HPLC測(cè)定獨(dú)活寄生湯水提物中芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素的含量

劉麗清，翁霞萍，鄭文偉，李西海，劉獻(xiàn)祥，葉蕻芝

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院，福建福州350122；3.福州市食品藥品檢驗(yàn)所，福建福州350007；4.中國(guó)人民解放軍第九五醫(yī)院，福建莆田351100）

HPLC測(cè)定獨(dú)活寄生湯水提物中芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素的含量

劉麗清1，3，翁霞萍1，4，鄭文偉1，李西海2，劉獻(xiàn)祥2，葉蕻芝2

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院，福建福州350122；3.福州市食品藥品檢驗(yàn)所，福建福州350007；4.中國(guó)人民解放軍第九五醫(yī)院，福建莆田351100）

目的建立獨(dú)活寄生湯水提物中芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素的HPLC分析方法。方法色譜柱：UltimateTMXB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：A（水）∶B（甲醇）＝0～10 min，60∶40；10～12 min，20∶80；12～22 min，20∶8；流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣體積：10 μL；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃。結(jié)果HPLC檢測(cè)獨(dú)活寄生湯水提物中芍藥苷、鹽酸川芎嗪及蛇床子素的含量分別為0.100 7%、0.003 1%、0.015 6%。結(jié)論HPLC分析方法可用于獨(dú)活寄生湯水提物中芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素的含量測(cè)定，為獨(dú)活寄生湯水提物質(zhì)量控制提供參考。

獨(dú)活寄生湯；高效液相色譜法；芍藥苷；鹽酸川芎嗪；蛇床子素

獨(dú)活寄生湯來自唐代·孫思邈《備急千金要方》，由獨(dú)活、桑寄生、茯苓、細(xì)辛、肉桂心、防風(fēng)、川芎、當(dāng)歸、牛膝、秦艽、黨參、白芍、熟地黃、杜仲、甘草15味藥物組成［1］?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)：獨(dú)活寄生湯具有鎮(zhèn)痛、抗炎、擴(kuò)張血管、改善循環(huán)和調(diào)節(jié)免疫功能等作用［2-4］。前期研究表明：獨(dú)活寄生湯能有效抑制炎癥細(xì)胞因子等，有效緩解骨關(guān)節(jié)炎的臨床癥狀及體征［5-8］。

獨(dú)活為祛風(fēng)除濕散寒藥，蛇床子素為其主要成分之一［9］；川芎為益氣活血藥，其中川芎嗪是其重要藥效成分之一［10］；白芍屬補(bǔ)腎柔肝藥，芍藥苷是其主要成分之一［11］。本文用芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素的含量作為獨(dú)活寄生湯復(fù)方湯劑水提物的質(zhì)量監(jiān)控。

1 儀器與試劑

1.1 儀器高效液相色譜儀（Agilent 1200 Series）；色譜柱UltimateTMXB-C18柱［月旭科技（上海）股份有限公司］；AL-240型分析天平［梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司］；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥獨(dú)活寄生湯水提物，自制；芍藥苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110736-201035）；鹽酸川芎嗪（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110817-200305）；蛇床子素（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0822-200204）；無(wú)水甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化藥試劑有限公司，HPLC級(jí)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：UltimateTMXB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；A（水）∶B（甲醇）＝0～10 min，60∶40；10～12 min，20∶80；12～22 min，20∶80；流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣體積：10 μL；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃。在此色譜條件下，混合對(duì)照品HPLC圖見圖1，供試品HPLC圖見圖2。

圖1 混合對(duì)照品HPLC高效液相色譜圖

圖2 獨(dú)活寄生湯水提物HPLC高效液相色譜圖

2.2 單體對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷、鹽酸川芎嗪及蛇床子素對(duì)照品一定量，置10 mL瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，分別制成一定濃度的芍藥苷、川芎嗪及對(duì)蛇床子素對(duì)照品溶液，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.3 混合對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷、鹽酸川芎嗪及蛇床子素對(duì)照品一定量，置同一10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，最后配成濃度分別為37、35、52 μg／mL的混合對(duì)照品溶液，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4 供試品溶液的制備精密量取上述水提物2 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察分別精密吸取混合對(duì)照品溶液10、8、6、5、4、3、2、1 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，得到：

芍藥苷的回歸方程：Y＝1410.5X－1.5193r＝0.999 59

鹽酸川芎嗪的回歸方程：Y＝2336.1X－17.825 r＝0.999 79

蛇床子素的回歸方程：Y＝2780.1X＋12.943 r＝0.999 95

芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素性范圍分別為：0.347～18.612、0.347～20.328、0.518～25.833 μg。

2.6 精密度試驗(yàn)混合對(duì)照品溶液按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積的RSD值分別為芍藥苷1.07%，鹽酸川芎嗪1.12%，蛇床子素1.27%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)平行制備供試品溶液6份，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素的含量平均值分別為950.30、208.12、82.68 μg／mL，RSD值分別為1.07%、1.59%、1.91%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)取1份樣品，每隔2 h測(cè)定1次，共測(cè)6次，測(cè)得峰面積的RSD值分別為芍藥苷1.88%，鹽酸川芎嗪0.59%，蛇床子素1.67%，表明獨(dú)活寄生湯水提物在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收試驗(yàn)精密量取上述水提物2 mL，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.2 mg／mL芍藥苷對(duì)照品溶液、0.2 mg／mL蛇床子素對(duì)照品溶液和0.2 mg／mL川芎嗪對(duì)照品溶液各2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液測(cè)定，平行處理6份，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)回收率結(jié)果

2.10 獨(dú)活寄生湯水提物測(cè)定根據(jù)最優(yōu)工藝條件，提取3批獨(dú)活寄生湯水提物，檢測(cè)其中芍藥苷、鹽酸川芎嗪及蛇床子素的含量，求平均值。最終測(cè)得獨(dú)活寄生湯水提物中芍藥苷含量為0.100 7%，鹽酸川芎嗪含量為0.003 1%，蛇床子素含量為0.015 6%。

3 討論

目前，HPLC分析法廣泛運(yùn)用于中藥復(fù)方中主要成分的測(cè)定［12］，具有選擇性好、提取完全、精密度良好及回收率符合要求等優(yōu)點(diǎn)，且整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程可操作性強(qiáng)，能客觀地控制本品的質(zhì)量，故選HPLC分析法作為獨(dú)活寄生湯水提物質(zhì)量控制的方法。

由于獨(dú)活寄生湯含有15味藥材，成分復(fù)雜，所以從該方的三個(gè)主要功效：祛風(fēng)除濕、益氣活血及補(bǔ)腎柔肝入手，分別選取其中對(duì)應(yīng)的3味主要藥材獨(dú)活、川芎及白芍進(jìn)行研究，選用其主要成分芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素三者作為獨(dú)活寄生湯水提物質(zhì)量控制的考察目標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：流動(dòng)相比例的微量調(diào)整即能使分離有很大的改變，經(jīng)過試驗(yàn)確定最佳條件為流動(dòng)相A（水）∶B（甲醇）＝0～10 min，60∶40；10～12 min，20∶80；12～22 min，20∶80，流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣體積：10 μL；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃。在此條件下，可以使復(fù)方湯劑水提物中芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素三者得到很好地分離，并得到各自具體的含量。

本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定芍藥苷、鹽酸川芎嗪、蛇床子素的含量，建立獨(dú)活寄生湯水提物的HPLC分析方法，為獨(dú)活寄生湯水提物質(zhì)量控制提供參考。

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R284.2

A

1000-338X（2017）04-0043-02

2017-06-02

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81373818）

劉麗清（1986—），女，主管藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)工作。

葉蕻芝（1968—），女，研究員。E-mail：yelin0930@163.com