高效液相色譜法測(cè)定丹參益坤口服液中芍藥苷和阿魏酸

陳艷梅

(商丘市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 商丘 476000)

中醫(yī)藥學(xué)

高效液相色譜法測(cè)定丹參益坤口服液中芍藥苷和阿魏酸

陳艷梅

(商丘市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 商丘 476000)

目的 了解測(cè)定丹參益坤口服液中芍藥苷和阿魏酸含量的方法。方法 采Thermo Scientific -C18色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-甲醇-5%磷酸(5∶40∶55)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，外標(biāo)法定量。結(jié)果 芍藥苷在0.163～3.264 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為98.26%，RSD=0.13%(n=6)；阿魏酸在0.046 8～0.936 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為97.91%，RSD=0.54%(n=6)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便易行，有較高靈敏度,結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于丹參益坤口服液的質(zhì)量控制。

丹參益坤口服液；芍藥苷；阿魏酸； HPLC

丹參益坤口服液[1]為河南省商丘市柘城縣人民醫(yī)院的醫(yī)院制劑，臨床應(yīng)用已數(shù)十年，具有消炎止痛、活血化瘀之功效，用于慢性盆腔炎，輸卵管梗阻等癥，療效顯著。為了較好控制該制劑質(zhì)量，保證療效，本文以該制劑的赤芍、當(dāng)歸兩味君藥中的有效成分芍藥苷和阿魏酸為定量控制指標(biāo)采用高效液相色譜法同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，以期取得滿意的效果，為該制劑質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 U3000高效液相色譜儀； DSQ10260超聲儀(功率300W，頻率50HZ上海特惠電子儀器有限公司生產(chǎn))、瑞典梅特勒XS205DU電子分析天平(精密至0.01 mg)。

1.2 試藥 芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):110736-201438，含量96.4%)；阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):110773-201313)，甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為重蒸餾水(本單位自制)。丹參益坤口服液(柘城縣人民醫(yī)院提供：批號(hào)：160307、160525、160918)，陰性對(duì)照品：柘城縣人民醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性 色譜柱：Thermo Scientific C18色譜柱250 mm×4.6 mm；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-5%磷酸[2-5](5∶40∶55)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm[3-4]；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μl；在上述條件下，芍藥苷出峰時(shí)間約為5.6 min，理論板數(shù)大于2000；阿魏酸出峰時(shí)間約8.1 min，理論板數(shù)大于5000。二者分離度符合要求，樣品中芍藥苷與阿魏酸峰與其他色譜峰達(dá)到良好的分離效果。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品21.16 mg和阿魏酸對(duì)照品5.84 mg于25 ml棕色量瓶中，加甲醇[2-3]適量，超聲法完全溶解后，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.3 供試品的制備 取批號(hào)為160307的丹參益坤口服液5 ml，置25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度搖勻，作為供試品溶液，進(jìn)樣前經(jīng)0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取不含赤芍和當(dāng)歸的陰性對(duì)照樣品5 ml，置25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣前經(jīng)0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)。

2.6 干擾試驗(yàn) 精密取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10 μl，以2.1色譜條件；分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果芍藥苷出峰時(shí)間約為5.6 min；阿魏酸出峰時(shí)間約8.1 min，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

A對(duì)照品 B供試品 C陰性樣品溶液

圖1 丹參益坤口服溶液的高效液相色譜圖

2.7 精密度試驗(yàn) 精密取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(含芍藥苷0.832 9 μg/μl；阿魏酸0.234 μg/μl)10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果6次進(jìn)樣測(cè)得芍藥苷與阿魏酸峰面積RSD分別為0.26%、1.08%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)為160307的供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，分別在0、5、10、12、16、24 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果芍藥苷與阿魏酸峰面積RSD分別為1.24%，1.56%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為160307的供試品溶液10 μl，按2.1色譜條件測(cè)定，得峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果芍藥苷與阿魏酸含量分別為1.342 mg/ml、0.223 2 mg/ml ，RSD分別為1.25%、1.36%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量(芍藥苷1.342 mg/ml、阿魏酸0.223 2 mg/ml)的同一批號(hào)(批號(hào)160307)樣品6份，每份2 ml，采用加樣回收法，置25 ml量瓶中，精密加對(duì)照品儲(chǔ)備液3 ml，加水稀釋至刻度搖勻，經(jīng)0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取10 μl分別測(cè)定回收率。見(jiàn)表1-2。

2.11 供試品測(cè)定 按2.1色譜條件對(duì)3批丹參益坤口服溶液樣品，分別進(jìn)行含量測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷、阿魏酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 芍藥苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 阿魏酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 3批樣品中芍藥苷、阿魏酸的含量(μg/L)

3 討論

3.1 赤芍是著名野生地道中藥材，應(yīng)用歷史悠久，用量較大、用途廣泛、需求剛性，有清熱涼血、活血祛淤的功效。當(dāng)歸具有補(bǔ)血和血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)燥滑腸、抗癌、抗老防老、免疫之功效。由于其產(chǎn)地和栽培技術(shù)不同，可造成芍藥和阿魏酸二者含量有一定差別，對(duì)制劑的質(zhì)量產(chǎn)生一定影響，為了較好的控制該制劑的質(zhì)量，筆者選擇了赤芍中的芍藥苷和當(dāng)歸中的阿魏酸為控制指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定結(jié)果比較穩(wěn)定。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，建議將丹參益坤口服溶液中芍藥苷和阿魏酸的含量限度暫定為：每1 ml中含芍藥苷和阿魏酸分別不得少于1.335 mg和0.222 5 mg，另建議制劑單位考察不同供樣單位赤芍和當(dāng)歸中芍藥苷和阿魏酸的含量差別，并考察制劑制備的各環(huán)節(jié)因素對(duì)芍藥苷及阿魏酸含量的影響，以保證該制劑質(zhì)量。

3.2 溶劑選擇[5-6]對(duì)本次實(shí)驗(yàn)用溶劑筆者分別比較了水、甲醇-水(70∶30)、甲醇，結(jié)果三種溶劑測(cè)得芍藥苷和阿魏酸的含量一致，最終筆者選用了水作為供試品配制溶劑。

[1] 河南省食品藥品監(jiān)督管理局.河南省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn).2005年豫藥制字：Z04140014.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:158，138.

[3] 倪文澎，錢平,等. RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定養(yǎng)生丸中芍藥苷和阿魏酸的含量[J].中國(guó)藥師，2010,13(8):1114-1116.

[4] 孟令丹，陳曉輝,等. RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定四物合劑中芍藥苷和阿魏酸的含量[J].藥物分析雜志, 2006(10):1398-1400.

[5] 勾曉丹，鄭琰，劉淑華.雙波長(zhǎng)法同時(shí)測(cè)定參芪健胃顆粒中芍藥苷和阿魏酸的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2016，22(10):53-54.

[6] 王曉飛，于玲,等.雙波長(zhǎng)反高效液相色譜法測(cè)定柴辛鼻敏康顆粒中芍藥苷和阿魏酸的含量[J].中國(guó)藥業(yè),2011，20(18):35-36.

[責(zé)任編輯：馬香芹]

Determination of Paeoniflorin and Ferulic Acid in Danshenyikunkoufurongye by HPLC

CHEN Yan-mei

(ShangqiuMunicipalFoodandDrugInspectionTestingcenter,ShangqiuHenan476000,China)

Objective To establish HPLC method for the determination of paeoniflorin and ferulic acid in danshenyikunkoufurongye.Methods Using Eclipse Plus-C18 Agilengt chromatography column, mobile phase: acetonitrile-methanol-5% phosphoric acid (5∶40∶55). The flow rate was 1.0 ml/min; detection wavelength 320 nm, external standard method quantitative.Results Paeoniflorin in 0.163～3.264 μg(r=0.999 9), the average recovery rate was 98.26%, RSD=0.13% (n=6). Ferulic acid in 0.046 8～0.936 μg (r=0.999 9), the average recovery rate was 97.91%, RSD=0.54% (n=6). Conclusion The method is simple, sensitive and accurate. It can be used to control the quality of Salvia miltiorrhiza oral solution.

danshenyikunkoufurongye；paeoniflorin; ferulic acid; HPLC

2016-12-02

陳艷梅(1982-)，女 ，河南省商丘市人， 學(xué)士，主管藥師 ，從事藥物分析工作。

R 286.0

A

1008-9276(2017)03-0265-03