提高肉蓯蓉中苯乙醇苷類成分含量的加工方法研究△

梁淑燕，盧丹逸，耿宗成，謝大棟，祁正梅，馬志國*

(1.暨南大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州 510632；2.新疆沃霖生態(tài)科技有限公司，新疆 奇臺 831800；3.內(nèi)蒙古巴丹吉林沙產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 阿拉善右旗 737300)

提高肉蓯蓉中苯乙醇苷類成分含量的加工方法研究△

梁淑燕1，盧丹逸1，耿宗成2，3，謝大棟2，3，祁正梅2，3，馬志國1*

(1.暨南大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州 510632；2.新疆沃霖生態(tài)科技有限公司，新疆 奇臺 831800；3.內(nèi)蒙古巴丹吉林沙產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 阿拉善右旗 737300)

目的：考察肉蓯蓉采挖后放置過程中苯乙醇苷成分的含量變化情況，優(yōu)選可提高成分含量的加工方法；方法：采用高效液相色譜(HPLC)法，以松果菊苷、肉蓯蓉苷A、毛蕊花糖苷、2′-乙酰毛蕊花糖苷4個成分為考察指標(biāo)，對鮮肉蓯蓉采挖后的放置時間、加熱處理方法及干燥方法進(jìn)行考察和優(yōu)選；結(jié)果：肉蓯蓉采挖后，指標(biāo)成分在放置過程中含量均呈現(xiàn)先增加后減少的變化，4個成分總量在存放至第4天時達(dá)到最大，但從第6天開始出現(xiàn)明顯下降，故加熱處理前的最佳存放時間為4 d。水蒸氣蒸10 min為最佳加熱處理方法，冷凍干燥為最佳干燥方法；結(jié)論：本實驗優(yōu)選的加工方法可明顯提高肉蓯蓉中苯乙醇苷類成分含量，有利于提高肉蓯蓉飲片的質(zhì)量。

肉蓯蓉；苯乙醇苷；產(chǎn)地加工；含量測定

肉蓯蓉為列當(dāng)科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanchetubulosa(Schrenk)Wight的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便的功能；主治腎陽不足、精血虧虛、陽痿不孕、腰膝酸軟、筋骨無力、腸燥便秘[1]。肉蓯蓉主要含有苯乙醇苷、環(huán)烯醚萜及其苷、木脂素、多糖等成分[2]，其中補(bǔ)腎陽作用的有效成分為松果菊苷和毛蕊花糖苷等苯乙醇苷類成分[3]，此類成分還具有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)[4]、抗氧化[5]等較為廣泛的藥理活性。《中華人民共和國藥典》2015年版一部肉蓯蓉項下規(guī)定，其在春季苗剛出土?xí)r或者秋季凍土前進(jìn)行采挖，去除莖尖，切段，曬干[1]。由于肉蓯蓉體積大、含水量高，晾曬干燥時間長。有文獻(xiàn)報道，肉蓯蓉所含的苯乙醇苷類成分易于被體內(nèi)的酶水解，而降低其含量[6]。因此，肉蓯蓉的產(chǎn)地加工研究報道中[7-8]提出，采挖后盡快進(jìn)行加熱處理，以破壞水解酶，然后干燥，從而提高苯乙醇苷類成分含量，但肉蓯蓉采挖后在放置過程中其苯乙醇苷類成分的含量變化情況未見報道。因此，本文以松果菊苷、肉蓯蓉苷A、毛蕊花糖苷、2′-乙酰毛蕊花糖苷4個主要的苯乙醇苷類成分為考察指標(biāo)，考察肉蓯蓉采挖后放置不同時間的含量變化情況，并對不同的加工處理方法進(jìn)行對比，優(yōu)選可提高苯乙醇苷類成分含量的肉蓯蓉產(chǎn)地加工工藝。

1 儀器與試藥

Thermo Ultimate 3000液相色譜儀、DAD檢測器、四元低壓梯度泵、在線真空脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、柱溫箱(美國賽默飛公司)；XDB-C18色譜柱(十八烷基硅烷鍵合硅膠，250 mm×4.6 mm，5 μm，美國安捷倫公司)；KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；GZX-9240 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(中國上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；萬分之一電子天平(北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；A11BS25磨粉機(jī)(德國IKA工業(yè)設(shè)備公司)；HC-280T2粉碎機(jī)(永康市綠可食品機(jī)械有限公司)。

色譜分析時的流動相使用色譜純甲醇，實驗用水為純凈水(華潤怡寶食品飲料有限公司)；供試品溶液制備時使用分析純甲醇；其他試劑均為分析純。

對照品松果菊苷、肉蓯蓉苷A、毛蕊花糖苷和2′-乙酰毛蕊花糖苷為實驗室自制(經(jīng)1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜技術(shù)鑒定了化學(xué)結(jié)構(gòu))，HPLC檢出純度均大于98%。

實驗用肉蓯蓉藥材于2014年4月采集于內(nèi)蒙古巴丹吉林沙產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司肉蓯蓉栽培基地(位于內(nèi)蒙古阿拉善盟)，經(jīng)暨南大學(xué)藥學(xué)院馬志國副教授鑒定為列當(dāng)科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的新鮮帶鱗葉的肉質(zhì)莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定方法

2.1.1 混合對照品溶液的制備 取松果菊苷、肉蓯蓉苷A、毛蕊花糖苷和2′-乙酰毛蕊花糖苷對照品適量，精密稱定，加30%甲醇水制成每1 mL含松果菊苷、肉蓯蓉苷A、毛蕊花糖苷、2′-乙酰毛蕊花糖苷分別為0.314、0.216、0.234、0.206 mg的混合溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取干燥肉蓯蓉粉末(65目)1 g，精密稱定，加70%甲醇水溶液50 mL，稱重，浸泡30 min后，超聲(250 W，40 kHz)提取30 min，放冷后加70%甲醇水補(bǔ)足減失的量，濾過，取續(xù)濾液以0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.3 色譜條件 采用Agilent XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫30 ℃；流動相為甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脫(0 min，30%A；30 min，40%A；35 min，30%A；40 min，30%A)；流速1.0 mL·min-1；檢測波長330 nm。在上述條件下，肉蓯蓉中4個成分的色譜圖見圖1[9]。

2.1.4 樣品的含量測定 分別稱取各肉蓯蓉粉末1 g，按2.1.2項下方法制備供試品溶液。分別精密吸取不同濃度的混合對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測定，外標(biāo)法計算含量。

2.2 肉蓯蓉加工工藝優(yōu)選

2.2.1 放置不同時間指標(biāo)成分的考察 取采挖的大小相當(dāng)?shù)男迈r肉蓯蓉7 kg，立即洗凈，每根肉蓯蓉分別進(jìn)行縱切處理，然后平均分為7份，于采挖當(dāng)天取樣1份，剩余6份分別在室溫下放置6 d，每天取樣1份。所有樣品取樣后先-18 ℃冷凍，然后進(jìn)行冷凍干燥，干燥后粉碎過65目篩，按2.1項下方法測定成分含量，結(jié)果見表1。

由結(jié)果可知，各成分在放置過程中含量均呈現(xiàn)先增加后降低的變化，其中松果菊苷、肉蓯蓉苷A含量變化程度較弱；而毛蕊花糖苷與2′-乙酰毛蕊花糖苷變化明顯，與剛采挖當(dāng)天對比，在放置到第4天時含量分別增加了4.2倍和1.6倍，到第6天開始出現(xiàn)明顯減少，肉蓯蓉4種指標(biāo)成分總量在存放至第4天時達(dá)到最大，為采挖當(dāng)天的2.3倍，因此加工處理前肉蓯蓉的最佳存放時間為4 d。

2.2.2 加熱處理方法的優(yōu)選 取大小相當(dāng)?shù)孽r肉蓯蓉5 kg，洗凈，分別切5 mm厚片，混勻，平均分為3份，分別采用蒸10 min、沸水煮1 min和800 W微波加熱2 min的方法加熱處理后，70 ℃烘干，粉碎過65目篩，按2.1項下方法分別測定3份樣品中的指標(biāo)成分含量，結(jié)果見表2。

由以上結(jié)果可知，蒸10 min的加熱處理方法明顯優(yōu)于煮法和微波加熱法，確定蒸10 min為最佳方法。

2.2.3 干燥方法的優(yōu)選 取大小相當(dāng)?shù)孽r肉蓯蓉6 kg，洗凈，分別切5 mm厚片，混勻，蒸10 min加熱處理后，平均分為4份，其中1份冷凍干燥，另外3份分別采用曬干、60 ℃烘干、80 ℃烘干干燥后，粉碎過65目篩，按2.1項下方法分別測定4份樣品中的指標(biāo)成分含量，結(jié)果見表3。

注：A.對照品；B.樣品；1.松果菊苷；2.肉蓯蓉苷A；3.毛蕊花糖苷；4.2′-乙酰毛蕊花糖苷。圖1 4種苯乙醇苷對照品和樣品HPLC圖

表1 放置不同時間指標(biāo)成分含量測定結(jié)果表(n=3) mg·g-1

注：與0天比較*P<0.05；**P<0.01。

表2 不同加熱處理方法指標(biāo)成分含量測定結(jié)果表(n=3) mg·g-1

注：與微波法比較*P<0.05。

表3 不同干燥方法指標(biāo)成分含量測定結(jié)果表(n=3) mg·g-1

注：與曬干法比較*P<0.05，**P<0.01。

從上表可知，曬干與烘干均會造成有效成分的明顯減少，與冷凍干燥法比，曬干法成分損失最多，達(dá)到60%，而60 ℃與80 ℃烘干也明顯低于冷凍干燥法。因此，冷凍干燥法為最佳干燥方法。

3 討論

綜合分析本實驗結(jié)果，肉蓯蓉產(chǎn)地加工的最佳工藝為鮮肉蓯蓉洗凈后，縱切為若干份，室溫放置4 d，然后沸水蒸10 min加熱處理后，切5 mm厚片，冷凍干燥。現(xiàn)有關(guān)于肉蓯蓉產(chǎn)地加工的文獻(xiàn)報道均為通過不同的工藝技術(shù)盡量避免藥材中本身含有的有效成分的損失，從而提高飲片質(zhì)量，而無增加有效成分含量的效果，本文優(yōu)選的工藝中明確了加熱處理前應(yīng)放置一定時間，這一操作可明顯提高肉蓯蓉中苯乙醇苷類成分的含量，對指導(dǎo)肉蓯蓉的產(chǎn)地加工和提高肉蓯蓉藥材的質(zhì)量具有重要意義。

本實驗證實，肉蓯蓉中的4個苯乙醇苷類成分在藥材采挖后不會立即降低，而呈含量上升的趨勢，至第4天成分總量達(dá)到最高值，為采挖當(dāng)天的2.3倍，之后可能在其內(nèi)部水解酶的作用下才開始逐漸降低。推測產(chǎn)生此現(xiàn)象的原因為新鮮肉蓯蓉采挖后，其組織細(xì)胞并未立即死亡，仍會利用其內(nèi)部貯存的水分和營養(yǎng)來進(jìn)行生命活動，但生存環(huán)境的變化使其處于應(yīng)激狀態(tài)，并會發(fā)生一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)，導(dǎo)致其化學(xué)成分發(fā)生轉(zhuǎn)化，使得肉蓯蓉在采挖后的最初幾天內(nèi)苯乙醇苷類成分含量呈現(xiàn)增加趨勢。因此，給肉蓯蓉藥材一定的物理刺激，并提供一定的放置環(huán)境，是可提高肉蓯蓉有效成分含量的關(guān)鍵，而不必盡快進(jìn)行加熱處理。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2] 雷厲，宋志宏，屠鵬飛.肉蓯蓉屬植物的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中草藥，2003，34(5)：473-476.

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[6] 屠鵬飛，王玢，張正高，等.肉蓯蓉類生藥中苯乙醇甙類成分的RP-HPLC分析[J].藥學(xué)學(xué)報，1997，32(4)：294.

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[9] 錢浩，喻芳君，耿宗成，等.不同季節(jié)采收的肉蓯蓉中4種苯乙醇苷的含量比較研究[J].藥物分析雜志，2016，36(11)：1974-1979.

MethodforIncreasingContentsofPhenylethanoidGlycosidesinCistanchedeserticola

LIANGShuyan1，LUDanyi1，GENGZongcheng2，3，XIEDadong2，3，QIZhengmei2，3，MAZhiguo1*

(1.CollegeofPharmacy，JinanUniversity，GuangdongGuangzhou510632，China；2.XinjiangWolinEcologicalTechnologyCo.Ltd.，XinjiangQitai831800，China；3.InnerMongoliaBadainJaranDesertIndustryCo.，Ltd.，NeimengguAlashanYouqi737300，China)

Objective：To investigate the changes of four phenylethanoid glycosides inCistanchedeserticolain the process of storage，and to optimize the processing method for increasing the contents of phenylethanoid glycosides.Methods：The contents of echinacoside，cistanoside A，acteoside and 2′-acetylacteoside were used as indexes to optimize the storage time，heat treatment and drying method.Results：After the collection ofC.deserticola，the contents of four phenylethanoid glycosides increased firstly and then decreased，the total amount reached the maximum in the fourth day，but decreased significantly from the sixth day.So the best storage time before heat treatment was 4 days.Steaming 10 minutes was the best method to heat treatment.Freeze drying was the best drying method.Conclusion：The optimum process method can significantly improve the contents of phenylethanoid glycosides inC.deserticola.It is beneficial to improve the quality ofC.deserticolapieces.

Cistanchedeserticola；phenylethanoid glycosides；processing in the planting area；content determination

國家自然科學(xué)基金項目(No.30902001)；新疆自治區(qū)重點研發(fā)計劃項目(2016B03039-1)

] 馬志國，副教授，研究方向：中藥炮制與飲片質(zhì)量研究；Tel：(020)85223784；E-mail：mzg79@hotmail.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.7.025

2016-10-30)

*[