Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量分析及產(chǎn)科應(yīng)用

朱仕清+危燕芬

【摘要】 目的 分析本站冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量及臨床應(yīng)用療效。方法 采用ACP125全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀對(duì)48袋（96 U）Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞進(jìn)行去甘油化和復(fù)蘇洗滌， 使用前檢測(cè)血紅蛋白含量、甘油殘留量及游離血紅蛋白含量等指標(biāo)， 檢測(cè)32例產(chǎn)婦輸注前后血紅蛋白（Hb）、紅細(xì)胞比容（Hct）、總膽紅素（TB）、直接膽紅素（DB）和尿膽原（UBG）水平， 評(píng)估臨床療效。結(jié)果 48袋（96 U）冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)均達(dá)到GB18469-2012《全血及成分血的質(zhì)量要求》。32例產(chǎn)婦輸注后， 均達(dá)到滿意的療效， 無(wú)輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。輸注后Hb為（86±3.2）g/L、Hct為（35.0±1.8）%， 均高于輸注前的（72±2.5）g/L、（27.5±1.1）%， 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而輸注前后TB和DB比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；輸注前后UBG均為陰性。結(jié)論 ACP125全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量合格， 可以用于Rh（D）陰性患者的臨床輸血。

【關(guān)鍵詞】 Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞；質(zhì)量控制；應(yīng)用療效

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.22.052

目前， 國(guó)際輸血協(xié)會(huì)確認(rèn)的血型系統(tǒng)有33種， 其中， Rh血型是除了ABO血型系統(tǒng)外最重要的血型系統(tǒng)， 但我國(guó)Rh（D）陰性人群比例僅約為0.4%。故此， 血站該血液庫(kù)存很少。當(dāng)有Rh（D）陰性患者急救大量用血時(shí)， 難以在短時(shí)間內(nèi)招募Rh（D）陰性獻(xiàn)血者， 影響了患者的救治。但同時(shí)由于采集時(shí)機(jī)與臨床需求對(duì)應(yīng)不上而造成血源的浪費(fèi)。自1970年Meryman等將甘油保存紅細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用于人體輸血后， 冷凍血液在臨床輸血治療中開(kāi)始得到推廣應(yīng)用[1]， Rh（D）陰性患者用血問(wèn)題逐步得到了解決。本站自2013年開(kāi)展該項(xiàng)技術(shù)， 制備的Rh（D）陰性紅細(xì)胞大部分在醫(yī)院的產(chǎn)科中使用?，F(xiàn)將2015年1月～2016年12月在花都區(qū)婦幼保健院產(chǎn)科中使用的48袋（96 U）Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量控制及應(yīng)用療效報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 血液來(lái)源 選取符合GB18467-2011《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[2]， 從日常采集并經(jīng)血型血清學(xué)檢測(cè)確定為Rh（D）陰性的合格血液， 確認(rèn)方法按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)范》[3]進(jìn)行操作。在（4±2）℃的血液專用保存箱中保存6 d內(nèi)的全血（CPD-A保養(yǎng)液）或懸浮紅細(xì)胞（MAP紅細(xì)胞添加劑）。

1. 2 病例來(lái)源 通過(guò)查閱2015年1月～2016年12月在花都區(qū)婦幼保健院產(chǎn)科中收住院的32例輸注Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞產(chǎn)婦的病歷， 對(duì)有關(guān)輸血資料和數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。產(chǎn)婦平均年齡31歲， 其中輸注A型9例， B型8例， O型13例， AB型2例。全部治愈出院。

1. 3 設(shè)備及材料 ACP125全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀、KR-4I大容量冷凍離心機(jī)、無(wú)菌接管機(jī)（費(fèi)森尤斯）、三洋-80℃超低溫血液保存箱、恒溫水浴箱、Kx-21全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、CS-600A 全自動(dòng)生化分析儀、全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀、SE-260熱合機(jī)、225型加甘油耗材、235型去甘油耗材、PVC血液轉(zhuǎn)移袋（四川南格爾）、57.1%甘油、9%氯化鈉（NaCl）、0.9%NaCl。

1. 4 制備方法

1. 4. 1 冰凍紅細(xì)胞制備方法 全血或懸浮紅細(xì)胞經(jīng)離心[溫度（4±2）℃， 離心力4036 g， 時(shí)間8 min]制備成濃縮紅細(xì)胞， 將濃縮紅細(xì)胞通過(guò)無(wú)菌接管機(jī)轉(zhuǎn)移到800 ml空袋中， 與 225型加甘油耗材連接。利用ACP125全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀自動(dòng)甘油化。加甘油完畢在室溫靜置30 min后離心[溫度（22±2）℃， 離心力2516 g， 時(shí)間8 min]， 移除上清液后熱合， 將制備好的冰凍紅細(xì)胞裝入盒子置于-80℃超低溫血液保存箱中保存。

1. 4. 2 冰凍紅細(xì)胞復(fù)蘇洗滌方法 將冰凍紅細(xì)胞置于已預(yù)溫37～42℃的振蕩水浴箱中5 min內(nèi)溶解完畢， 計(jì)算出紅細(xì)胞的凈重量。將235型去甘油耗材通過(guò)無(wú)菌接管機(jī)與冰凍紅細(xì)胞連接。開(kāi)啟ACP125全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀， 安裝去甘油耗材后自動(dòng)完成紅細(xì)胞的復(fù)蘇及洗滌程序。洗滌完畢后熱合成品袋及配血標(biāo)本。在電子天平上稱重， 記錄復(fù)蘇后紅細(xì)胞的重量。

1. 4. 3 質(zhì)控標(biāo)本的留取方法 洗滌完成后， 從血細(xì)胞處理儀上取下成品袋， 輕輕搖勻。將血液順著管道回流至遠(yuǎn)端分叉處， 熱合分離管道末端， 再將充滿血液的管道熱合成兩段， 遠(yuǎn)端保留一段≥20 cm的管道作為質(zhì)控標(biāo)本。

1. 5 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞血液質(zhì)量的檢測(cè) 用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)Hb含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)；鄰聯(lián)甲苯胺法檢測(cè)游離Hb；過(guò)碘酸鈉法檢測(cè)甘油殘留量；全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀作細(xì)菌培養(yǎng)。

1. 6 觀察指標(biāo) Rh（D）陰性產(chǎn)婦產(chǎn)前Hb<70 g/L， 或產(chǎn)前雖達(dá)不到輸注的要求， 但合并有胎位不正、前置胎盤(pán)、胎盤(pán)早剝或先兆子癇等異常情況， 分娩前備血；分娩時(shí)或產(chǎn)后大量失血， 失血量超過(guò)自身血容量的20%～30%的急救用血。使用Kx-21全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀作Hb和Hct的測(cè)定；使用全自動(dòng)生化分析儀作血清TB和DB的測(cè)定；使用尿液分析儀作UBG的測(cè)定。

1. 7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 48袋（96 U）冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)均達(dá)到GB18469-2012《全血及成分血的質(zhì)量要求》[4]。見(jiàn)表1。

2. 2 32例產(chǎn)婦輸注后均達(dá)到滿意的療效， 無(wú)輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。輸注前后Hb、Hct比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而輸注前后TB和DB比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；輸注前后UBG均為陰性。見(jiàn)表2。endprint

3 討論

隨著輸血技術(shù)的快速發(fā)展， 臨床對(duì)Rh（D）陰性血的需求量日益增加， 如何保障Rh（D）陰性等稀有血型血液的供應(yīng)， 為臨床急救診療縮短時(shí)間是臨床急需解決的問(wèn)題。特別是事故搶救和產(chǎn)婦大出血， 短時(shí)間內(nèi)需求的血量較多[5]。如不及時(shí)輸血， 將嚴(yán)重威脅患者、產(chǎn)婦或胎兒的生命。開(kāi)展冰凍紅細(xì)胞制備技術(shù)， 使Rh（D）陰性紅細(xì)胞超低溫甘油化冰凍保存， 可大幅度延長(zhǎng)紅細(xì)胞在體外存活時(shí)間， 為儲(chǔ)備稀有血型應(yīng)急血液提供了條件。

本文研究可知， 使用ACP125全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞， 其制品質(zhì)量明顯高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《全血及成分血的質(zhì)量要求》。稀有血型血液在采集后甘油化深低溫保存?zhèn)溆茫?使用時(shí)冰凍血液從復(fù)蘇到洗滌結(jié)束， 僅需約1 h。主要是冰凍紅細(xì)胞洗滌的程序簡(jiǎn)化， 也能使紅細(xì)胞體積縮小而縮短凍成和解凍時(shí)間。解凍后紅細(xì)胞的2， 3-二磷酸甘油酸（2， 3-DPG）水平與冰凍前區(qū)別不大， 紅細(xì)胞雖有輕微變形， 但不影響攜氧功能。同時(shí)， 同種異體冰凍紅細(xì)胞在制備時(shí)白細(xì)胞、血小板、抗凝劑、細(xì)胞外鉀離子、游離Hb等物質(zhì)因多次洗滌幾乎被洗去， 減少了因輸注異體血引起的輸血免疫反應(yīng)及白細(xì)胞相關(guān)病毒傳播的發(fā)生率， 也減少了輸血免疫抑制[6]， 即使大量輸注也不易產(chǎn)生酸中毒和高鉀血癥， 也可防止免疫球蛋白A（IgA）缺乏的患者因輸入含有IgA抗體的血液而發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)， 提高了輸血的安全性。

本文研究顯示， 32例產(chǎn)婦輸注Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞后， Hb及Hct能達(dá)到理論值：60 kg體重的成人每輸入1單位全血約可提高血紅蛋白5 g/L[7]， 而 TB、DB 及UBG與輸注前沒(méi)明顯變化， 證明冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞復(fù)蘇洗滌后紅細(xì)胞質(zhì)量保證， 輸注后未發(fā)生溶血等輸血不良反應(yīng)。

目前， 紅細(xì)胞的冰凍保存是現(xiàn)代輸血中唯一能長(zhǎng)期保存紅細(xì)胞的方法， 可以使紅細(xì)胞有效保存10年[8]。開(kāi)展冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備技術(shù)， 不僅避免寶貴血液資源的浪費(fèi)， 更重要的是為稀有血型患者的輸血提供了方便， 為搶救贏得了時(shí)間， 也為臨床提供了更符合國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的血液產(chǎn)品， 更有效地保障了臨床用血的安全。

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[收稿日期：2017-03-27]endprint