比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林對(duì)晚期前列腺癌患者腫瘤組織中Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)的影響

郭 釧, 楊 舸, 蒲永昌, 劉林海, 張 仰, 汪 勇

(四川省內(nèi)江市第二人民醫(yī)院, 1. 泌尿外科; 2. 檢驗(yàn)科, 四川 內(nèi)江, 641000)

比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林對(duì)晚期前列腺癌患者腫瘤組織中Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)的影響

郭 釧1, 楊 舸2, 蒲永昌1, 劉林海1, 張 仰1, 汪 勇1

(四川省內(nèi)江市第二人民醫(yī)院, 1. 泌尿外科; 2. 檢驗(yàn)科, 四川 內(nèi)江, 641000)

目的 探討比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林對(duì)晚期前列腺癌患者腫瘤組織中Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)的影響。方法 選取晚期前列腺癌患者共58例，隨機(jī)分為對(duì)照組和觀察組各29例，對(duì)照組使用比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林持續(xù)給藥，觀察組使用相同藥物和劑量間歇給藥。比較2組患者的疼痛緩解率、生活質(zhì)量、不良反應(yīng)發(fā)生率，檢測2組患者前列腺特異性抗原(PSA)、Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)。結(jié)果 觀察組疼痛緩解率為82.76%, 顯著高于對(duì)照組37.93%(P=0.000); 治療后2組患者的PSA均顯著下降(P=0.000); 治療后2組患者的Raptor蛋白染色強(qiáng)度和SMYD3表達(dá)陽性率均顯著低于治療前，且觀察組均顯著低于對(duì)照組(P=0.000); 治療后觀察組的生活質(zhì)量評(píng)價(jià)量表(SF-36)分?jǐn)?shù)均顯著高于對(duì)照組，不良反發(fā)生率顯著低于對(duì)照組(P=0.000)。結(jié)論 比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林可有效控制晚期前列腺癌患者Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)，并且間歇給藥方法具有更好的治療效果和更高的安全性。

比卡魯胺; 戈舍瑞林; 前列腺癌; Raptor蛋白; 前列腺特異性抗原

前列腺癌(PCa)是指前列腺上皮細(xì)胞惡性增生產(chǎn)生的腫瘤，前列腺癌包括前列腺腺癌、鱗狀細(xì)胞癌等，其中前列腺腺癌占95%以上，所以前列腺癌通常指前列腺腺癌[1]。Raptor蛋白屬于雷帕霉素靶蛋白1(mTORC1), 可調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、代謝、凋亡和自噬等細(xì)胞進(jìn)程, mTOR抑制劑已應(yīng)用于臨床治療多種癌癥[2]。SMYD3是一種組蛋白甲基化酶，可誘導(dǎo)H3-K4蛋白甲基化從而使雄性激素蛋白的表達(dá)[3]。比卡魯胺是一種非甾體類抗雄激素藥物，可以下調(diào)雄激素水平從而治療前列腺癌。戈舍瑞林可抑制垂體分泌促黃體生成激素，調(diào)節(jié)睪丸酮的分泌，抑制腫瘤的生長[4]。由于比魯卡胺與黃體生成素釋放激素(LHRH)類似物藥動(dòng)學(xué)的相互影響，可以使用二者聯(lián)合用藥治療前列腺癌并有著顯著的效果[5], 但其作用機(jī)制尚不明確。本研究探討比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林對(duì)晚期前列腺癌患者腫瘤組織中Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年3月—2015年9月本院進(jìn)行治療的前列腺癌患者58例，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組各29例。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 經(jīng)過影像學(xué)檢查以及前列腺活檢病理檢查確診為晚期前列腺癌; ② 預(yù)計(jì)生存期大于12個(gè)月; ③ 治療結(jié)束后無因其他盆腔器官疾病需進(jìn)行手術(shù)者; ④無藥物使用禁忌的患者; ⑤ 簽署知情同意書的患者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 年齡大于80歲; ② 合并其他惡性腫瘤; ③ 有嚴(yán)重肝腎疾病和心血管疾病; ④ 有精神病史的患者。2組患者一般資料無顯著差異(P>0.05), 見表1。

表1 2組患者一般資料比較

1.2 治療方法

觀察組患者給予比卡魯胺(上海朝暉藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20064085)口服50 mg/次, 1次/d, 戈舍瑞林(Astra Zeneca UK Limited，H20040447)皮下注射, 3.6 mg/次, 1次/月。每月檢測對(duì)前列腺癌的特異性標(biāo)志物(PSA)水平，直到PSA<0.2 ng/mL時(shí)暫停用藥，期間如PSA>0.2 ng/mL, 即刻恢復(fù)用藥，監(jiān)測周期為12個(gè)月。

對(duì)照組使用觀察組相同的藥物及劑型(比卡魯胺口服50 mg/次, 1次/d, 戈舍瑞林皮下注射, 3.6 mg/次, 1次/月)，每月監(jiān)測PSA, 無論P(yáng)SA值變化如何，均不終止給藥，周期為12個(gè)月。

1.3 觀察指標(biāo)及方法

1.3.1 疼痛緩解情況: 治療后對(duì)2組患者疼痛緩解情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，按照視覺模擬疼痛評(píng)分法(VAS)分為4項(xiàng)，其中有效緩解率=(CR+PR)/總例數(shù)×100%。具體標(biāo)準(zhǔn): 完全緩解(CR)為VAS評(píng)分0～2分，部分緩解(PR)為VAS評(píng)分3～4分，輕度緩解(MR)為VAS評(píng)分5～6分，無緩解(NR)為VAS評(píng)分≥7分。

1.3.2 前列腺特異性抗原(PSA): 本次試驗(yàn)使用TRFIA法(試劑盒購于上海羽朵生物科技公司)測定患者PSA水平，在治療前及治療后3、9、12個(gè)月后2周取患者靜脈血5 mL(保證患者在48 h無射精活動(dòng)), 12 000 r/min離心10 min取血清，將微孔板使用抗體包被，后加入25 μL樣品以及200 μL緩沖液，振蕩(25 ℃, 60 min)后洗版2次，再加入200 μL單克隆抗體(銪標(biāo)記)再次振蕩(25 ℃, 60 min), 洗版6次，加入200 μL增強(qiáng)液后孵化5 min后測定熒光強(qiáng)度(英國堀場, DeltaFlex)。

1.3.3 Raptor蛋白和SMYD3表達(dá): 本次試驗(yàn)使用ABC試劑盒(美國, Vector)檢測Raptor, 使用染色強(qiáng)度作為指標(biāo)，染色強(qiáng)度為A/B兩項(xiàng)得分之和。其中A項(xiàng)為陽性細(xì)胞百分比, 0分: 0%; 1分: 0%～<10%; 2分: 10%～<50%; 3分: 50%～100%。B項(xiàng)為染色強(qiáng)度, 0分: 未觀察到棕黃色染色粒子; 1分: 觀察到淡棕黃色染色粒子; 2分: 觀察到較清晰棕黃色染色粒子; 3分: 觀察到大量棕色染色粒子。

使用免疫組織化學(xué)法對(duì)SMYD3的表達(dá)進(jìn)行測定。石蠟組織切片后脫水、微波修復(fù)、室溫孵化后，將樣品轉(zhuǎn)移到羊血清工作液中并滴加一抗，濕盒培育12 h(4 ℃)后轉(zhuǎn)移到恒溫箱內(nèi)滴加二抗孵化(37 ℃)。最后使用HRP標(biāo)記，使用DAB顯色處理后使用蘇木素復(fù)染，處理后封片后使用顯微鏡觀察。

1.3.4 生活質(zhì)量: 本次研究使用生活質(zhì)量評(píng)價(jià)量表(SF-36)對(duì)患者生活質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，問卷包括生理機(jī)能(PF)、生理職能(RP)、軀體疼痛(BP)、一般健康狀況(GH)、活力(VT)、社會(huì)功能(SF)、情感職能(RE)以及心理健康狀況(MH)8個(gè)部分。

1.3.5 不良反應(yīng): 在治療過程中密切關(guān)注患者不良反應(yīng)發(fā)生的情況并進(jìn)行記錄。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]的形式表示，統(tǒng)計(jì)分析采用秩和檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn); 計(jì)量資料的采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)分析采用獨(dú)立t檢驗(yàn);P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

對(duì)照組完全緩解5例，部分緩解6例，輕度緩解14例，無緩解4例，緩解率為37.93%; 觀察組完全緩解11例，部分緩解13例，輕度緩解4例，無緩解1例，緩解率為82.76%; 觀察組的緩解率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。治療12個(gè)月后, 2組患者血清PSA水平均顯著下降(P<0.05), 見表2。治療后，2組患者的Raptor蛋白染色強(qiáng)度和SMYD3表達(dá)陽性率均顯著下降，且觀察組兩項(xiàng)指標(biāo)均顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，見表3。2組SF-36量表共發(fā)放58份，回收58份，回收率為100%。觀察組患者的各項(xiàng)得分均顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，見表4。對(duì)照組發(fā)生去勢綜合征3例，血管收縮綜合征3例，骨質(zhì)疏松1例，肝毒性反應(yīng)2例，不良反應(yīng)發(fā)生率為31.03%; 觀察組發(fā)生去勢綜合征1例，血管收縮綜合征1例，骨質(zhì)疏松0例，肝毒性反應(yīng)0例，不良反應(yīng)發(fā)生率為6.90%。對(duì)照組不良反應(yīng)發(fā)生率顯著高于觀察組(P<0.01)。

表2 2組患者PSA水平比較

與治療前比較, *P<0.05。

表3 2組患者Raptor蛋白和SMYD3表達(dá)比較

與治療前比較, **P<0.01; 與對(duì)照組比較, ##P<0.01。

表4 2組患者SF-36得分比較 分

與對(duì)照組比較, **P<0.01。

3 討 論

前列腺癌是男性最常見的惡性腫瘤之一，并有逐漸升高的趨勢, 2012年中國腫瘤登記地區(qū)前列腺癌發(fā)病率為9.92/10萬[1], 并且隨著年齡的增長，前列腺癌的發(fā)病率逐漸升高，發(fā)病率高峰在70～80歲，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[6]。比卡魯胺是一種非甾體類的雄激素抑制劑，它可以競爭性的與性激素受體結(jié)，阻斷二氫睪酮與受體的結(jié)合，抑制雄激素從而抑制前列腺細(xì)癌細(xì)胞的生長[7-8]。而戈舍瑞林可以促使通過丘腦-垂體系統(tǒng)調(diào)節(jié)LHRH水平，可以降低體內(nèi)睪丸酮的水平，抑制腫瘤擴(kuò)散。兩種藥物無藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)相互影響，可聯(lián)合使用治療前列腺癌[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過治療2組患者的PSA均顯著降低，2組患者PSA無顯著差異，但觀察組患者的疼痛緩解率和SF-36得分均顯著高于對(duì)照組，并且觀察組得的不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于對(duì)照組，這說明間歇給藥的方法更有助于患者的健康。研究[10]發(fā)現(xiàn)間歇給藥會(huì)減少生殖系統(tǒng)腫瘤的不良反應(yīng)，提高患者生存質(zhì)量，這可能由于減少了患者在給藥期間由于雄激素水平下降而產(chǎn)生一系列不良反應(yīng)。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，治療后患者的Raptor蛋白水平顯著降低，并且觀察組顯著低于對(duì)照組。Raptor蛋白是PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的下游蛋白, PI3K/Akt/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是調(diào)控細(xì)胞生長、增殖、分化凋亡和自噬的重要通路，研究[11]發(fā)現(xiàn)包括前列腺癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞中的PI3K/Akt/mTOR通路異?；钴S。Raptor蛋白的表達(dá)收到mTOR調(diào)節(jié), mTOR可使Raptor蛋白大量表達(dá)從而促進(jìn)細(xì)胞惡性增殖，當(dāng)Raptor蛋白水平降低時(shí)可抑制前列腺腫瘤細(xì)胞的增殖[12-13]。

該項(xiàng)研究結(jié)果表明使用比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林治療前列腺癌的作用機(jī)制與其可以控制Raptor蛋白水平有關(guān)，觀察組SMYD3表達(dá)水平也顯著低于對(duì)照組, SMYD3作為組蛋白甲基化修飾酶，可催化H3-K4甲基化從而促進(jìn)雄激素受體的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的不斷增殖[14]。除此之外，研究[15]還發(fā)現(xiàn)SMYD3可以調(diào)節(jié)mTOR的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長，提示此種治療方法的效果也與其調(diào)控SMYD3的表達(dá)有關(guān)。同時(shí)該項(xiàng)研究結(jié)果也與上述觀察組疼痛緩解率顯著高于對(duì)照組的研究結(jié)果相吻合。

綜上所述，比卡魯胺聯(lián)合戈舍瑞林治療前列腺癌的作用機(jī)制可能與其可以抑制患者Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)有關(guān)，并且間歇給藥比持續(xù)給藥可更有效地抑制Raptor蛋白及SMYD3表達(dá)，患者具有更高的疼痛緩解率、更優(yōu)的生活質(zhì)量和更低的不良反應(yīng)發(fā)生率。

[1] Center M M, Jemal A, Lortet-Tieulent J, et al. International variation in prostate cancer incidence and mortality rates [J]. Eur Urol, 2012, 61 (6): 1079-1092.

[2] Iwata T N, Ramírez J A, Tsang M, et al. Conditional Disruption of Raptor Reveals an Essential Role for mTORC1 in B Cell Development, Survival, and Metabolism[J]. J Immunol, 2016, 197(6): 2250-2260.

[3] Tsai C H, Chen Y J, Yu C J, et al. SMYD3-Mediated H2A. Z. 1 Methylation Promotes Cell Cycle and Cancer Proliferation[J]. Cancer Res, 2016, 76(20): 6043-6053.

[4] Taneja S S. Efficacy and Safety of Enzalutamide versus Bicalutamide for Patients with Metastatic Prostate Cancer (TERRAIN): A Randomised, Double-Blind, Phase 2 Study[J]. J Urol, 2017, 197(1): 152-8.

[5] Washino S, Hirai M, Saito K, et al. Impact of Androgen Deprivation Therapy on Volume Reduction and Lower Urinary Tract Symptoms in Patients with Prostate Cancer[J]. Low Urin Tract Symptoms, 2016(12): 12-9.

[6] Cuzick J, Thorat M A, Andriole G, et al. Prevention and Early Detection of Prostate Cancer[J]. The Lancet Oncol, 2014, 15(11): 484-492.

[7] Li J, Xiang S, Zhang Q, et al. Combination of curcumin and bicalutamide enhanced the growth inhibition of androgen-independent prostate cancer cells through SAPK/JNK and MEK/ERK1/2-mediated targeting NF-κB/p65 and MUC1-C[J]. J Exp Clin Cancer Res, 2015, 34(1): 46-53.

[8] Alramadhan M, Ryu J M, Rayzah M, et al. Goserelin plus tamoxifen compared to chemotherapy followed by tamoxifen in premenopausal patients with early stage, lymph node-negative breast cancer of luminal A subtype[J]. Breast, 2016, 30(12): 111-117.

[9] Kunath F, Borgmann H, Blümle A, et al. Gonadotropin-releasing hormone antagonists versus standard androgen suppression therapy for advanced prostate cancer A systematic review with meta-analysis[J]. BMJ Open, 2015, 5(11): 8217-23.

[10] Drew Y, Ledermann J, Hall G, et al. Phase 2 multicentre trial investigating intermittent and continuous dosing schedules of the poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib in germline BRCA mutation carriers with advanced ovarian and breast cancer[J]. Br J Cancer, 2016, 114(7): 723-730.

[11] Yuan H-X, Wang Z, Yu F-X, et al. NLK phosphorylates Raptor to mediate stress-induced mTORC1 inhibition[J]. Genes Dev, 2015, 29(22): 2362-2376.

[12] Wu D, Chapman J R, Wang L, et al. Intestinal Cell Kinase (ICK) Promotes Activation of mTOR Complex 1 (mTORC1) through Phosphorylation of Raptor Thr-908[J]. J Biol Chem, 2012, 287(15): 12510-12519.

[13] Frey J W, Jacobs B L, Goodman CA, et al. A Role for Raptor Phosphorylation in the Mechanical Activation of mTOR Signaling[J]. Cell Signa, 2014, 26(2): 313-322.

[14] Brown M A, Foreman K, Harriss J, et al. C-terminal domain of SMYD3 serves as a unique HSP90-regulated motif in oncogenesis[J]. Oncotarget, 2015, 6(6): 4005-4019.

[15] Vieira F Q, Costa-Pinheiro P, Almeida-Rios D, et al. SMYD3 contributes to a more aggressive phenotype of prostate cancer and targets Cyclin D2 through H4K20me3[J]. Oncotarget, 2015, 6(15): 13644-13657.

Effect of bicalutamide combined with goserelin on the expressions of Raptor protein and SMYD3 in tumortissue of patients with advanced prostate cancer

GUO Chuan1, YANG Ge2, PU Yongchang1, LIU Linhai1, ZHANG Yang1, WANG Yong1

(1. Department of Urinary Surgery; 2. Department of Clinical Laboratory, Neijiang Second People′s Hospital, Neijiang, Sichuan, 641000)

Objective To investigate the effect of bicalutamide combined with goserelin on the expressions of Raptor and SMYD3 in tumor tissue of patients with advanced prostate cancer. Methods A total of 58 patients with advanced prostate cancer were randomly divided into control group and observation group, 29 cases in each group. The control group was treated with bicalutamide and continuous administration of goserelin, while the observation group was treated with the same dose of bicalutamide and intermittent administration of goserelin. The pain relief rate, quality of life and the incidence rate of adverse reactions were analyzed. Raptor protein and SMYD3 expressions were detected in both groups. Results The pain relief rate was 82.76% in the observation group, which was significantly higher than 37.93% in the control group (P=0.000). After treatment, the prostate specific antigen (PSA) decreased significantly in both groups (P=0.000). After treatment, the Raptor staining intensity and SMYD3 expression rate were significantly lower in the observation group than the control group (P=0.000). The score of SF-36 in the observation group was significantly higher than that in the control group, and the incidence rate of adverse reactions in the observation group was significantly lower than that in the control group (P=0.000). Conclusion Bicalutamide combined with goserelin can effectively control Raptor protein and SMYD3 expression in patients withadvanced prostate cancer, and the intermittent administration of drugs has a better therapeutic effect and higher safety.

bicalutamide; goserelin; prostate cancer; Raptor protein; prostate specific antigen

2017-01-12

四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014SZ0135)

楊舸

R 737.25

A

1672-2353(2017)15-053-04

10.7619/jcmp.201715014