2)：169-174.

[3] 國家藥典委員會.中國人民共和國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[4] 王云華，劉繼華，陳凡波，等.川續(xù)斷中三萜皂苷類成分的研究概況[J].特產(chǎn)研究，2015(2)：74-78.

[5] 周平蘭，余輝，蔣孟良，等.HPLC法測定跌打促愈片中川續(xù)斷皂苷VI的含量[J].中國藥師，2014，17(10)：1770-1772.

[6] 單秀明，王瑾，吳愛英.HPLC測定跌打片中川續(xù)斷皂苷VI的含量[J].中國藥師，2013，16(3)：388-390.

HPLCDeterminationofAsperosaponinVIinLiuweiJingkangCapsules

FANGuiqiang1*，ZHANGLili1，JIANGXiaorui1，WEIJianliang2，HAOJiangtao2

(1.HengshuiCentreforFoodandDrugControl，Hengshui，Hebei053000，China； 2.HebeiShenzhouHospital，Shengzhou，Hebei053800，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of asperosaponin VI in Liuwei Jingkang capsules.Methods：Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column was used.The mobile phase was consisting of methanol and water containing 0.1% hydrochloric acid(68∶32)with a flow rate of 1.0ml·min-1.The column temperature was set at 30 ℃.The detection wavelength was 206 nm，and the injection volume was 20 μL.Results：There was a good linear relationship of asperosaponin VI，and peak area within the concentration range of 0.094 1-0.941 mg·ml-1(r=0.999 7).The average recovery was 97.79%(RSD=0.75%，n=6).Conclusion：The established method is accurate，highly sensitive and well reproducible，which can be used for the determination of asperosaponin VI in the Liuwei Jingkang capsules and the control of product quality.

Liuwei Jingkang Capsules；determination；HPLC；asperosaponin VI

] 范桂強(qiáng)，副主任藥師，研究方向：食品、藥品檢驗檢測研究；E-mail：sagefan@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.2.022

2016-04-08)

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