正交設計優(yōu)化西青果中沒食子酸的提取工藝

安 碩， 黃麗珍， 李蘇穎

(河南醫(yī)學高等專科學校藥學教研室，鄭州 451191)

中醫(yī)藥學

正交設計優(yōu)化西青果中沒食子酸的提取工藝

安 碩， 黃麗珍， 李蘇穎

(河南醫(yī)學高等?？茖W校藥學教研室，鄭州 451191)

目的 建立西青果沒食子酸的最佳提取工藝。方法 以西青果提取液中沒食子酸含量為考察指標，通過正交試驗優(yōu)選出最佳提取條件。結(jié)果 最佳工藝為加水10倍量，提取3次，每次2 h。結(jié)論 該提取工藝穩(wěn)定合理、快速簡單、生產(chǎn)成本較低。

西青果；沒食子酸；正交設計

西青果又名藏青果，為使君子科植物訶子TerminaliachebulaRetz.的干燥幼果[1]。本品有降火利咽開音功能，用于急、慢性咽炎或慢性喉炎、扁桃體炎等[2]，臨床用藥有藏青果沖劑[3]、藏青果喉片[4]等，也是西青果口含片[5]的主要原料藥之一。其主要含沒食子酸等酚酸類成分[6-7]。高效液相色譜(HPLC)法測定西青果沒食子酸的含量已有報道[8-10]，但未見西青果提取工藝優(yōu)化的相關文獻。為進一步開發(fā)和利用西青果資源，筆者采用正交設計研究西青果的提取工藝，通過HPLC法測定西青果中沒食子酸的含量以控制其質(zhì)量，報道如下。

1 儀器與方法

1.1 儀器與試藥 Waters高效液相色譜儀(包括Waters e2695分離單元，Waters e2998 PDA檢測器)；KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；YUPINGFA2004b型電子天平(上海越平科學儀器有限公司)；METTLERAE240型十萬分之一分析天平。

西青果(廣西永福產(chǎn)，經(jīng)河南中醫(yī)學院董誠明教授鑒定為使君子科植物訶子TerminaliachebulaRetz.的干燥幼果)；沒食子酸對照品(由成都曼斯特生物科技有限公司提供，批號0831-9501，經(jīng)高效液相色譜法測定含量達98%以上)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 正交試驗 根據(jù)單因素初篩試驗結(jié)果，確定提取次數(shù)、加水倍數(shù)、提取時間3個因素，取3個因素水平。見表1。

1.2.2 色譜條件 色譜柱: HypersilODS2(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相:甲醇-0.2 %磷酸(5∶95)；流速:0.8 ml/min；柱溫:30°；檢測波長:274 nm；進樣量:10 μl；理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計算應不低于3000。在此色譜條件下，沒食子酸與其他組分能達到基線分離。

表1 西青果水提取工藝條件正交試驗設計

1.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品適量，加甲醇制成0.02 g/L的溶液，即為對照品溶液。

1.2.4 供試品溶液制備 準確稱取7.5 g西青果，按正交實驗設計，溶液濾液移入250 ml容量瓶中，水定容至刻度，精密吸取1 ml藥液定容至25 ml量瓶，0.22 μm微孔濾膜濾過，即為供試品溶液。

1.2.5 標準曲線的制備 精密吸取沒食子酸對照品溶液1、3、5、7、9 μl進樣(n=2)，按上述色譜條件測定，以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得回歸方程和相關系數(shù)，Y=4.8×106x-5296 6，r=0.999 9。結(jié)果表明沒食子酸在進樣量0.021 6～0.194 0 μg范圍內(nèi)線性關系良好。

1.2.6 精密度試驗 精密量取沒食子酸對照品溶液10 μl，重復進樣6次，按上述色譜條件測定，RSD=0.6%。

1.2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液10 μl，于0、2、4、8、12、24 h進樣，按上述色譜條件測定，RSD=2.75%。表明至少24 h內(nèi)供試品溶液在常溫下仍保持穩(wěn)定。

1.2.8 水提取工藝條件 正交試驗結(jié)果將1～9號供試品溶液分別進樣10 μl，按上述色譜條件測定，計算沒食子酸含量。沒食子酸含量及方差分析結(jié)果見表2-3。

由正交試驗結(jié)果可知，所考察的3個因素對沒食子酸含量的影響，顯著性大小為B>D>C，即提取次數(shù)>提取時間>加水倍數(shù)，提取次數(shù)視為主要的影響因素；表3方差分析結(jié)果表明：B、D因素影響差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而C因素影響差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，以B3C2D3為最佳方案，即提取條件為提取次數(shù)3次，用10倍量水，提取時間2 h。

1.2.9 優(yōu)選提取工藝驗證試驗 為了進一步考察上述工藝的穩(wěn)定性和合理性，按所篩選出的最佳工藝條件進行重復性實驗3次，分別測定沒食子酸的含量。見表4。

表2 西青果正交實驗及結(jié)果

表3 沒食子酸含量方差分析表

注：F0.05(2,2)=6.94。

表4 驗證試驗結(jié)果

沒食子酸的平均含量為2.451 1%，因此，所選的提取條件為最佳工藝。

2 討論

通過正交試驗，確定了西青果中沒食子酸的最佳提取工藝。極差和方差分析表明，最佳條件為提取次數(shù)3次，用10倍量水，提取時間2 h。試驗結(jié)果表明，該提取工藝穩(wěn)定性好，操作簡單，成本較低，為進一步開發(fā)利用西青果提供了理論基礎。

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[4] 劉元,宋志釗,李星宇,等.藏青果喉片藥效學研究[J].中國實驗方劑學雜志,2009,15(1):61.

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[6] 謝培山.中藥色譜指紋圖譜鑒別的概念、屬性、技術與應用[J].中國中藥雜志,2001,26(10):653-655.

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[8] 趙建平.西青果中沒食子酸的含量測定[J].廣西中醫(yī)學院學報,2003,6(4):53.

[9] 袁銘,熊曄,向陽,等.高效液相色譜法測定藏青果中沒食子酸的含量[J].醫(yī)藥導報,2009,28(7):916.

[10]黃耀廣,陳小雪,陳秀英.訶子、西青果和毛訶子的含量比較研究[J].西北藥學雜志,2017,32(2):154-157.

[責任編輯：馬香芹]

Study on Extraction Technology for Gallic Acid from Terminalia Chebula by Orthogonal Design

AN Shuo, HUANG Li-zhen, LI Su-ying

(HenanMedicalCollege,ZhengzhouHenan451191,China)

Objective The research aims at studying the optimum extraction technology of gallic acid from Terminalia Chebula. Methods The best extraction condition was screened by orthogonal experiment according to the content of gallic acid. Results The optimum was 10 times the amount of water, extracted three times, each time 2 h. Conclusion The extraction process is stable， reasonable, fast and simple with low cost of production.

Terminalia Chebula; gallic acid; orthogonal design

2016-12-30

安碩(1989-)，女，河南省南陽市人，碩士，助教，從事藥學專業(yè)教學與科研工作。

R 284.2

A

1008-9276(2017)05-0500-03