基因敲除弱化產(chǎn)1,3-丙二醇Klebsiellapneumoniae莢膜多糖的合成

劉情，王小婉，諸葛斌，陸信曜，宗紅，方慧英，宋健

（1江南大學(xué)糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫 214122；2江南大學(xué)生物工程學(xué)院，工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室工業(yè)微生物研究中心，江蘇 無(wú)錫 214122；3江南大學(xué)化學(xué)與材料工程學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122）

基因敲除弱化產(chǎn)1,3-丙二醇Klebsiellapneumoniae莢膜多糖的合成

劉情1，2，王小婉2，諸葛斌1，2，陸信曜1，2，宗紅1，2，方慧英1，2，宋健3

（1江南大學(xué)糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫 214122；2江南大學(xué)生物工程學(xué)院，工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室工業(yè)微生物研究中心，江蘇 無(wú)錫 214122；3江南大學(xué)化學(xué)與材料工程學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122）

1,3-丙二醇（1,3-PDO）是重要的平臺(tái)化合物，在高性能纖維合成等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。Klebsiellapneumoniae是優(yōu)良的1,3-PDO生物合成細(xì)胞工廠，但該菌代謝甘油合成1,3-PDO時(shí)積累大量莢膜多糖，影響底物與產(chǎn)物的高效轉(zhuǎn)運(yùn)，導(dǎo)致發(fā)酵液黏度增大，限制發(fā)酵法生產(chǎn)1,3-丙二醇的下游提取及產(chǎn)業(yè)化。本研究基于已報(bào)道的K.pneumoniae莢膜合成途徑，利用Red重組技術(shù)對(duì)K.pneumoniae莢膜多糖合成途徑中的起始糖基轉(zhuǎn)移酶wecA基因及參與莢膜多糖后期組裝的跨膜蛋白wzi基因進(jìn)行敲除，并考察上述基因缺失對(duì)菌株莢膜含量、細(xì)胞形態(tài)、菌體生長(zhǎng)、發(fā)酵液黏度及產(chǎn)物合成的影響。研究發(fā)現(xiàn)，同時(shí)缺失wecA和wzi基因?qū)τ谌趸v膜多糖效果顯著，莢膜含量降低38.5%，細(xì)胞基本喪失菌毛合成及相互粘連能力，1,3-PDO產(chǎn)量提高23.0%，為菌株改造提供了一種新思路。

莢膜多糖；敲除；Klebsiellapneumoniae；1,3-丙二醇

1,3-丙二醇（1,3-propanediol，簡(jiǎn)稱1,3-PDO）是一種重要的平臺(tái)化合物，在紡織等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用[1]。在已有的1,3-PDO合成菌株中，Klebsiella pneumoniae具有高產(chǎn)量及高轉(zhuǎn)化率等優(yōu)點(diǎn)，是目前研究的熱點(diǎn)。但K.pneumoniae在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生大量莢膜多糖，使得發(fā)酵液黏度變大、下游分離提取困難[2]，限制了發(fā)酵法生產(chǎn)1,3-PDO的工業(yè)化。

莢膜多糖是黏附于細(xì)菌表面，由重復(fù)的單糖連接成的同聚體或異聚體[3]。與大腸桿菌I型莢膜多糖的合成途徑相似，K.pneumoniae莢膜多糖的合成途徑為Wzy依賴聚合途徑。在此途徑中，各種糖基轉(zhuǎn)移酶催化活性單糖按一定順序連接形成低聚重復(fù)單元，隨后通過(guò)內(nèi)膜，在周質(zhì)空間進(jìn)一步聚合，最后在Wzi蛋白作用下形成成熟的莢膜多糖[4-6]?；谏鲜鐾緩?，研究者通過(guò)敲除uge、wzabc等基因顯著降低莢膜多糖合成能力[7-8]，表明敲除莢膜合成相關(guān)基因能夠有效降低莢膜多糖含量。但目前對(duì)于弱化莢膜多糖合成與細(xì)胞形態(tài)、菌株發(fā)酵性能間的關(guān)系等的系統(tǒng)研究較少。

基于此，本文通過(guò)敲除K.pneumoniae中參與莢膜前期合成的關(guān)鍵基因wecA[9-10]和負(fù)責(zé)將莢膜結(jié)構(gòu)連接到細(xì)胞表面的wzi基因[11]，考察這兩個(gè)基因缺失對(duì)K.pneumoniae甘油代謝過(guò)程中莢膜合成、細(xì)胞形態(tài)和與發(fā)酵性能的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 主要材料、試劑與儀器

K.pneumoniaeZG25由本實(shí)驗(yàn)室保存；蛋白胨、酵母提取物購(gòu)自O(shè)xiod公司；氯霉素（Cm）和卡那霉素（Kan）購(gòu)自上海生工生物工程有限公司；Taq DNA聚合酶購(gòu)自大連寶生物有限公司；DNA凝膠回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒、DNA marker購(gòu)自上海捷瑞生物工程有限公司；色譜柱Aminex HPX-87H column （300mm×7.8mm×9μm）購(gòu)自BioRad公司；TEM-H2TACH2H-7650購(gòu)自日立高新技術(shù)公司；PCR儀、電轉(zhuǎn)儀購(gòu)自Eppendorf公司；引物由蘇州泓迅生物科技有限公司合成；1,3-PDO標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自Sigma公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 引物

本文實(shí)驗(yàn)中所使用的引物見(jiàn)表1。

表1 本文使用的引物

1.3 方法

1.3.1 培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法

種子培養(yǎng)基：酵母粉5.0g/L，胰蛋白胨10.0g/L，NaCl 10.0g/L。

發(fā)酵培養(yǎng)基：甘油40.0g/L，葡萄糖 2.0g/L，酵母粉6.0g/L，KH2PO47.5g/L，MgSO42.0g/L，(NH4)2SO42.0g/L，F(xiàn)eSO40.005g/L，VB120.015g/L，微量元素溶液0.1mL/L，KOH調(diào)pH至8.5。

微量元素溶液：ZnCl20.07g/100mL，MnCl2·4H2O 0.1g/100mL，H3BO30.06g/100mL，CoCl2·6H2O 0.2g/100mL，CuCl20.02g/100mL，NiCl2·6H2O 0.025g/100mL，Na2MoO4·2H2O 0.035g/100mL。

種子培養(yǎng)：1%接種量（體積比），37℃，150r/min，培養(yǎng)8～10h。發(fā)酵培養(yǎng)：250mL三角瓶50mL裝液量，4%接種量（體積比），pH 8.5。37℃、150r/min振蕩培養(yǎng)10h后，將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)為100r/min。所有培養(yǎng)基在1×105Pa滅菌30min。

1.3.2 缺失菌株的構(gòu)建

利用Red同源重組敲除系統(tǒng)構(gòu)建各缺失菌株：以pKD13質(zhì)粒為模板，設(shè)計(jì)引物構(gòu)建出需敲除基因的同源打靶片段。然后將所克隆出的打靶片段電轉(zhuǎn)入K.pneumoniae（含氯霉素抗性的pKD46質(zhì)粒）感受態(tài)中，并涂kan抗性平板篩選出陽(yáng)性菌。隨后42℃、150r/min消除陽(yáng)性菌株中的pKD46質(zhì)粒，電轉(zhuǎn)入pCP20質(zhì)粒，進(jìn)行菌株kan標(biāo)記的剔除。并通過(guò)菌落PCR篩選出陽(yáng)性菌株，最后42℃、150r/min培養(yǎng)消除質(zhì)粒pCP20，獲得不帶抗性的缺失菌。

1.3.3 分析測(cè)定方法

菌株莢膜多糖提取與含量測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[12]。菌株形態(tài)通過(guò)透射電子顯微鏡觀察。生物量的測(cè)定通過(guò)測(cè)定發(fā)酵液在600nm處的光吸收值。代謝產(chǎn)物的測(cè)定使用高效液相色譜法，色譜柱為Aminex HPX-87H柱，柱溫60℃；流動(dòng)相為5mmol/L H2SO4，流速為0.6mL/min，進(jìn)樣量為10μL。使用示差折光及紫外檢測(cè)器，外標(biāo)定量法定量[13]。

2 結(jié)果與分析

2.1K. pneumoniaeΔwecA、K. pneumoniaeΔwzi及K. pneumoniaeΔwecAΔwzi菌株的構(gòu)建

利用Red重組系統(tǒng)，分別構(gòu)建wecA、wzi基因單獨(dú)缺失及雙基因缺失重組K.pneumoniae。如圖1所示，野生菌中wecA和wzi基因大小分別約為1600bp和1400bp。而缺失菌中兩個(gè)基因的PCR產(chǎn)物理論大小分別約為650bp和180bp。挑取PCR驗(yàn)證正確的轉(zhuǎn)化子，并消除其所帶抗性和質(zhì)粒，分別獲得缺失菌K.pneumoniaeΔwecA、K.pneumoniaeΔwzi及K.pneumoniaeΔwecAΔwzi。

圖1wecA基因和wzi基因敲除的PCR驗(yàn)證

2.2 基因缺失對(duì)莢膜多糖含量、細(xì)胞形態(tài)及發(fā)酵液黏度的影響

由于K.pneumoniae莢膜多糖一般是酸性多糖且含重復(fù)葡糖醛酸，可通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)液中葡糖醛酸含量以定量分析細(xì)胞莢膜多糖[14-15]。在K.pneumoniae中，wecA基因編碼的起始糖基轉(zhuǎn)移酶將Und-PP（磷酸脂質(zhì)載體）和活性單糖通過(guò)磷酸二酯鍵連接形成Und-P-P-GlcNAc，進(jìn)而啟動(dòng)莢膜多糖前期單體的合成。然而，由表2可知K.pneumoniaeΔwecA培養(yǎng)液中葡糖醛酸含量與野生菌相比僅降低6.8%，表明wecA對(duì)莢膜多糖合成的影響較弱。有研究表明，K.pneumoniae中可能存在WecA的同工酶（如WbaP）[16]。因此，雖然wecA在莢膜多糖合成前期具有重要作用，但潛在的同工酶能夠代償其功能，使得敲除wecA無(wú)法有效阻斷莢膜多糖的合成。而膜蛋白Wzi的功能是將前期合成的莢膜結(jié)構(gòu)連接到細(xì)胞表面，進(jìn)而在細(xì)胞表面形成成熟的莢膜多糖。敲除該基因后，K.pneumoniaeΔwzi培養(yǎng)液中葡糖醛酸含量降低20.6%，表明敲除wzi基因?qū)ηv膜合成具有顯著影響。雙缺失菌株K.pneumoniaeΔwecAΔwzi莢膜多糖含量降低38.5%，表明多位點(diǎn)阻斷能夠進(jìn)一步弱化細(xì)胞莢膜多糖的合成。

表2 基因缺失對(duì)葡糖醛酸含量的影響

為進(jìn)一步明確基因缺失對(duì)細(xì)胞莢膜合成和形態(tài)的影響，對(duì)莢膜合成弱化作用最明顯的K.pneumoniaeΔwecAΔwzi和野生菌進(jìn)行透射電鏡觀察比較。如圖2(a)和圖2(d)，野生菌胞外可見(jiàn)明顯的半透明狀莢膜，同時(shí)其外周還黏附了多糖等較多顆粒狀物質(zhì)。而雙缺失菌K.pneumoniaeΔwecAΔwzi細(xì)胞外半透明狀莢膜顯著減少，同時(shí)未見(jiàn)黏附顆粒物。有文獻(xiàn)報(bào)道，莢膜多糖減少可能會(huì)影響菌毛的合成[8]。與此相似，由圖2(b)和圖2(e)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，K.pneumoniaeΔwecAΔwzi菌株細(xì)胞周圍菌毛幾乎沒(méi)有。此外，有研究表明細(xì)胞間黏結(jié)程度主要受莢膜多糖含量影響，莢膜減少會(huì)減弱黏結(jié)效應(yīng)[17]。如圖2(c)，野生菌較為緊密地相互黏結(jié)，而K.pneumoniaeΔwecAΔwzi則可見(jiàn)清晰的單細(xì)胞分散菌體[圖2(f)]，表明敲除菌細(xì)胞間的相互黏結(jié)能力基本喪失。上述結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，敲除wecA和wzi后胞外莢膜含量顯著降低，同時(shí)菌毛合成弱化及細(xì)胞黏附能力減弱。

表3 各菌株發(fā)酵液低速離心后上清液的吸光值

有研究表明，莢膜多糖含量能夠影響發(fā)酵液黏度[2]。為考察基因缺失對(duì)發(fā)酵液黏度影響，將不同菌株在相同條件下培養(yǎng)，取同等菌體量后在3000r/min下離心6min，測(cè)定各樣品上清液在600nm處的吸光值，以表征不同發(fā)酵液黏度間的差異。如表3所示，相對(duì)野生菌株，K.pneumoniaeΔwecAΔwzi與K.pneumoniaeΔwzi上清液的OD600值分別減少27.3%和15.9%，表明基因缺失后發(fā)酵液黏度降低、細(xì)胞更易離心沉淀。由上述結(jié)果可知，菌株莢膜多糖越少時(shí)，發(fā)酵液的黏度越小，能夠減少攪拌能耗、提高發(fā)酵液過(guò)濾效率，便于下游產(chǎn)品的分離提取。

2.3 基因缺失對(duì)生物量和甘油代謝的影響

細(xì)胞組分（如莢膜多糖、脂多糖和菌毛）與細(xì)胞完整性和生長(zhǎng)能力具有一定關(guān)聯(lián)性。如圖3(a)，與野生菌相比，K.pneumoniaeΔwzi生物量基本保持不變，K.pneumoniaeΔwecA生物量提高了28.7%，而雙基因缺失菌株生物量提高了15.8%。上述結(jié)果表明，wzi基因?qū)?xì)胞生物量無(wú)影響，而缺失wecA基因則有利于細(xì)胞生長(zhǎng)。有學(xué)者研究表明，弱化細(xì)胞脂多糖合成可能有利于菌株的生長(zhǎng)，但弱化菌株莢膜多糖合成對(duì)于菌株生長(zhǎng)的影響則因基因而異[18-19]。與wzi相比，wecA基因除參與莢膜合成外，還在脂多糖合成途徑前期具有重要作用[9-10]。因此，敲除wecA可能通過(guò)影響脂多糖合成，進(jìn)而提高細(xì)胞生物量。

基因敲除對(duì)細(xì)胞甘油代謝的影響如圖3所示。其中，各缺失菌株的甘油消耗速率均有所提高。K.pneumoniaeΔwecA、K.pneumoniaeΔwzi及K.pneumoniaeΔwecAΔwzi的1,3-PDO產(chǎn)量分別提高了4.0%、17.4%和23.0%。莢膜合成基因敲除弱化了莢膜多糖的合成，可能使得更多的碳流被引導(dǎo)到中心碳通路[2]，從而強(qiáng)化主代謝產(chǎn)物的合成和生物量積累。另一方面，莢膜合成相關(guān)基因雖與產(chǎn)物代謝途徑無(wú)直接關(guān)聯(lián)，但菌株莢膜多糖減少可以改變膜通透性[17]，有利于底物和產(chǎn)物的轉(zhuǎn)運(yùn)，加快底物甘油的消耗和產(chǎn)物合成。此外，碳流和還原力向1,3-PDO及生物量合成偏轉(zhuǎn)，不利于主要副產(chǎn)物2,3-丁二醇（2,3-butanediol，簡(jiǎn)稱2,3-BDO）的積累，從而使得缺失菌2,3-BDO產(chǎn)量都略有降低。而其他副產(chǎn)物量較少，碳流偏轉(zhuǎn)對(duì)其影響微弱，使得積累量基本不變（數(shù)據(jù)未列出）。結(jié)合表2及圖3(c)，可知K.pneumoniaeΔwecA、K.pneumoniaeΔwzi及K.pneumoniaeΔwecAΔwzi莢膜多糖合成能力越弱則更有利于1,3-PDO的積累。因此，推測(cè)菌株莢膜多糖合成越少、膜通透性越高、發(fā)酵液黏度越低，更有利于1,3-PDO的合成和轉(zhuǎn)運(yùn)。

圖3K.pneumoniae及基因敲除突變株發(fā)酵甘油產(chǎn)1,3-PDO的生物量、甘油、1,3-PDO和2,3-BDO的濃度

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)K.pneumoniae莢膜多糖合成途徑中的wecA及wzi基因進(jìn)行敲除，考察了莢膜含量、細(xì)胞形態(tài)及發(fā)酵性能的變化。結(jié)果表明，基因敲除能夠有效降低莢膜含量、提高1,3-PDO產(chǎn)量。其中，雙缺失wecA及wzi基因后，細(xì)胞外周莢膜多糖及菌毛量減少，且細(xì)胞間黏附能力減弱，莢膜多糖含量降低了38.5%，1,3-PDO產(chǎn)量提高了23.0%，與已有報(bào)道相比，本研究的組合敲除策略能夠更有效地提高1,3-PDO產(chǎn)量。綜上可知，敲除莢膜合成途徑相關(guān)基因能夠有效降低莢膜含量，降低發(fā)酵液黏度、攪拌能耗和過(guò)濾效率，提高細(xì)胞膜通透性、促進(jìn)1,3-PDO的合成，為菌株改造實(shí)現(xiàn)1,3-PDO產(chǎn)業(yè)化合成提供了一種新思路。

[1] 王熙庭，陳曼華. 1,3-丙二醇生產(chǎn)方法及用途[J]. 煤化工，2000（4）：38-40.WANG X T，CHEN M H. The production methods and applications of 1,3-propanediol[J]. Coal Chemical Industry，2000（4）：38-40.

[2] GUO N N，ZHENG Z M，MAI Y L，et al. Consequences ofcpsmutation ofKlebsiella pneumoniaeon 1,3-propanediol fermentation[J]. Applied Microbiology and Biotechnology，2010，86（2）：701-707.

[3] COSTERTON J W，IRVIN R T，CHENG K J. The bacterial glycocalyx in nature and disease[J]. Microbiology，1981，35：299-324.

[4] RAHN A，DRUMMELSMITH J，WHITFIELD C. Conserved organization in thecpsgene clusters for expression ofEscherichia coligroup 1 K antigens：relationship to the colanic acid biosynthesis locus and thecpsgenes fromKlebsiella pneumoniae[J]. Journal of Bacteriology，1999，181（7）：2307-2313.

[5] WHITFIELD C. Biosynthesis and assembly of capsular polysaccharides inEscherichia coli[J]. Biochemistry，2006，75（75）：39-68.

[6] NESPER J，HILL C M，PAIMENT A，et al. Translocation of group 1 capsular polysaccharide inEscherichia coliserotype K30.Structural and functional analysis of the outer membrane lipoprotein Wza[J]. Journal of Biological Chemistry，2003，278（50）：49763-49772.

[7] REGUé M，HITA B，PIQUé N，et al. A gene，uge，is essential forKlebsiella pneumoniaevirulence[J]. Infection and Immunity，2004，72（1）：54-61.

[8] HUANG T W，LAM I，CHANG H Y，et al. Capsule deletionviaaλ-Red knockout system perturbs biofilm formation and fimbriae expression inKlebsiella pneumoniaeMGH 78578[J]. Biomed Central Research Notes，2014，7（1）：1-13.

[9] LEHRER J，VIGEANT K A，TATAR L D，et al. Functional characterization and membrane topology ofEscherichia coliWecA，a sugar-phosphate transferase initiating the biosynthesis of enterobacterial common antigen andO-antigen lipopolysaccharide[J].Journal of Bacteriology，2007，189（7）：2618-2628.

[10] AMER A O，VALVANO M A. Conserved aspartic acids are essential for the enzymic activity of the WecA protein initiating the biosynthesis ofO-specific lipopolysaccharide and enterobacterial common antigen inEscherichia coli[J]. Microbiology，2002，148（2）：571-582.

[11] BRISSE S，PASSET V，HAUGAARD A B，et al.wzigene sequencing，a rapid method for determination of capsular type forKlebsiellastrains[J]. Journal of Clinical Microbiology，2013，51（12）：4073-4078.

[12] GONCALVES M D S，DELATTRE C，BALESTRINO D，et al.Anti-biofilm activity：a function ofKlebsiella pneumoniaecapsular polysaccharide[J]. Plos One，2014，9（6）：99995.

[13] GUO X，F(xiàn)ANG H，ZHUGE B，et al.BudCknockout inKlebsiella pneumoniaefor bioconversion from glycerol to 1,3-propanediol[J].Biotechnology and Applied Biochemistry，2013，60（6）：557-563.

[14] SAHLY H，KEISARI Y，CROUCH E，et al. Recognition of bacterial surface polysaccharides by lectins of the innate immune system and its contribution to defense against infection：the case of pulmonary pathogens[J]. Infection and Immunity，2008，76（4）：1322-1332.

[15] LIN T L，YANG F L，YANG A S，et al. Amino acid substitutions of MagA inKlebsiella pneumoniaeaffect the biosynthesis of the capsular polysaccharide[J]. Plos One，2012，7（10）：46783.

[16] RAMOS P I，PIC?O R C，VESPERO E C，et al.Pyrosequencing-based analysis reveals a novel capsular gene cluster in a KPC-producingKlebsiella pneumoniaeclinical isolate identified in Brazil[J]. Biomed Central Microbiology，2012，12（1）：1-12.[17] JUNG S G，JANG J H，KIM A Y，et al. Removal of pathogenic factors from 2,3-butanediol-producingKlebsiellaspecies by inactivating virulence-relatedwabGgene[J]. Applied Microbiology and Biotechnology，2013，97（5）：1997-2007.

[18] HO J Y，LIN T L，LI C Y，et al. Functions of some capsular polysaccharide biosynthetic genes inKlebsiella pneumoniaeNTUH K-2044[J]. Plos One，2011，6（7）：2779-2799.

[19] BALESTRINO D，GHIGO J M，CHARBONNEL N，et al. The characterization of functions involved in the establishment and maturation ofKlebsiella pneumoniaein vitro，biofilm reveals dual roles for surface exopolysaccharides[J]. Environmental Microbiology，2008，10（3）：685-701.

Reducing the capsular polysaccharide synthesis ofKlebsiella pneumoniaein 1,3-propanediol fermentation by genes knocking-out

LIU Qing1，2，WANG Xiaowan2，ZHUGE Bin1，2，LU Xinyao1，2，ZONG Hong1，2，F(xiàn)ANG Huiying1，2，SONG Jian3
（1Carbohydrate Chemistry and Biotechnology，Ministry of Education，Jiangnan University，Wuxi 214122，Jiangsu，China；2The KeyLaboratory of Industrial Biotechnology，Ministry of Education，Research Centre of Industrial Microbiology，School of Biotechnology，Jiangnan University，Wuxi 214122，Jiangsu，China；3School of Chemistry and Material，Jiangnan University，Wuxi 214122，Jiangsu，China）

1,3-propanediol （1,3-PDO）is an important platform compound and has been widely used in the production of high performance fiber synthesis.Klebsiella pneumoniaeis an excellent 1,3-PDO biosynthetic cell factory. However，the capsular polysaccharide accumulation ofK. pneumoniaeincreased the viscosity of fermentation broth and impacted the efficient transport of substrate and product，resulting in an obstacle in downstream extraction and industrialization of 1,3-PDO. In this study，by analyzing the capsular synthesis pathway ofK. pneumoniae，the key geneswecA（initial glycosyltransferase gene） andwziinvolved in the assembly of capsular polysaccharide were disrupted by Red recombinant system. The effects of genes deletion on capsule content，cell morphology，cellgrowth，broth fluid viscosity，and product synthesis，were studied. The capsular content was reduced by 38.5%，which led to the loss of cells fimbriae synthesis ability and the adhesion，and the titer of 1,3-PDO increased by 23.0%. The study provided a novel prospect on the development ofK.pneumoniaeon the production of 1,3-PDO.

capsular polysaccharide；knocking-out；Klebsiellapneumoniae；1,3-propanediol

Q78

：A

：1000-6613（2017）09-3447-06

10.16085/j.issn.1000-6613.2017-0081

2017-01-13；修改稿日期：2017-02-08。

高等學(xué)校學(xué)科創(chuàng)新引智計(jì)劃（111-2-06）和江蘇省青年自然科學(xué)基金（BK20140134）項(xiàng)目。

劉情（1991—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)榘l(fā)酵工程。E-mail: qingliu19@163.com。聯(lián)系人：諸葛斌，博士，教授。E-mail：bzhuge@ 163.com。