中藥金銀花流浸膏的制備及體外抑菌試驗(yàn)研究

杜傳祥

（天津市靜海區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所 天津 靜海 301600）

中藥金銀花流浸膏的制備及體外抑菌試驗(yàn)研究

杜傳祥

（天津市靜海區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所 天津 靜海 301600）

1 前言

金銀花被譽(yù)為清熱解毒的良藥，應(yīng)用歷史悠久。臨床上主要用于外感風(fēng)熱或溫?zé)岵〕跗鸢l(fā)熱而微惡風(fēng)寒者及下痢膿血，如上呼吸道感染、痢疾、咽炎、急性扁桃體炎、風(fēng)熱感冒等癥狀。研究證明，金銀花具有解熱、消炎、抑菌、利膽保肝、止血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。本試驗(yàn)擬對金銀花及以金銀花為主的復(fù)方制劑的開發(fā)和利用提供理論依據(jù)，以尋找療效確切、組分明確的藥物，為臨床醫(yī)療服務(wù)。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 藥材與試劑。金銀花(花)，營養(yǎng)瓊脂，無水酒精。

2.1.2 菌株。金黃色葡萄球菌、大腸桿菌。采用普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。

2.1.3 儀器。真空干燥箱，ZK-82B型，上海市試驗(yàn)儀器總廠；電子控溫電熱器，蚌埠市恒信試驗(yàn)儀器技術(shù)研究所；高壓蒸氣滅菌鍋，上海醫(yī)用核子儀器廠；電子分析天平，F(xiàn)A1004型，上海精科天平儀器廠；粉碎機(jī)，JFSD-100型，嘉定糧油檢測儀器廠；游標(biāo)卡尺，規(guī)格0～150 mm±0.02 mm，安徽桐城量具廠生產(chǎn)；恒溫水浴鍋，玻璃平皿，回流冷凝裝置，蒸餾裝置等。

2.2 方法

2.2.1 金銀花流浸膏不同濃度溶液制備。由于抑菌試驗(yàn)選用的是不同提取物，因此須轉(zhuǎn)換為同一當(dāng)量進(jìn)行抑菌試驗(yàn)比較，即配制成相當(dāng)于1 g生藥溶于1ml水中的1∶1濃度溶液。金銀花流浸膏的制備：取金銀花100 g，用無水乙醇作溶劑，浸漬24 h后，以1～3 ml/min的速度緩緩滲漉，收集續(xù)漉液85 ml，另器保存，繼續(xù)滲漉，至滲漉液色淡為止，收集濾漉液，濃縮至稠膏狀，加入初漉液，混合后，再加無水乙醇稀釋至100 ml，靜置，后澄清，過濾，即得。從上述三者的1∶1濃度的溶液中各取5.0 ml于小玻璃瓶中，用梯度濃度配比法配成濃度分別為1∶2、1∶4的各提取物的水溶液。具體步驟為：取1∶1濃度2.5 ml加入第2個小瓶中，再放入2.5 ml蒸餾水，充分混勻，即為1∶2濃度；再從1∶2濃度的瓶中取出2.5ml溶液加入第3個小瓶中，再加入2.5 ml蒸餾水，充分混勻，即為1∶4濃度溶液。

2.2.2 抑菌試驗(yàn)。①藥敏紙片的制備：將普通定性濾紙用打孔機(jī)打成若干圓形紙片，直徑為6.0 mm，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，用單層牛皮紙包扎，放入高壓滅菌鍋中經(jīng)121.3℃、30 min高壓滅菌后，取出放入恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。取經(jīng)干燥后的紙片一定數(shù)量，放入金銀花的3種提取物不同濃度溶液中，浸潤后備用。②培養(yǎng)基的制備：在容量為1 000 ml的三角燒瓶中加入蒸餾水1 000 ml，放在電爐上加熱。用天平準(zhǔn)確稱取35.0 g營養(yǎng)瓊脂，放入三角燒瓶中并不斷攪拌使瓊脂完全溶解，用牛皮紙封口，然后放入高壓滅菌鍋中經(jīng)121.3℃、30 min高壓滅菌，取出趁熱倒入經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)皿中，厚度約4 mm，蓋好蓋子，冷卻凝固后備用。應(yīng)注意對培養(yǎng)基的保護(hù)，防止被細(xì)菌污染。將剩下的培養(yǎng)基放入冰箱保存。③參照菌株的培養(yǎng)：取狗的新鮮糞便，用生理鹽水稀釋后，接種環(huán)接種到培養(yǎng)基上，放置37℃溫箱中，4 h后取出，取少量疑似菌落涂抹到干凈的載玻片上，均勻涂抹適當(dāng)大小的薄層，經(jīng)自然干燥后用酒精燈外焰加熱將其烘干固定，進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡觀察形態(tài)為大腸桿菌后，在無菌操作條件下，用接種環(huán)取相同菌落培養(yǎng)物，用劃線法接種在制作好的培養(yǎng)基中，然后用不同接種環(huán)分別以同樣方法對金黃葡萄球菌、大腸桿菌進(jìn)行接種。把各菌種置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，24 h后取出放入4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩＂荏w外抑菌試驗(yàn)：分別取上述菌株的新鮮培養(yǎng)物，在無菌操作條件下，用不同涂布棒均勻涂抹在接種過不同菌種的瓊脂培養(yǎng)基上，再用無菌鑷子，將在不同濃度藥液中浸潤的紙片均勻間隔貼于各瓊脂培養(yǎng)基表面，輕壓紙片使接觸良好，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，24 h后取出，觀察抑菌圈，測量并記錄結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑小于9 mm為低度敏感；9.1～11mm為中度敏感；11.1～15 mm為高度敏感。

3 結(jié)果與分析

3.1 試驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 金黃色葡萄球菌試驗(yàn)結(jié)果。金黃色葡萄球菌體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果見表1：

表1 金黃色葡萄球菌體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果

3.1.2 大腸桿菌試驗(yàn)結(jié)果。大腸桿菌體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果見表2：

表2 大腸桿菌體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果

3.2 結(jié)果分析。由表1、2可知，金銀花流浸膏3個劑量組中，1∶1劑量組對金黃色葡萄球菌高度敏感(抑菌圈直徑為14.32±0.6 mm)，對大腸桿菌中度敏感(抑菌圈直徑為9.76±0.7 mm)；1∶2劑量組對金黃色葡萄球菌中度敏感(抑菌圈直徑為10.84±0.5 mm)，對大腸桿菌低度敏感(抑菌圈直徑為8.34±0.5 mm)；1∶4劑量組對金黃色葡萄球菌低度敏感(抑菌圈直徑為8.72±0.4 mm)，對大腸桿菌低度敏感(抑菌圈直徑為8.02±0.8 mm)。從上述分析可知，金銀花流浸膏1∶1劑量組對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌效果最好，而1∶2劑量組次之，1∶4劑量組效果最差。提示金銀花流浸膏對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最佳抑菌濃度是1∶1。

4 討論

4.1 關(guān)于試驗(yàn)?zāi)康牡姆治?。金銀花被譽(yù)為清熱解毒的良藥，具有解熱、消炎、抑菌、抗病毒、利膽保肝、止血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，抗生素的效價(jià)下降，所需劑量增大，副作用不斷增加，研究天然植物的抗菌活性，開發(fā)非抗生素類抗菌藥物顯得極為重要。我們應(yīng)科學(xué)利用金銀花并加強(qiáng)金銀花保護(hù)宣傳，以保護(hù)生態(tài)環(huán)境并實(shí)現(xiàn)對金銀花資源的可持續(xù)利用。

4.2 中草藥抑菌試驗(yàn)存在的問題。體外抑菌試驗(yàn)所觀察到的僅僅是中草藥中某些抑菌成分對細(xì)菌的直接抑制作用，或者說是中草藥中是否含有抗菌成分及其這些成分抗菌活性的大小，而中藥治病的作用機(jī)理除直接抗菌之外，更重要的是利用中藥的多種復(fù)雜有效成分調(diào)節(jié)機(jī)體平衡，提高機(jī)體免疫力，甚至一些中藥的抗菌活性在體外抑菌試驗(yàn)中顯示不出或不強(qiáng)，但在體內(nèi)卻有較好的抗感染效果。

4.3 關(guān)于試驗(yàn)結(jié)果的分析。通過試驗(yàn)可以證明，金銀花對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌都有不同程度的抑菌作用，但對不同的菌種有不同的抑制效果，抑制金黃色葡萄球菌的能力高于大腸桿菌。隨著金銀花流浸膏濃度的升高，抑菌作用也隨之增強(qiáng)，且在1∶1濃度下對金黃色葡萄球菌的抑菌程度達(dá)到高敏，抑菌圈直徑達(dá)到14.32±0.6 mm，在1∶4濃度下，大腸桿菌的抑菌圈直徑僅為8.02±0.8 mm，呈低敏效果。

5 結(jié)論

由表1、2可知，金銀花流浸膏3個劑量組中，1∶1劑量組對金黃色葡萄球菌高度敏感(抑菌圈直徑為14.32±0.6 mm)，對大腸桿菌中度敏感(抑菌圈直徑為9.76±0.7 mm)；1∶2劑量組對金黃色葡萄球菌中度敏感(抑菌圈直徑為10.84±0.5 mm)，對大腸桿菌低度敏感(抑菌圈直徑為8.34±0.5 mm)；1∶4劑量組對金黃色葡萄球菌低度敏感(抑菌圈直徑為8.72± 0.4 mm)，對大腸桿菌低度敏感(抑菌圈直徑為8.02± 0.8 mm)。從上述分析可知，金銀花流浸膏1∶1劑量組對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌效果最好，而1∶2劑量組次之，1∶4劑量組效果最差。提示金銀花流浸膏對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最佳抑菌濃度是1∶1。本試驗(yàn)證明，不同濃度的金銀花流浸膏均有著不同程度的抑菌作用。抑菌效果隨著濃度的增加而增強(qiáng)，對金黃色葡萄球菌較為敏感，對大腸桿菌作用相對較弱。

[1]王發(fā)國，葉華谷，馬其俠，等.金銀花及其藥理作用 [J].生物學(xué)通報(bào)，2004(05)：24～26.

[2]湯樹良.金銀花中的抗炎皂苷忍冬苦苷C[J].國外醫(yī)學(xué) (中醫(yī)中藥分冊)，2004(02)：26～29.

[3]林丹，趙國玲，劉佳佳.中藥金銀花藥用成分的提取及抑菌試驗(yàn)的研究 [J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003(05)：31～34.

[4]宋海英，邱世翠，王志強(qiáng)，等.金銀花的體外抑菌作用研究 [J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2003(05)：42～45.

[5]趙良忠，蔣賢育，段林東，等.金銀花水溶性抗菌物質(zhì)的提取及其抑菌效果研究 [J].中國生物制品學(xué)雜志，2006(02)：27～29.

[6]張澤生，烏蘭.金銀花中綠原酸的體外抑菌和抗氧化性的研究 [J].天津科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2005(02)：34～36.

[7]袁毅君，宋瑛.清熱類中藥的抗生育作用 [J].天水師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，21(5)：28.

[8]孫德梅.金銀花葉提取物的抗氧化活性和抑菌作用研究 [J].河南科學(xué)，2002(05)：15～18.

[9]張紅鋒，白艷軍，藍(lán)宇淑，等.中藥金銀花提取物的體外抑菌作用 [J].華東師范大學(xué)學(xué)報(bào) (自然科學(xué)版)，2000(01)：26～28.

[10]武雪芬，白雁.金銀花葉藥用成分的提取及抑菌試驗(yàn)研究 [J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001(03)：448～449.

[11]馬志琴，宋曉紅.甘草金銀花煎飲預(yù)防大劑量化療口腔潰瘍的臨床觀察 [J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，14(18)：2408.

[12]陳秋蘭.淺談金銀花在新生兒中的應(yīng)用 [J].中華現(xiàn)代護(hù)理學(xué)雜志，2006，3(11)：1049.

[13]龔璀璀，鄭玉霞，鄭乃剛.金銀花在體內(nèi)抗氧化作用的試驗(yàn)研究 [J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2006，23(5)：584.