脂質(zhì)體包埋腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子靶向透過(guò)血腦屏障①

張桂紅

(西安外事學(xué)院醫(yī)學(xué)院，西安710077)

脂質(zhì)體包埋腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子靶向透過(guò)血腦屏障①

張桂紅

(西安外事學(xué)院醫(yī)學(xué)院，西安710077)

目的：對(duì)脂質(zhì)體包埋腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子進(jìn)行一定的修飾，觀察其透過(guò)血腦屏障的組織分布特點(diǎn)。方法：選取西安外事學(xué)院醫(yī)學(xué)院進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的SD大鼠32只作為研究對(duì)象，隨機(jī)數(shù)字法分為脂質(zhì)體組(n=16)和對(duì)照組(n=16)。建立AD大鼠模型，對(duì)照組大鼠不給予任何處理，脂質(zhì)體組經(jīng)大鼠尾靜脈注射10 μg/kg Tf-pGFAP-BDNF-PEG，分析脂質(zhì)體包埋腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子靶向脂質(zhì)體透過(guò)血腦屏障的組織分布特點(diǎn)。結(jié)果：采用24mCi99mTC標(biāo)記1 ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子，取20 μl上柱分離后采集40～50管收集液，每管0.5 ml，測(cè)定放射性技術(shù)。將峰所在的8～17管收集液混合回收，結(jié)果顯示神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子標(biāo)記率為98.9%。脂質(zhì)體組第10、14天腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)，顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；脂質(zhì)體組大鼠腦組織中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基因表達(dá)第14天時(shí)，顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；脂質(zhì)體組大鼠存在神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)，并且神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。肉眼觀察所采腦脊液清亮、無(wú)色、透明，且顯微鏡下未檢出紅細(xì)胞。脂質(zhì)體組大鼠腦脊液便隱血膠體金檢測(cè)結(jié)果顯示陰性，對(duì)照組為陽(yáng)性。結(jié)論：轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)合聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體合并連接腦特異性啟動(dòng)子，能提高脂質(zhì)體靶向性。

脂質(zhì)體包埋；腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子；血腦屏障；靶向治療；免疫熒光染色；阿爾茨海默病

腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是一種小分子蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)最早是德國(guó)神經(jīng)生物學(xué)家從豬腦中分離出的，由腦組織合成，廣泛存在于人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，且在皮層和海馬中含量也相對(duì)較高。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和其他蛋白質(zhì)相比具有獨(dú)特的生物學(xué)特性[1]：(1)毛細(xì)血管內(nèi)細(xì)胞上缺少窗孔和吞飲小泡，但是內(nèi)皮細(xì)胞中的線粒體卻相對(duì)較多；(2)相鄰的內(nèi)皮細(xì)胞之間存在緊密的聯(lián)系，它是由跨膜蛋白與細(xì)胞質(zhì)輔助蛋白合成的一種復(fù)合物，形成細(xì)胞間最為緊密的連接[2-5]。

脂質(zhì)體是一種新型的非病毒載體已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于體內(nèi)大腦傳遞機(jī)制中。相關(guān)研究結(jié)果顯示，將脂質(zhì)體包裹的青霉素通過(guò)靜脈途徑注射到新西蘭白兔中，與注射游離青霉素相比，前者腦組織中青霉素能夠得到顯著增加[6，7]。同時(shí)也有研究顯示，脂質(zhì)體能夠轉(zhuǎn)運(yùn)一些抗腫瘤藥物，如紫杉醇、阿奇霉素等[8，9]。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，將阿奇霉素包裹在脂質(zhì)體內(nèi)水相中，脂質(zhì)體能夠增加大腦內(nèi)阿奇霉素含量，但眾多的研究顯示脂質(zhì)體的利用率相對(duì)較低[10，11]。同時(shí)，臨床上對(duì)脂質(zhì)體包埋腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子向脂質(zhì)體透過(guò)血腦屏障的組織分布尚缺乏報(bào)道[12，13]。

實(shí)驗(yàn)對(duì)脂質(zhì)體包埋腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子進(jìn)行一定的修飾，觀察其透過(guò)阿爾茨海默病大鼠血腦屏障的組織分布特點(diǎn)，為臨床阿爾茨海默病的靶向治療提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取32只SD大鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量(180±30)g，6～8周齡，雌雄隨機(jī)，均由西安外事學(xué)院醫(yī)學(xué)院提供，飼養(yǎng)嚴(yán)格遵守相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼養(yǎng)，合格證號(hào)為許可證號(hào):SYXK(陜)2011-0039，且相關(guān)處理符合《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)下意見(jiàn)》中相關(guān)規(guī)則[14]。將32只SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為脂質(zhì)體組和對(duì)照組，每組16只。試驗(yàn)于2015年11月～2016年12月在西安外事學(xué)院醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室完成。

1.1.2主要儀器和試劑 DMEM培養(yǎng)基，Gibco公司；兔抗鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司；總RNA提取試劑盒，德國(guó)QIAGEN公司；P-疏基乙醇，美國(guó)AMRESCO公司；引物合成，上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司；倒置相差顯微鏡、熒光顯微鏡BX51，日本OLYPUMS公司；熒光定量PCR儀，西安天隆科技有限公司。

1.2方法

1.2.1靶向脂質(zhì)體構(gòu)建 Tf-pGFAP-BDNF-PEG、Tf-pCMV-BDNF-PEG及Tf-H2O-PEG在前期試驗(yàn)中已經(jīng)合成完畢，本課題中直接使用[15]。

1.2.2腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子靶向脂質(zhì)體Tf-pGFAP-BDNF-PEG的制備 稱(chēng)取10 g豆磷脂，膽固醇以及其他膜材，加入20 ml氯仿，溶解后，加入4 ml 生理鹽水，形成穩(wěn)定乳劑在30℃水浴中減壓蒸發(fā)，達(dá)到膠態(tài)后，滴加內(nèi)水相，旋轉(zhuǎn)幫助器壁上的凝膠脫落，并且在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，獲得水性混懸液，采用探頭式超聲儀進(jìn)行3 min超聲，功率為30 W，常溫下冷卻，加入脂質(zhì)制備混合懸液，在4℃下攪拌30 min獲得脂質(zhì)體混懸液。將獲得的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子脂質(zhì)體進(jìn)行滅菌，并做成冷干制劑。

1.2.3阿爾茨海默病大鼠模型建立及處理 采用濃度為3.6%水合氯醛進(jìn)行全身麻醉，待麻醉生效后進(jìn)行消毒、鋪巾。大鼠仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上，根據(jù)大鼠情況向腹腔內(nèi)注射500 mg/(kg·d)濃度為5%的D-半乳糖生理鹽水溶液，每天注射1次，連續(xù)注射30 d，大鼠從造模起連續(xù)給水、給藥31 d，每天灌胃1次，3 ml/d，建立大鼠阿爾茨海默病模型[16,17]。采用一次性避暗回避試驗(yàn)行為學(xué)測(cè)試，測(cè)定大鼠近期學(xué)習(xí)記憶能力，判斷阿爾茨海默病模型是否成功。如果行為測(cè)驗(yàn)變化明顯，5 min內(nèi)電擊次數(shù)大于正常大鼠2倍，平均潛伏期小于對(duì)照組的20%，或者試驗(yàn)大鼠滯留時(shí)間低于300 s視為建模成功。對(duì)照組大鼠不給予任何處理，脂質(zhì)體組經(jīng)大鼠尾靜脈注射10 μg/kg神經(jīng)生長(zhǎng)因子脂質(zhì)體。兩組大鼠建模10 d后給予抗生素預(yù)防感染，觀察大鼠大體情況。

1.2.4組織提取 造模后8周采用4 ml/kg濃度為10%的水合氯醛對(duì)大鼠腹腔注射麻醉，將麻醉好的大鼠固定在手術(shù)臺(tái)上，采用70%乙醇對(duì)大鼠腹腔進(jìn)行消毒，分離組織，剪開(kāi)胸骨，充分暴露心臟，采用鑷子小心打開(kāi)心包，滴加生理鹽水，并夾閉胸主動(dòng)脈，心包穿刺，沖洗后灌注固定液，待灌注完畢后迅速取腦，將其放置在濃度為4%多聚甲醛中進(jìn)行固定，并將其放置在液氮中保存[18,19]。

1.2.5主要觀察指標(biāo)

1.2.5.1細(xì)胞組織學(xué)觀察 造模后8周將獲得的雙側(cè)腦組織，分別浸泡在濃度為70%、80%、90%梯度乙醇脫水，并將其放入溫度為60℃石蠟中，完全置換組織中的透明劑，并將組織導(dǎo)入包埋器中，連續(xù)石蠟切片，切片厚度為3 μm，并將其放置在載玻片上，將切片放置在顯微圖像上進(jìn)行采集，并進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)[20，21]。

1.2.5.2兩組大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子mRNA的表達(dá) 造模后8周將提取的大鼠腦組織的RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，采用RT-PCR獲得相關(guān)產(chǎn)物片斷瓊脂糖凝膠電泳分析，并在電泳圖上進(jìn)行基因條帶圖像分析[22，23]。

1.2.6觀察兩組大鼠腦組織中BNDF mRNA水平 造模后8周從-80℃中取出模板RNA，并將其放置在冰浴上，制作Real-time PCR反應(yīng)液，啟動(dòng)PCR儀預(yù)熱，根據(jù)PCR反應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增、電泳，采用actin條帶光密度比值表示各組RT-PCR水平[24，25]。

1.2.7腦脊液檢查 造模后8周觀察腦脊液標(biāo)準(zhǔn)檢查結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件對(duì)采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其中符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05表示差異存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量分析 納入32只SD大鼠，隨機(jī)分為兩組，全部進(jìn)行結(jié)果分析，中途無(wú)脫失。

2.2兩組SD大鼠腦組織中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子含量比較 脂質(zhì)體組經(jīng)尾靜脈注射10 μg脂質(zhì)體后經(jīng)過(guò)免疫熒光染色結(jié)果顯示：脂質(zhì)體包埋神經(jīng)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子靶向脂質(zhì)體均能夠透過(guò)血腦屏障，但是在腦組織不同部位的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子不盡相同，鏡下可見(jiàn)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分布在皮質(zhì)區(qū)，而海馬區(qū)及白質(zhì)區(qū)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子陽(yáng)性表達(dá)不明顯，同時(shí)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在腦組織左右兩側(cè)表達(dá)并不明顯，而在對(duì)照組中并未能檢測(cè)到神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。采用24mCi99mTcm標(biāo)記1 ml 神經(jīng)生長(zhǎng)因子,取20 μl上柱分離后采集 40～50管收集液,每管0.5 ml,測(cè)定放射性技術(shù)。將峰所在的8～17管收集液混合回收,結(jié)果顯示神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子標(biāo)記率為98.9%。脂質(zhì)體組第10、14天腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù),顯著高于對(duì)照組(P<0.05);脂質(zhì)體組大鼠腦組織中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基因表達(dá)第14天時(shí),顯著高于對(duì)照組(P<0.05);脂質(zhì)體組大鼠存在神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá),并且神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)水平,顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。肉眼觀察所采腦脊液清亮、無(wú)色、透明,且顯微鏡下未檢出紅細(xì)胞。脂質(zhì)體組大鼠腦脊液便隱血膠體金檢測(cè)結(jié)果顯示陰性,對(duì)照組則為陽(yáng)性。提示:轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)合聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體合并連接腦特異性啟動(dòng)子,能提高脂質(zhì)體靶向性。

2.3神經(jīng)生長(zhǎng)因子標(biāo)記率 采用24mCi99mTcm標(biāo)記1 ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子，取20 μl上柱分離后采集40～50 管收集液，每管0.5 ml，測(cè)定放射性技術(shù)。將峰所在的8～17管收集液混合回收，結(jié)果顯示神經(jīng)生長(zhǎng)因子標(biāo)記率為98.9%。見(jiàn)圖1。

2.4兩組大鼠不同時(shí)間段腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)兩組SD大鼠第5天、第7天腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)差異無(wú)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；脂質(zhì)體組第10天、第14天腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)，顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

從圖2可以看出：脂質(zhì)體組腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)整體出現(xiàn)上升趨勢(shì)，而對(duì)照組腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)變化趨勢(shì)不明顯(P<0.05)。

2.5兩組大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 mRNA的表達(dá) 本研究中，脂質(zhì)體組大鼠腦組織中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基因表達(dá)與對(duì)照組在第7天時(shí)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；脂質(zhì)體組大鼠腦組織中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基因表達(dá)第14天時(shí)，顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)圖3。

2.6兩組大鼠腦組織中BNDF mRNA檢查結(jié)果比較 本實(shí)驗(yàn)中，脂質(zhì)體組大鼠中存在神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)，并且神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)圖4。

圖1 兩組SD大鼠腦組織中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子含量(×200)Fig.1 SD rat brain tissue in two neurotrophic factor levels (× 200)Note: A.Lipid group;B.Control group.

圖2 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子標(biāo)記率Fig.2 Neurotrophic factor marker rateNote: Series 1 is the control group with neurotrophic factor labeling;Series 2 is the experimental group of nerves Nutritional factor labeling rate.

Groups5d7d10d14dLiposomegroup7.22±1.887.36±1.1315.35±1.3624.14±2.98Controlgroup7.11±1.018.08±1.138.13±1.257.17±1.68t0.391.3623.0419.88P>0.05>0.05<0.05<0.05

圖3 兩組大鼠不同時(shí)間段腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子免疫陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)Fig.3 BDNF immunoreactive cells express two groups of rats in different time periodsNote: With the increase of time, the liposome group of brain-derived neurotrophic factor positive expression of cells.The number was significantly higher than the control group.

圖4 兩組大鼠造模后8周腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子mRNA的表達(dá)Fig.4 Expression of two groups of rats eight weeks after modeling BDNF mRNANote: The left side shows corical brain-derived neurotrophic factor mRNA expression;expression of brain-derived neurotrophic factor mRNA in hippocampus of right.1-4,respectively,1,3,5,7 weeks.

2.7腦脊液標(biāo)準(zhǔn)檢查 肉眼觀察所采腦脊液清亮、無(wú)色、透明，且顯微鏡下未檢出紅細(xì)胞。脂質(zhì)體組大鼠腦脊液便隱血膠體金檢測(cè)結(jié)果顯示陰性，對(duì)照組則為陽(yáng)性。

3 討論

神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族，能在中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中進(jìn)行持續(xù)表達(dá)，促進(jìn)機(jī)體神經(jīng)元的存活[26，27]。同時(shí)，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展存在緊密的聯(lián)系[28-39]。文獻(xiàn)報(bào)道顯示，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子其實(shí)含量相對(duì)較低，并且該因子含量能夠從胎齡15 d到出生后2周逐漸增加，從而彌漫于腦部各個(gè)組織中[30，31]。阿爾茨海默病又稱(chēng)之為老年癡呆癥，它主要是由于機(jī)體腦部組織發(fā)生損傷引起[32，33]。臨床上，對(duì)于該疾病發(fā)病機(jī)制尚不完全知曉[34]。研究顯示，患者發(fā)病后神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子以及受體TrkB表達(dá)均出現(xiàn)相應(yīng)的增加，能夠?qū)κ軗p的腦部組織產(chǎn)生一定的保護(hù)[35，36]。但是，內(nèi)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子含量相對(duì)較少，難以滿(mǎn)足機(jī)體需要，且醫(yī)學(xué)界并未能找到有效的組織來(lái)源[37，38]。

本實(shí)驗(yàn)中脂質(zhì)體組經(jīng)尾靜脈注射10 μg脂質(zhì)體后經(jīng)過(guò)免疫熒光染色結(jié)果顯示，包埋腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子靶向脂質(zhì)體均能夠透過(guò)血腦屏障，但是在腦組織不同部位的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子不盡相同，而在對(duì)照組中并未能檢測(cè)到腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。脂質(zhì)體作為一種新型的藥物載體，植入機(jī)體后能夠透過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦部組織，并且能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的靶向給藥。脂質(zhì)體的特點(diǎn)：(1)脂質(zhì)體屬于是一種非病毒性載體，對(duì)于人體的毒性較小，不會(huì)產(chǎn)生免疫原性，且具備生物降解性[39]；(2)脂質(zhì)體作為載藥載體制作相對(duì)方便，成本也比較低，能夠進(jìn)一步保護(hù)RNA或DNA避免酶的降解；(3)脂質(zhì)體能夠與細(xì)胞膜相互融合，進(jìn)一步進(jìn)入血腦組織。但是，脂質(zhì)體植入機(jī)體后容易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，使得周?chē)鷶y帶的藥物被周?chē)M織吸收，并且在機(jī)體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間更短。脂質(zhì)體包埋過(guò)程中可以采用轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)合聚乙二醇進(jìn)行修飾。轉(zhuǎn)鐵蛋白屬于是一種由肝臟合成的糖蛋白，其具有較強(qiáng)的目的性和靶向性，能夠具備高度表達(dá)作用，能夠進(jìn)一步保護(hù)機(jī)體內(nèi)神經(jīng)因子發(fā)揮作用，透過(guò)血腦屏障。通過(guò)轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)合聚乙二醇修飾能夠增加脂質(zhì)體在體內(nèi)靶向性和穩(wěn)定性，更加有利于藥物靶向植入大腦[40]。

腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是腦內(nèi)分布最為廣泛的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究中已經(jīng)取得階段性進(jìn)展。研究表明：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子能實(shí)現(xiàn)神經(jīng)元的保護(hù)，能有效地降低機(jī)體內(nèi)的炎癥因子水平，能促進(jìn)損傷神經(jīng)元的修復(fù)和功能重塑，能參與腦缺血損傷的保護(hù)劑修復(fù)過(guò)程。對(duì)于正常人而言，機(jī)體內(nèi)的炎癥反應(yīng)處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，當(dāng)患者發(fā)生腦缺血后腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、TrKB受體表達(dá)含量將會(huì)進(jìn)一步增加，能抑制疾病的發(fā)生、發(fā)展，縮小梗死面積，由此看出：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)損傷后神經(jīng)元具有神經(jīng)保護(hù)作用，提示腦缺血后，腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子能進(jìn)一步增加，它是機(jī)體神經(jīng)元缺血、缺氧后自我保護(hù)的重要條件之一，當(dāng)患者發(fā)病后腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、受體水平均得到明顯的提高，相關(guān)學(xué)者研究表明：將腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子給予阿爾茨海默病大鼠模型后，發(fā)現(xiàn)阿爾茨海默病病情得到改善，同時(shí)有助于恢復(fù)患者感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能。提示腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子具有抗細(xì)胞凋亡的作用，在調(diào)節(jié)神經(jīng)和功能性神經(jīng)功能恢復(fù)等方面具有重要的作用。

綜上所述，轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)合聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體合并連接腦特異性啟動(dòng)子，能夠?qū)崿F(xiàn)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子靶向脂質(zhì)體透過(guò)血腦屏障組織分布，減少外周器官捕獲，提高脂質(zhì)體靶向性，可為阿爾茨海默病治療提供依據(jù)。

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[收稿2017-02-21 修回2017-04-07]

(編輯 許四平 劉格格)

Liposome-encapsulatedbrain-derivedneurotrophicfactortargetsblood-brainbarrier

ZHANGGui-Hong.

Xi′anMedicineCollegeofForeignAffairs,Xi′an710077,China

Objective:To observe the characteristics of the tissue distribution of the blood brain barrier through the modification of the liposome encapsulated brain derived neurotrophic factor.Methods: A total of 32 SD rats were selected from Xi′an Medicine College of Foreign Affairs as the research object,and randomly divided into two groups (n=16) and control group (n=16).To establish a rat model of AD rats in the control group

no treatment,liposome group by rat tail vein injection of 10 μg/kg Tf-pGFAP-BDNF-PEG,analysis of liposome entrapped BDNF targeting liposomes through blood brain barrier tissue distribution characteristics.Results: 40-50 nerve growth factor (1 ml) was collected by using 24mCi99mTC and 20 L 0.5 ml was collected on the top of the column.The concentration of 8-17 tube in the peak was recovered,and the results showed that the labeling rate of neurotrophic factor was 98.9%.Liposome group for tenth days,14 days of BDNF immunoreactive cells,significantly higher than the control group (P<0.05);neurotrophic factor in brain tissue of rats in body lipid gene expression at day fourteenth,significantly higher than the control group (P<0.05);expression of neurotrophic factors in liposome group rat,and neurotrophic factor expression level was significantly higher than the control group (P<0.05).The cerebrospinal fluid was clear,colorless and transparent,and no red blood cells were detected under microscope.Liposome group in cerebrospinal fluid of rats with fecal occult blood detection results of gold colloid showed negative,while the control group was positive.Conclusion: The combination of transferrin and polyethylene glycol modified liposomes combined with brain specific promoter can improve the targeting of liposomes.

Liposome embedding;Brain derived neurotrophic factor;Blood-brain barrier;Targeted therapy;Immunofluorescence staining;Alzheimer′s disease

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.004

①本文為陜西省教育廳基金項(xiàng)目(16JK2172)。

張桂紅(1979年-)，女，碩士，講師，主要從事中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病發(fā)病機(jī)制及其防治研究，E-mail：hootban@126.com。

R575.5

A

1000-484X(2017)09-1296-06