滅菌后殘留水分對(duì)外科器械發(fā)生二次污染的影響

阿斯古麗·熱合曼，阿尼克孜·阿不都熱西提，張弘炎

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消毒配送中心供應(yīng)室，新疆 烏魯木齊 830054）

滅菌后殘留水分對(duì)外科器械發(fā)生二次污染的影響

阿斯古麗·熱合曼，阿尼克孜·阿不都熱西提，張弘炎

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消毒配送中心供應(yīng)室，新疆 烏魯木齊 830054）

目的 探討殘留水分對(duì)外科器械二次污染發(fā)生率的影響。方法 將手術(shù)器械分別置于可重復(fù)使用滅菌容器與雙層無(wú)紡滅菌包中。并設(shè)置破壞了包裝屏障完整性陽(yáng)性對(duì)照與密封塑料的陰性對(duì)照，在蒸汽消毒后0，2，4，8，16天取出包裝，并對(duì)包裝內(nèi)的陶瓷載體與殘余水進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果 滅菌后可重復(fù)使用的容器內(nèi)的殘余水平均值為28.5 mL，雙層無(wú)紡滅菌包內(nèi)殘余水為39.1 mL。兩種包裝實(shí)驗(yàn)樣品內(nèi)的殘留水和陶瓷載體均未培養(yǎng)出微生物?？芍貜?fù)使用的容器內(nèi)的陽(yáng)性對(duì)照樣品在存儲(chǔ)0天，2天和4天后發(fā)現(xiàn)微生物污染。陰性對(duì)照樣品則始終保持無(wú)菌狀態(tài)。雙層無(wú)紡布滅菌包內(nèi)的載體和殘余水樣品（包括陽(yáng)性和陰性對(duì)照）培養(yǎng)結(jié)果均為陰性。結(jié)論 滅菌后殘余水分并不會(huì)增加外科器械在隨后的儲(chǔ)存期間發(fā)生二次污染的概率。

殘留水，外科器械，污染

消毒器械所使用的包裝的屏障的完整性是手術(shù)器械蒸汽滅菌后維持其無(wú)菌狀態(tài)的關(guān)鍵。空氣中的顆?？赡芡ㄟ^(guò)屏障進(jìn)入包裝內(nèi)部并污染消毒后的器械。消毒后，手術(shù)器械中的殘留水分可能會(huì)造成微生物增殖，導(dǎo)致二次污染。因此，通常采用的方法是丟棄消毒后含有殘留水分的手術(shù)器械，進(jìn)行二次消毒[1]。但是在實(shí)際操作中，這種操作方式延長(zhǎng)了外科器械使用的等待時(shí)間，增加了成本[2]。本研究使用兩種常用的消毒包裝，評(píng)估蒸汽滅菌后外科器械殘留水分對(duì)其再次發(fā)生微生物感染的影響。

1 方 法

1.1 分組

1.1.1 實(shí)驗(yàn)包裝

將手術(shù)器械分別置于（1）可重復(fù)使用滅菌容器（包含適量的一次性過(guò)濾紙）與（2）雙層無(wú)紡滅菌包中。

1.1.2 陽(yáng)性對(duì)照包裝（破壞包裝屏障的完整性）

（1）不含過(guò)濾紙的可重復(fù)使用滅菌容器；（2）完成滅菌后立刻在5個(gè)不同位置穿孔的雙層無(wú)紡包裝。

實(shí)驗(yàn)包裝和陽(yáng)性對(duì)照包裝均包括3個(gè)聚丙烯托盤(pán)，每個(gè)托盤(pán)內(nèi)均含一套外科器械和5個(gè)具有高度微生物結(jié)合特性的用于培養(yǎng)微生物的空心陶瓷載體。

1.1.3 陰性對(duì)照

將5個(gè)用于培養(yǎng)微生物的空心陶瓷載體密封在塑料袋中。

將6個(gè)實(shí)驗(yàn)包裝、1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和1個(gè)陰性對(duì)照作為一組，進(jìn)行蒸汽滅菌（135℃，18 min，1 min干燥階段）。滅菌后，將包裝存貯在常規(guī)貨架中，維持環(huán)境溫度23℃±1℃，相對(duì)濕度45%，分別儲(chǔ)存0天，2天，4天，8天和16天后，測(cè)定各包裝內(nèi)殘留水分（滅菌前后包裝稱(chēng)重的差值）。

1.2 潛在的微生物污染的評(píng)估方法

達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求儲(chǔ)存日期后，在層流下無(wú)菌打開(kāi)包裝。將陶瓷載體取出并加入到含有10 mL胰蛋白酶大豆肉湯（TSB）的玻璃培養(yǎng)管中。同時(shí)，如果包裝中存在殘留水，將1 mL殘留水與10 mL TSB混合于玻璃培養(yǎng)管管中。將培養(yǎng)管在35℃±1℃條件下孵育0天，2天，4天，8天和16天，目測(cè)混濁度判定是否存在微生物污染。

1.3 空氣微生物污染

在儲(chǔ)存的第2天、4天和1 6天，使用空氣取樣器（100 L/min，10 min）對(duì)儲(chǔ)存區(qū)域的空氣污染進(jìn)行測(cè)定。使用沙鮑洛瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母和真菌，胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌。

通過(guò)菌落形態(tài)，染色和生長(zhǎng)特性確定包裝內(nèi)與空氣中所培養(yǎng)出的微生物的種類(lèi)。

2 結(jié) 果

在滅菌后，可重復(fù)使用的容器內(nèi)的殘余水平均值為28.5 mL（22～35 mL），雙層無(wú)紡滅菌包內(nèi)殘余水為39.1 mL（31～46 mL）。在第0天和第2天，在可重復(fù)使用的容器內(nèi)存在殘留水，但是這兩天殘留水和陶瓷載體內(nèi)均未培養(yǎng)出微生物（表1）。儲(chǔ)存4天后，可重復(fù)使用的容器內(nèi)不再含殘留水?？芍貜?fù)使用的容器內(nèi)的陽(yáng)性對(duì)照樣品在存儲(chǔ)0天，2天和4天后發(fā)現(xiàn)的污染。陰性對(duì)照樣品則始終保持無(wú)菌狀態(tài)。雙層無(wú)紡滅菌包在儲(chǔ)存0天，2天和4天后含有殘留水，8天后干燥（表2）。雙層無(wú)紡布滅菌包內(nèi)的載體和殘余水樣品（包括陽(yáng)性和陰性對(duì)照）培養(yǎng)結(jié)果均為陰性。

表1 可重復(fù)使用的容器中二次污染與殘余水

表2 雙層無(wú)紡包裝中二次污染與殘余水

陶瓷載體或殘留水在TSB中培養(yǎng)出的污染物均為凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）。儲(chǔ)存區(qū)域的空氣取樣發(fā)現(xiàn)總空氣污染物為10-250 CFU/m3，分離出的空氣污染物中比例最高的同樣為CNS。

3 討 論

本研究結(jié)果表明，可重復(fù)使用的容器和雙層無(wú)紡布滅菌包裝在滅菌后均含有殘留水，殘留水量在容許限度內(nèi)[3]。盡管存在殘余水分，但所有這些包裝殘余水或陶瓷載體上沒(méi)有發(fā)生滅菌后的二次污染。在破壞了包裝屏障的完整性后，可重復(fù)使用的容器內(nèi)陽(yáng)性對(duì)照品在儲(chǔ)存0，2和4天后均被污染，但是雙層無(wú)紡布滅菌包內(nèi)的陽(yáng)性對(duì)照卻沒(méi)有培養(yǎng)出細(xì)菌。

即使破壞了包裝屏障的完整性，仍未發(fā)生二次污染，這可能與滅菌包裝所處的環(huán)境空氣被控制在ISO 8級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4]相關(guān)，這一空氣環(huán)境中的微生物濃度處于較低水平，使得陽(yáng)性對(duì)照品能夠保持無(wú)菌狀態(tài)。對(duì)測(cè)試包裝所處的環(huán)境進(jìn)行定期空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)也證實(shí)，儲(chǔ)存期間，環(huán)境空氣中的微生物濃度處于相對(duì)穩(wěn)定的低水平。

同時(shí)，本研究結(jié)果中存在一些變異性：例如，一些對(duì)照樣品包裝在不止一個(gè)陶瓷載體中可培養(yǎng)出微生物，但從同一包裝的多個(gè)托盤(pán)中收集的殘留水卻仍處于無(wú)菌狀態(tài)。這個(gè)結(jié)果可能說(shuō)明進(jìn)入包裝的污染物的數(shù)量的確很少，但是也可能是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)方法的限制所造成的。此外，如果使用其他方法，例如使用更高級(jí)的測(cè)試培養(yǎng)液，在包裝內(nèi)包含營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，以及使用更寬范圍的培養(yǎng)基和條件，可能會(huì)比本研究使用的方法增加測(cè)試樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品的發(fā)生二次污染的概率。

在本研究中測(cè)定的結(jié)局指標(biāo)是是否存在二次污染，而不是污染程度的變化或者包裝屏障的有效性。研究結(jié)果顯示沒(méi)有發(fā)生二次污染，并且在兩種類(lèi)型的包裝之間沒(méi)有差異。然而，所謂的“無(wú)菌”概念，是一個(gè)相對(duì)的概念，10-6是目前公認(rèn)的最低的可以接受的保證無(wú)菌的水平[5]。確定具有良好統(tǒng)計(jì)學(xué)信度的無(wú)菌狀態(tài)并非本研究的目的。在后續(xù)研究中，可以通過(guò)增加樣本量解決這一問(wèn)題。

總之，本研究的結(jié)果表明在蒸汽滅菌后，雙層無(wú)紡包裝內(nèi)殘余水分多于可重復(fù)使用的容器包裝，且存留時(shí)間更長(zhǎng)。但二者內(nèi)的殘余水分均不會(huì)增加外科器械在隨后的儲(chǔ)存期間發(fā)生二次污染的概率，因此適合繼續(xù)使用。但在這一研究結(jié)果被推廣使用之前，需要進(jìn)一步研究。

[1] Association of Perioperative Registered Nurses (AORN). Recommended practices for sterilization.In:Perioperative Standards and Recommended Practices.Denver,CO:AORN 2013:513-540.

[2] 張 劍,梁 辰,張 偉,等.殘留水分對(duì)過(guò)氧化氫氣體等離子體滅菌器滅菌管腔器械的影響.中國(guó)消毒學(xué)雜志,2015,32(5),421-426.

[3] Sterilization-steam sterilizers-large sterilizers.Document EN 285;1997.European Committee for Standardization website. Published 1997.Accessed January 19,2015.

[4] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.消毒技術(shù)規(guī)范[S].2002.

[5] Dunkelberg H,Schmelz U.Determination of the efficacy of sterile barrier systems against microbial challenges during transport and storage.Infect Control Hosp Epidemiol.2009,30:179-183.

本文編輯：趙小龍

Ef f ect of residual moisture on microbial contamination after sterilization of surgical instruments

ASiguli·reheman,ANikezi·abudourexiti,ZHANG Hong-yan
(The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,supply and distribution center,Xinjiang 830054,China)

Objective To investigate the ef f ect of residual moisture on the incidence of microbial contamination after sterilization of surgical instruments.Methods Surgical instruments were placed in a reusable sterilization container or a double-layer non-woven sterilization package,with positive control (destruction of the packaging barrier integrity) and negative control (sealed plastic).0,2,4,8,16 days after steam sterilized,the carrier and residual water were cultured.Results After sterilization, the average residual moisture of reusable container was 28.5 mL,and 39.1 mL in the double layer non-woven sterilization package.The residual moisture and carrier in both kinds of packages were not infected.The positive control samples in reusable containers were microbial contamination after 0,2 and 4 days after sterilized.Negative control samples remained sterile.The carrier and residual water samples (including positive and negative control) in double layer non-woven fabric remain sterile.Conclusion Residual moisture after sterilization does not increase the probability in both kinds of packages of surgical instruments.

Residual moisture;Surgical instrument;Contamination

R612

B

ISSN.2096-2479.2017.08.15.02