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    血清學與核酸檢測在無償獻血血液傳染性疾病篩查中作用分析

    2017-09-08 01:09:21樊新艷
    關(guān)鍵詞:獻血者核酸試劑

    樊新艷

    (濮陽市紅十字中心血站檢驗科, 河南 濮陽 457000)

    血清學與核酸檢測在無償獻血血液傳染性疾病篩查中作用分析

    樊新艷

    (濮陽市紅十字中心血站檢驗科, 河南 濮陽 457000)

    目的 分析血清學與核酸檢測在獻血者血液傳染疾病篩查中的作用。方法 21 325份無償獻血者血液標本采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測HBsAg、HCV抗體、HIV抗體,ELISA雙試劑檢測蒼白球螺旋體(TP)抗體,并使用核酸檢測技術(shù)(NAT)對HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA進行聯(lián)合檢測,分析上述檢測結(jié)果。結(jié)果 21 325份血液標本中,血清學檢測HBsAg(+)50份,陽性率為0.16%;HCV抗體(+)24份,陽性率0.08%;HIV抗體(+)15份,陽性率0.05%;NAT陽性檢測率0.16%(35份)。其中NAT(+)HBsAg(+)檢測18份,NAT(+)HCV抗體(+)檢測6份,NAT(+)HIV抗體(+)檢測4份。結(jié)論 在“2遍ELISA+1遍NAT”模式下(除TP抗體),ELISA和NAT檢測可以相互補充,不能互相替換單獨運用,聯(lián)合檢測可保證血液安全。

    血液傳染性疾??;血清學檢測;核酸檢測;血液篩查

    輸血在臨床上應(yīng)用越來越廣泛,臨床對血液進行傳染疾病篩查尤為重要。多年來,臨床血液中心普遍采用血清學檢測技術(shù)進行疾病篩查,即檢測相應(yīng)病毒的抗體,除乙肝病毒(HBV)可使用乙肝表面抗原(HBsAg)檢測,其它病毒檢測均可采用血清學檢測[1]。隨著醫(yī)學發(fā)展,該方法的靈敏度及特異度不斷上升,但當獻血者處于疾病感染的“窗口期”、病毒變異、免疫沉默及其他相關(guān)因素仍可導致輸血后發(fā)生感染。核酸檢測技術(shù)(nucleic acid detection technotogy,NAT)可直接檢測病原體核酸,大大縮短窗口期,保證血液安全[2]。本研究以21 325份血液標本為研究對象,分析血清學與NAT技術(shù)在血液傳染疾病篩查的作用,報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 標本來源 選擇2016年6月—2016年10月濮陽市血液中心收集的無償獻血者血液標本21 325份。

    1.2 試劑與儀器 首先選用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法進行血清學檢測,HBsAg試劑(法國伯樂、廈門英科新創(chuàng)),丙型肝炎病毒(HCV)抗體試劑(珠海麗珠試劑公司、北京萬泰),人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體試劑(珠海麗珠試劑公司、法國伯樂),TP抗體試劑(北京萬泰、廈門英科新創(chuàng)),丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑(深圳邁瑞),所有試劑均經(jīng)過批檢并在有效期內(nèi)使用。NAT檢測采用EDTA K2抗凝BD管離心,選用乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒(1+2型)核酸檢測試劑進行HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA三聯(lián)8樣混合核酸檢測,蘇州華益美試劑盒及對照試劑盒支持同時混樣、拆分檢測。儀器包括澳斯邦FAME全自動酶免檢測儀、愛康全自動酶免檢測儀、邁瑞B(yǎng)S-480全自動生化儀、澳斯邦STAR全自動加樣儀、澳斯邦全自動核酸分離純化提取儀、AB7500擴增檢測儀。

    1.3 檢測方法 HBsAg、HCV抗體、HIV抗體、TP抗體均采用ELISA法,用兩種不同廠家生產(chǎn)的試劑先后進行血清學檢測,兩種試劑均有反應(yīng),則報告該樣本血清學檢測雙試劑陽性,任一試劑陽性則用原試劑進行雙孔復試,復試結(jié)果均為陽性或單孔陽性則報告該樣本血清學檢測單試劑陽性,雙試劑檢測均為陰性則報告該樣本血清學檢測陰性;ALT采用速率法檢測,>50 U/L則為不合格;NAT檢測三聯(lián)8樣混合檢測,混樣標本為陽性時則對每份標本進行單檢,單檢為陽性則判斷不合格。

    2 結(jié)果

    2.1 HBV、HCV、HIV血清學及NAT檢測結(jié)果 21 325份血液標本經(jīng)血清學檢測結(jié)果陰性21 173份,HBsAg(+)50份,陽性率為0.16%;HCV抗體(+)24份,陽性率0.08%,HIV抗體(+)15份,陽性率0.05%。除去合并TP陽性或ALT異常未參與檢測,49份HBsAg陽性標本中,NAT(+)18份,陽性率36.73%;21份HCV抗體(+)標本中,NAT(+)6份,陽性率28.57%;13份HIV抗體(+)標本中,NAT(+)4份,陽性率30.76%。其中21 173份血清學檢測陰性標本行NAT檢測,顯示35個混合檢測模式(minipool)為陽性,拆分檢測陽性18個pool,拆分陽性率51.43%。

    2.2 血清學檢測與NAT檢測結(jié)果比較 混合樣本不同酶聯(lián)值(S/CO值)分布及NAT陽性數(shù)值,見表1-3。

    表1 HBsAg S/CO值與NAT結(jié)果比較

    注:5.01-6.001 1例合并TP抗體陽性未進行NAT比較。

    表2 HCV抗體 S/CO值與NAT結(jié)果比較

    注:0.95-10.002 1例合并TP抗體陽性、>15.001 2例合并ALT異常均未進行NAT。

    表3 HIV抗體 S/CO值與NAT結(jié)果比較

    注:0.95-10.002 1例合并TP抗體陽性、15.01-20.001 1例合并TP抗體陽性未進行NAT檢測。

    3 討論

    本研究根據(jù)2012年出版的《血站技術(shù)操作規(guī)程》,使用的檢測方式是“2遍ELISA+1遍NAT”,不包括TP抗體檢測。張峰等[3]通過對33 736人份血液標本進行檢測,其中HBsAg(+)NAT(+)符合率60.5%,HCV抗體(+)NAT(+)符合率11.2%,HIV抗體(+)NAT(+)符合率30.3%,該研究依次是42.86%、28.57%、30.3%、30.76%,結(jié)果類似,但存在一定的差異,分析原因是該研究在進行ELISA與NAT比較中剔除了不同S/CO值合并TP抗體(+)標本,對實驗結(jié)果有一定的影響,但整體影響不大,說明該實驗具有一定的可信度。 朱紹汶等[4]研究者報道南京地區(qū)的無償獻血中,HCV-RNA(+)39.45%,美國[5]報道為73.9%,該研究為28.57%,分析原因有以下幾種種,一是區(qū)域、環(huán)境因素,二是HCV抗體試劑檢測靈敏度過高出現(xiàn)假陽性情況,三是獻血者感染過HCV,但病毒并不進行復制,患者無癥狀,此外,還可能與檢測技術(shù)相關(guān),核酸擴增技術(shù)至少擴增兩個保守基因才有可能檢測出基因突變的病原體[6],血清學檢測結(jié)果、S/CO值與NAT之間的相關(guān)性仍是醫(yī)學難題。該研究結(jié)果還顯示,HBsAg(-)、HCV抗體(-)及HIV抗體(-)中,陽性pool 35份,有效拆分率為51.43%,劉胡敏等[7]報道有效拆分率為48.38%,劉麗等[8]報道為73.1%,均證明NAT可有效提高血液安全性。

    綜上,本研究沒有分析因病毒載量低或假陽性的情況,存在一定的誤差,但整體研究具有一定的可靠性,充分證實血清學與核酸檢查兩種技術(shù)均具有一定的重要性,其中核酸檢查較血清學檢測具有更高的靈敏度。

    [1] 于志軍,鄧雪蓮,高慧卉,等.血清學檢測與核酸檢測在獻血者血液篩查中的相關(guān)性研究[J].實用預防醫(yī)學,2014,21(5):532-534.

    [2] 馮秋霞,許雷,楊忠思,等.青島地區(qū)核酸檢測在血液篩查中的應(yīng)用研究[J].中國輸血雜志,2013,26(7):632-634.

    [3] 張鋒,張瓊,林碧,等.血清學聯(lián)合核酸檢測在獻血者血液篩查中的互補性[J].中國艾滋病性病,2016,22(3):197-199.

    [4] 朱紹汶,陳顯,王金花,等.2011—2012年南京地區(qū)無償獻血人群丙型肝炎病毒感染情況分析[J].臨床血液學雜志:輸血與檢驗,2013,26(10):718-720.

    [5] Egli A,Binet I,Binggeli S,et al.Cytomegalovirus-specific T-cell responses and viral replication in kidney transplant recipients[J].Journal of Translational Medicine,2008,6(1):1507.

    [6] 蔡麗娜,陳寶安.核酸擴增技術(shù)(NAT)在獻血者血液初篩中的應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中國實驗血液學雜志,2014,22(4):1171-1177.

    [7] 劉胡敏,陶傳敏,高加良,等. ELISA結(jié)合核酸檢測技術(shù)對獻血者作血液篩查結(jié)果分析[J].中國輸血雜志,2013,26(5):456-458.

    [8] 劉麗,楊忠思,單玉.血液檢測新模式在無償獻血者血液篩查中的應(yīng)用分析[J].中國輸血雜志,2015,28(3):304-306.

    [責任編輯:張亞光]

    2016-12-23

    樊新艷(1985-),女,河南省長垣縣人,本科,主管技師,從事檢驗工作。

    R 446.1

    B

    1008-9276(2017)05-0496-02

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