高原地區(qū)尿AD7c-NTP臨床應(yīng)用價值

劉 彬 楊秋萍 畢鴻雁 朱楊帆 封海霞 任 惠※

高原地區(qū)尿AD7c-NTP臨床應(yīng)用價值

劉 彬1楊秋萍2畢鴻雁2朱楊帆1封海霞3任 惠1※

目的 研究在高原地區(qū)應(yīng)用尿中阿爾茨海默病(AD)相關(guān)的神經(jīng)絲蛋白(AD7c-NTP)檢驗技術(shù)對AD的診斷價值。方法 采用ELISA檢測40例輕度認知功能障礙(MCI)，40例AD和50例智能正常老年人尿中AD7c-NTP含量。結(jié)果 MCI組、AD組和正常對照組尿中AD7c-NTP的含量分別為1.25±0.36ng/ml，2.78±0.72ng/ml，0.96±0.45ng/ml，AD組尿液中AD7c-NTP的含量明顯高于其他兩組(P<0.01)；中重度AD組尿液中AD7c-NTP的含量明顯高于輕度AD組(P<0.01)；MCI組與正常對照組尿中AD7c-NTP的含量無明顯差異(P>0.05)。結(jié)論 在高原地區(qū)應(yīng)用對疑似患者尿液中AD7c-NTP的含量檢測，對AD的早期診斷和AD嚴重程度的評估是有顯著價值的。

AD7c-NTP 阿爾茨海默病 輕度認知功能障礙

阿爾茨海默病(AD)是以認知功能障礙為主要表現(xiàn)的、漸進性加重的神經(jīng)系統(tǒng)變性病，其嚴重影響老年人的生活，患者來就診時往往已經(jīng)到中晚期，錯過了早期診斷、干預(yù)治療、延緩病程的機會，給家庭帶來了嚴重的負擔。近幾年來，通過各地健康知識的宣講、記憶門診的開診等手段，一部分AD早期患者能被我們初篩，但是缺乏早期診斷的外周血生物學(xué)標記物。近年研究表明AD患者尿液中的AD7c-NTP(阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白)含量大多高于健康老年人，與腦脊液檢測有相同的效果[1]。在云南高原地區(qū)我們應(yīng)用測定尿中AD7c-NTP含量來幫助AD的篩查，我們做了以下的研究。

1.資料與方法

1.1 研究對象 2016年3月至2017年3月在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬神經(jīng)內(nèi)科及記憶門診就診的老年志愿者共130例。入選標準：①所有病例均取得知情同意；②進行病史采集、全身及專科體格檢查、頭顱CT或MRI顯示有腦萎縮，排除腦血管病引起的癡呆；③簡易精神神經(jīng)量表評定(MMSE)、Hachinski缺血指數(shù)(HIS)、日常生活能力量表(ADL)、漢密爾頓抑郁量表(HAMD)≤7；④甲狀腺功能正常、梅毒抗體陰性；⑤血尿常規(guī)、肝腎功能、血糖、血脂、心電圖、血壓正常。MCI(輕度認知功能障礙)組40例，男性25例，女性15例，年齡60～91歲，平均年齡67.20±8.3歲；AD組40例，輕度22例，男性13例，女性9例，平均年齡73.80±8.35歲；中重度18例，男性7例，女性11例，年齡65～93歲，平均年齡71.63±9.56歲；智能正常對照組50例，男性27例，女性23例，年齡60～90歲，平均年齡72.83±8.42歲。

1.2 評定標準 AD符合美國國立神經(jīng)病語言障礙腦卒中研究所和AD病及相關(guān)疾病協(xié)會(NINCDS-ADRDA)的很可能AD診斷標準[2]，MMSE:文盲≤17分，小學(xué)≤20分，中學(xué)及以上≤26分；HIS≤4分，HAMD≤8分。輕度的AD:MMSE≥19分且≤26分；中重度的AD:MMSE≤19分；MCI符合美國Mayo神經(jīng)病學(xué)研究中心的Petersen診斷標準，MMSE:文盲18～27分，小學(xué)21～27分，中學(xué)及以上25～27分；HIS≤4分，HAMD≤8分。正常對照組為年齡性格匹配智能檢查正常的老年人，無嚴重軀體疾病及精神障礙，MMSE 26～30分，HIS≤4分，ADL=20分。

1.3 AD7c-NTP測定 采用深圳市安群生物工程有限公司提供的AD7c-NTP檢測試劑盒。留取被檢測者中段晨尿，選取經(jīng)尿常規(guī)檢測合格的清亮標本，經(jīng)過離心、過濾，取上清液2ml作為待測試液即樣本，采用改良的ELISA雙抗體夾心法，將樣本加入試劑盒中，存在于樣本中的AD7c-NTP與板上包被的抗體結(jié)合，通過洗板，將未結(jié)合的游離成分洗去；加入AD7c-NTP的多抗，溫育后洗滌，再加入辣根過氧化物酶標記的酶結(jié)合物，最終形成抗體/抗原/抗體/酶標二抗的復(fù)合物，加入顯色劑顯色，15分鐘后終止反應(yīng)，在450nm處測OD值，根據(jù)已知濃度的校準品繪制出標準曲線，最終算出樣本的AD7c-NTP含量，正常參考值≤1.5ng/ml。

2.結(jié)果

2.1 總AD組與MCI組及正常對照組 三組年齡構(gòu)成經(jīng)方差分析，差異無顯著性(F=0.563,P=0.748)；三組性別構(gòu)成，差異無顯著性(χ2=0.12,P=0.86),總AD組MCI組，總AD組與正常對照組，尿液中AD7c-NTP比較均有差異顯著性(P<0.01)，見表1。

表1 各組尿液AD7c-NTP含量比較

注：與總AD組比較：*P<0.01。

2.2 輕度AD組與中重度AD組尿液中AD7c-NTP比較均有差異顯著性(P<0.01)，見表2。

表2 各組尿液AD7c-NTP含量比較

注：與輕度AD組比較：*P<0.01。

2.3 MCI組與正常對照組相比較無顯著差異(P>0.05)，但是在MCI組中有3例表現(xiàn)為輕度找詞困難者，AD7c-NTP大于1.5ng/ml，見表3。

3.討論

在老年癡呆人群中AD患病率占到50%，AD的直接致病因素是大腦內(nèi)β類淀粉樣蛋白(Aβ42)的大量沉積構(gòu)成老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)， 從而使患者認知功能下降[3]。目前AD診斷主要依據(jù)患者臨床表現(xiàn)、頭顱CT或MRI等影像學(xué)資料、神經(jīng)心理檢查量表等綜合評價臨床診斷率低。因此尋找高敏感度、特異度、無創(chuàng)的生物學(xué)指標以提高AD早期診斷率，為早期生活方式干預(yù)、藥物干預(yù)及延緩病程提供幫助。當前用于AD診斷的特異性生物學(xué)指標有Aβ42含量，tau蛋白總量和磷酸化tau蛋白等，但是這些生物學(xué)指標需要通過腰穿取腦脊液獲得，有創(chuàng)傷性，不易被患者接受，而且上述檢測未能廣泛普及到普通醫(yī)院，開展上述檢查工作受限。

表3 各組尿液AD7c-NTP含量比較

注：與MCI組比較：*P>0.05。

1997年De La Monte等在AD患者的額、顳葉腦組織中抗胰腺絲蛋白抗體分離到AD7c-NTP，是一種分子量為41KD的跨膜磷蛋白，主要在神經(jīng)元中表達，定位在神經(jīng)神經(jīng)細胞軸突，大量存在于患者腦中神經(jīng)元纖維纏結(jié)，其他器官沒有表達[4，5]。國內(nèi)外多項研究表明AD患者的腦組織、腦脊液及尿液中AD7c-NTP的表達水平選擇性升高，對AD早期診斷的敏感性及特異性在90%以上，并且與病情嚴重程度正相關(guān)[6]。

本研究表明AD患者尿液中AD7c-NTP含量較認知功能正常的老人明顯升高，中晚期AD組中該指標較早期AD組也明顯升高，這與國內(nèi)外報到的結(jié)果相符和。我們知道大部分AD患者早期出現(xiàn)近記憶力下降，而正常衰老的老年人也有近記憶力下降，只是表現(xiàn)形式不一樣，來記憶門診就診的患者，給測定他們尿液中AD7c-NTP含量無疑是一種方便、經(jīng)濟、快捷、易于普及的AD篩查、輔助診斷工具。

1 王蓉，姖志娟，盛樹力，等.阿爾茨海默病神經(jīng)絲蛋白檢測方法的建立及其臨床意義[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2010,33(1):46-50.

2 Dubois B,Feldman HH,Jacova C,et al.Rescarch criteria for the diagnosis of Alzheimer’s disease : resvising the NINCDS-ADRDA criteria[J].Lancet Neurol,2007,6(8):734-746.

3 張勤安，高曉群.阿爾茨海默病發(fā)病機制研究進展[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2012,41(2):7-10.

4 de La Monte SM,Wands JR .The AD7c-NTP neuronal thread protein biomarker for dectecting Alzheimer’s disease[J].J Alzheimers Dis,2001,3(3):345-353.

5 Kahle PJ,Jakowec M,Teipel SJ,et al .Combined assessment of tau and neuronal thread protein in Alzheimer’s disease CSF[J].Neurology,2000,54(7):1498-1504.

6 de La Monte SM,Wands JR .Alzheimer-associated neuronal thread protein-induced apoptosis and impaired mitochondrial function in human central nervous system-derived neuronal cells[J].J Neuropathol Exp Neurol,2001,60(2):195-207.

劉彬，碩士，副主任醫(yī)師，主要研究領(lǐng)域：癡呆及腦血管病。

1.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 老年神經(jīng)內(nèi)科 650032 2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 老年內(nèi)分泌科 650032 3.昆明醫(yī)科大學(xué)研究生 650032

云南省衛(wèi)生科技計劃項目(編號：2014NS140)

10.3969/j.issn.1672-4860.2017.04.014

2017-7-15

※通訊作者：任惠，碩士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要研究領(lǐng)域：癡呆、帕金森病、癲癇。