跌打丸含量測(cè)定方法的改進(jìn)

鐘建理，黃海燕 ，蔣彥飛

（廣西壯族自治區(qū)桂林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 桂林 541012）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

跌打丸含量測(cè)定方法的改進(jìn)

鐘建理，黃海燕 ，蔣彥飛

（廣西壯族自治區(qū)桂林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 桂林 541012）

目的 改進(jìn)2015年版《中國藥典(一部)》跌打丸含量測(cè)定中供試品溶液的制備方法。方法 大蜜丸樣品采用硅藻土分散，以10%磷酸甲醇溶液為提取溶劑，以超聲提取替代回流提取，確定最佳供試品溶液制備方法。結(jié)果 改進(jìn)方法后含量測(cè)定結(jié)果明顯高于原方法結(jié)果。結(jié)論 該方法供試品溶液提取更完全，試驗(yàn)結(jié)果更穩(wěn)定，更能體現(xiàn)跌打丸制劑的血竭素含量。

跌打丸；含量測(cè)定；提取方法；血竭素

跌打丸是由三七、當(dāng)歸和血竭等24味中藥組方的小蜜丸或大蜜丸，具有活血散瘀、消腫止痛的功效，用于跌打損傷、筋斷骨折、淤血腫痛、閃腰岔氣的治療，收載于2015年版《中國藥典(一部)》[1]。在日常檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)其含量測(cè)定結(jié)果重復(fù)性差，水浴溫度和提取溶劑磷酸甲醇的濃度會(huì)影響測(cè)定結(jié)果；也有文獻(xiàn)報(bào)道，血竭素對(duì)熱不穩(wěn)定，且酸的濃度會(huì)影響提取效果[2－15]。本研究中對(duì)供試品的提取方法進(jìn)行了改進(jìn)，旨在為跌打丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜分離單元 －Waters 2998 PAD檢測(cè)器（美國Waters公司）；XS205DU型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。血竭素高氯酸鹽對(duì)照品（批號(hào)為110811－201506，純度為98.6%）購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。跌打丸（北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制 藥廠，批號(hào)分別 為 14011045，14011049，15010330，15010482，15012953）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：資生堂 Capcell Pak MG C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.05 mol／L磷酸二氫鈉溶液（49∶51）；檢測(cè)波長：440 nm；柱溫：35℃；流速：1.0 mL／min。理論板數(shù)約為6 400。上述色譜條件與《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)一致。

2.2 供試品溶液提取方法優(yōu)選

提取溶劑：取大蜜丸剪碎，加等量硅藻土，研勻，取約4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加3%，5%，8%，10%，12%磷酸甲醇溶液25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，用相應(yīng)的磷酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取濾液測(cè)定。結(jié)果含量分別為0.073，0.091，0.157，0.171，0.169 mg／g，表明以10%磷酸甲醇溶液為提取溶劑提取最完全。

提取方法：取大蜜丸剪碎，加等量硅藻土，研勻，取約4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加10%磷酸甲醇溶液 25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理 30 min，或水浴回流30 min，放冷，用 10%磷酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取濾液測(cè)定。結(jié)果含量分別為0.168，0.143 mg／g，表明以超聲提取最佳。

超聲時(shí)間：取大蜜丸剪碎，加等量硅藻土，研勻，取約4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，10%磷酸甲醇溶液25 mL，稱定質(zhì)量，分別超聲處理10，20，30，40 min，放冷，用10%磷酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，測(cè)定。結(jié)果含量分別為0.155，0.168，0.172，0.171 mg／g，表明超聲處理20 min基本提取完全。為保證提取效果，研究中選擇了超聲提取30 min。

2.3 溶液制備

對(duì)照品溶液：精密稱取血竭素高氯酸鹽對(duì)照品，加10%磷酸甲醇制成每 1 mL含血竭素高氯酸鹽20 μg（相當(dāng)于14.52 μg的血竭素）的溶液。

供試品溶液：取大蜜丸剪碎，加等量硅藻土，研勻，取約4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，10%磷酸甲醇溶液25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，用10%磷酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：稱取血竭素高氯酸鹽對(duì)照品10.18mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加10%磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，精密量取25 mL至50 mL容量瓶中，加10%磷酸甲醇溶液至刻度，搖勻，精密量取15.0，10.0，5.0，2.0，1.0，0.5 mL，分別置25 mL容量瓶中，加10%磷酸甲醇溶液至刻度，搖勻。取上述對(duì)照品溶液進(jìn)樣10 μL，測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝1.535 3× 104X＋3.404 9×103，r＝0.999 9(n＝6)。結(jié)果表明，血竭素高氯酸鹽質(zhì)量濃度在2.007 5～200.749 6 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL。結(jié)果峰面積的 RSD為1.01%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取大蜜丸剪碎，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果平均含量為 0.147 9 mg／g，RSD為1.53%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品（血竭素含量為0.148 2 mg／g）23.949 0 g，精密稱定，剪碎，加等量硅藻土23.975 0 g，研勻，取約2 g，共9份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，3份分別加入 0.020 07 g／L的對(duì)照品溶液5 mL，3份分別加入0.030 11 g／L的對(duì)照品溶液5 mL，3份分別加入 0.040 15 g／L的對(duì)照品溶液5 mL，再分別精密加入10%磷酸甲醇溶液20 mL，稱定質(zhì)量，按供試品溶液的制備方法制得溶液，按色譜條件測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 血竭素高氯酸鹽加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

表2 5批樣品血竭素含量測(cè)定結(jié)果（mg／g，n＝3）

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，配制后分別在0，1，2，4，8，12 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積平均值為277 892，RSD為0.60%（n＝6），表明供試品溶液在配制后12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 樣品含量測(cè)定及與藥典方法的比較

取5批樣品，分別按本法和2015年版《中國藥典(一部)》的方法(藥典法)測(cè)定樣品中血竭素的含量。結(jié)果見表2。

3 討論

從樣品含量測(cè)定結(jié)果看，按本法測(cè)定的血竭素含量均高于藥典規(guī)定的限度（規(guī)定每丸不得少于0.30 mg，規(guī)格為每丸3 g，約0.1 mg／g），但按照原藥典標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定的血竭素含量則小很多，且有3批含量低于藥典規(guī)定的限度，這就易引起對(duì)測(cè)定結(jié)果的誤判，影響檢驗(yàn)工作。

原藥典標(biāo)準(zhǔn)中供試品提取方法為大蜜丸剪碎，加3%磷酸甲醇溶液回流提取。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)供試品易成團(tuán)，很難溶散，造成提取不完全，故改為用硅藻土分散大蜜丸后超聲提取。

在進(jìn)行線性關(guān)系考察時(shí)，曾考慮以不同進(jìn)樣體積來得到不同的血竭素量，但當(dāng)進(jìn)樣量為30 μL時(shí)，峰形變差，線性也變差，可能是受溶劑中有磷酸的影響。依據(jù)藥典凡例，10%磷酸甲醇溶液為100 mL溶液中含10 g磷酸，故配制方法為取85%磷酸7 mL，加甲醇至100 mL。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：644.

[2]徐淑卿，沙 明，孟憲生.血竭的穩(wěn)定性研究[J].中成藥，2005，27（5）：598－599.

[3]劉長龍，高 鵬.提取溶劑酸度對(duì)血竭及玉紅生肌凝膠中血竭素含量的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（3）：520－522.

[4]謝 艷，馬克昌，謝 文.酸化對(duì)血竭中血竭素含量測(cè)定的影響[J].中草藥，2000，31（4）：265.

[5]胡世強(qiáng)，張 偉.《中國藥典》2010年版血竭中血竭素含量測(cè)定提取方法的改進(jìn)[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（1）：36－37.

[6]蔣淑云，李 紅，蔣孟良，等.七厘散凝膠劑中血竭素含量的HPLC測(cè)定[J].中國藥師，2016，19（3）：589－591.

[7]董憲鳳.高效液相色譜法測(cè)定麝香接骨膠囊中血竭素的含量[J].海峽藥學(xué)，2012，24（7）：50－51.

[8]常 潤，夏傳濤，楊瑞瑞，等.HPLC法測(cè)定展筋活血散中血竭素的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2013，28（4）：370－372.

[9]譚生建，賀業(yè)謙，梁愛君，等.HPLC法測(cè)定通絡(luò)止痛散中血竭素的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28（6）：514－516.

[10]李小曲.HPLC法測(cè)骨傷跌打止痛膠囊中血竭素的含量[J].中國藥師，2014，17（2）：343－345.

[11]陸 瑋，梁藝堅(jiān)，潘 彬，等.HPLC法測(cè)定新舒通膠囊中血竭素與亞油酸含量[J].中國藥師，2015，18（9）：1601－1602.

[12]李 純，栗建明，顧利紅，等.中國藥典中血竭藥材含量測(cè)定方法的改進(jìn)[J].今日藥學(xué)，2017，27（2）：73－75.

[13]何 軼，丁 寧，王瑞忠，等.冠脈寧片中化工染料檢查及血竭素高氯酸鹽含量測(cè)定研究[J].中國藥學(xué)雜志，2015，50（2）：120－124.

[14]王曉君，高鴻彬，王志君，等.用HPLC法測(cè)定清消丸中血竭素的含量[J].藥學(xué)服務(wù)與研究，2016，16（5）：379－381.

[15]張 偉，李 靜，郭雪申，等.HPLC法測(cè)定六白白 巴布劑中血竭素的含量[J].光明中醫(yī)，2015，30（4）：728－730.

Improvement of Content Determination of Dieda Pill

Zhong Jianli，Huang Haiyan，Jiang Yanfei
（Guilin Institute for Food and Drug Control，Guilin，Guangxi，China 541012）

Objective To improve the preparation method for test solution in the content determination of Dieda Pill in Chinese Pharmacopoeia（Volume 1，CP 2015）.Methods The samples of Dami Pill were dispersed by diatomite，with 10% phosphoric acid methanol solution as extraction solvent，the ultrasonic extraction was used to replace the reflux extraction，in order to determine the best preparation method for test solution.Results After the improvement of the method，the result of content determination was obviously higher than that of the original method.Conclusion The method can completely extract the test solution，and result of determination was more stable and can perfectly reflect the concentration of dracorhodin in Dieda Pill.

Dieda Pill；content determination；extracting method；dracorhodin

R927.2

A

1006－4931(2017)16－0023－03

2017－03－06；

2017－04－11)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.16.007

鐘建理（1975－），男，漢族，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，（電話）0773－2267165－808（電子信箱）1186421282＠qq.com。

黃海燕（1973－），女，壯族，碩士研究生，副主任藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，（電話）0773－2267165－806（電子信箱）3467809613＠qq.com。