妊娠相關(guān)蛋白A的多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究

張謙 李雪芹 王旭

作者單位：408300 重慶市，重慶市墊江縣人民醫(yī)院心內(nèi)科

妊娠相關(guān)蛋白A的多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究

張謙 李雪芹 王旭

作者單位：408300 重慶市，重慶市墊江縣人民醫(yī)院心內(nèi)科

目的 探討冠心病患者的妊娠相關(guān)蛋白A（PAPP-A）基因多態(tài)性與冠心病之間的關(guān)系。方法以2014年1月至2015年2月到我院就診的冠心病患者共100例作為研究對象，為試驗(yàn)組；選取同期到我院進(jìn)行體檢的健康人共100位作為對照組。首先對收集的受試者血液樣本進(jìn)行DNA提取，然后使用PCR方式進(jìn)行基因擴(kuò)增，PCR的產(chǎn)物則使用ECOR V內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，使用PAPP-A擴(kuò)增酶切產(chǎn)物，使用瓊脂糖（2%）進(jìn)行凝膠電泳以鑒定PAPP-A的基因型，觀察PAPP-A的基因多態(tài)性。結(jié)果 PAPP-A基因型共有3種，分別是AA型、CC型兩種純合子和AC型一種雜合子。AA型酶切后表現(xiàn)為77 bp一個(gè)條帶；CC型酶切后表現(xiàn)為107 bp和77 bp兩個(gè)條帶；AC型酶切后則表現(xiàn)為107 bp、77 bp和30 bp三個(gè)條帶。試驗(yàn)組CC型基因型明顯多于對照組，C型等位基因的頻率高于對照組（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 在冠心病患者體內(nèi)PAPP-A的基因型發(fā)生了明顯的變化，主要表現(xiàn)為CC型的基因型增多，C等位基因的頻率提高，因此PAPP-A可能與冠心病的發(fā)病具有一定的關(guān)系，為臨床診斷和治療提供了一定的依據(jù)。

冠狀動脈疾病； 妊娠相關(guān)蛋白A； 基因多態(tài)性

冠心?。╟oronary artery heart disease，CHD）是臨床上比較常見的一種心血管疾病[1]。近幾年研究表明遺傳因素在冠心病的發(fā)病中發(fā)揮著十分重要的作用[2]。妊娠相關(guān)蛋白 A（pregnancy associated plasma protein A，PAPP-A）是一種對鋅離子有依賴作用的金屬蛋白酶[3]。PAPP-A與動脈粥樣硬化和血管成形術(shù)后再狹窄具有一定的關(guān)系[4]，也可能在冠心病的發(fā)病中發(fā)揮著一定的作用[5]。但是PAPPA的基因表現(xiàn)為一定的多態(tài)性[6]，本研究則主要對PAPP-A的多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2014年1月至2015年2月到我院就診的冠心病患者100例作為研究對象，為試驗(yàn)組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡均在18歲及18歲以上；②符合冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)主治醫(yī)生確診；③經(jīng)冠狀動脈造影后發(fā)現(xiàn)有至少1支血管的直徑減少達(dá)到了50%；④所納入的患者對本次研究知情并自愿參與；⑤患者無閱讀和理解障礙，無精神意識障礙，能夠配合治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有肝臟、腎臟以及身體其他方面嚴(yán)重疾病的患者；②臨床資料收集不全或不能完全配合研究的患者。選取同期到我院進(jìn)行健康體檢的健康人100位作為對照組。

1.2 研究方法

1.2.1 血液標(biāo)本采集 所有研究對象均在空腹的情況下采集靜脈血，將血液樣本在室溫30 min內(nèi)、室溫或4℃條件下放置3、6、12 h；3000 r/min離心10 min，分離后備用，用于基因多態(tài)性的檢驗(yàn)。

1.2.2 基因多態(tài)性檢測 首先對收集的血液樣本進(jìn)行DNA的提取，然后使用PCR方式進(jìn)行基因擴(kuò)增，PCR的產(chǎn)物則使用ECOR V內(nèi)切酶進(jìn)行酶切使用PAPP-A擴(kuò)增酶切產(chǎn)物使用瓊脂糖（2%）進(jìn)行凝膠電泳以鑒定PAPP-A的基因型，觀察PAPP-A的基因多態(tài)性[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件對本次研究的結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)和頻率的方式表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用±s表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象一般資料比較 兩組在性別比、年齡等一般資料方面比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），可以進(jìn)行相互比較，見表1。

表1 兩組研究對象一般資料比較（±s）

表1 兩組研究對象一般資料比較（±s）

組別 例數(shù) 男/女 年齡（歲） BMI（kg/m2）對照組 100 55/45 46.19±4.91 24.81±3.09試驗(yàn)組 100 56/44 45.34±4.39 24.89±4.21統(tǒng)計(jì)值 0.782 0.911 0.124 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

2.2 兩組研究對象PAPP-A基因多態(tài)性結(jié)果 試驗(yàn)組CC型基因型明顯多于對照組，C型等位基因的頻率高于對照組（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 兩組研究對象PAPP-A基因的多態(tài)性結(jié)果比較（例）

2.3 PAPP-A基因型條帶分析 PAPP-A基因型共有3種，分別是AA型、CC型兩種純合子和AC型一種雜合子。AA型酶切后表現(xiàn)為77 bp一個(gè)條帶，CC型酶切后則表現(xiàn)為107 bp和77 bp兩個(gè)條帶，AC型酶切后則表現(xiàn)為107 bp、77 bp和30 bp三個(gè)條帶。見圖1。

圖1 PAPP-A基因型條帶

3 討論

PAPP-A基因的位置在人類的染色體9q33，在Sushi結(jié)構(gòu)域中，這個(gè)區(qū)域主要是長度比較短的同源重復(fù)序列，屬于補(bǔ)體調(diào)控蛋白的模塊，有比較多的補(bǔ)體和黏附蛋白的決定簇存在于這個(gè)區(qū)域中[8]，各種蛋白之間以及蛋白與相應(yīng)配體之間的相互作用都可以在這個(gè)區(qū)域中進(jìn)行[9]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，在不穩(wěn)定斑塊的細(xì)胞外基質(zhì)中能夠檢測出大量的PAPP-A[10]，但是穩(wěn)定斑塊中PAPP-A的含量則比較少。也有學(xué)者對小鼠進(jìn)行了相關(guān)的研究，發(fā)現(xiàn)PAPP-A在動脈粥樣硬化小鼠模型中會發(fā)生比較明顯的變化[11]，提出了將PAPP-A作為動脈粥樣硬化新的治療方向。隨著對基因研究的不斷深入，學(xué)者們逐漸發(fā)現(xiàn)PAPP-A具有一定的基因多態(tài)性[12]，而不同的基因型所表達(dá)出來的PAPP-A可能在人體中發(fā)揮著不同的作用，也可能對動脈粥樣硬化和冠心病的發(fā)生和發(fā)展產(chǎn)生一定程度的影響[13]。本研究對其中的相關(guān)性進(jìn)行了初步的探討。

從本研究結(jié)果中可以看出，PAPP-A基因型共有3種，分別是AA型、CC型兩種純合子和AC型一種雜合子。AA型酶切后表現(xiàn)為77 bp一個(gè)條帶，CC型酶切后則表現(xiàn)為107 bp和77 bp兩個(gè)條帶，AC型酶切后則表現(xiàn)為107 bp、77 bp和30 bp三個(gè)條帶。而在冠心病患者的體內(nèi)，CC型基因型所占的比例較高，C等位基因出現(xiàn)的頻率較高，由此我們可以推斷，CC型基因的增高可能對冠心病的發(fā)生發(fā)展起到了一定的促進(jìn)作用，CC型基因型比例較高的患者可能比較容易發(fā)生冠心病，也充分說明遺傳因素對冠心病的發(fā)生和發(fā)展可能產(chǎn)生一定的影響。但是也有學(xué)者[14]表示，單基因就可以影響到遺傳因素對疾病的影響的可能性不大，可能存在基因多重作用的結(jié)果，而本研究只對PAPP-A基因型的多態(tài)性進(jìn)行了研究，具有一定的片面性，期待以后進(jìn)行多基因的更加深入的研究。本研究具有十分重要的臨床意義[15-17]。首先對PAPP-A基因型的多態(tài)性進(jìn)行檢測可以提前對冠心病等疾病進(jìn)行預(yù)防[18]，提醒易感人群在日常生活中注意飲食和生活習(xí)慣，降低冠心病的發(fā)生概率[19]；其次，PAPP-A基因的多態(tài)性可能會成為冠心病治療的新的研究方向，而為臨床的靶向治療方式提供一定的理論和試驗(yàn)依據(jù)，具有深遠(yuǎn)的臨床意義[20]。

綜上所述，冠心病患者體內(nèi)PAPP-A的基因型發(fā)生了明顯的變化，主要表現(xiàn)為CC型的基因型增多，C等位基因的頻率提高，因此PAPP-A可能與冠心病的發(fā)病具有一定的關(guān)系，為臨床診斷和治療提供了一定的依據(jù)。

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Study on the correlation between PAPP-A polymorphism and coronary heart disease

ZHANG Qian，LI Xue-qin，WANG Xu.Department of Cardiology，Dianjiang People′s Hospital，Chongqing 408300，China

LI Xue-qin，E-mail：366931697@qq.com

Objective To investigate the polymorphism of PAPP-A gene in patients with coronary heart disease,and to explore the relationship between coronary heart disease and coronary heart disease.Methods A total of 100 patients with coronary heart disease in our hospital from February to January 2014 in our hospital were selected as the research subjects of this study，the experimental group was-2015.Select the same to our hospital for health examination of healthy people a total of 100 cases as the control group，first to collect blood samples for DNA extraction，and then use PCR gene amplification，the PCR products using ECOR V enzyme digestion and use PAPP-A amplification enzyme digestion products using agarose（2%）gel electrophoresis to identify PAPP-A gene type was observed PAPP-A gene polymorphism.Results PAPP-A gene type of a total of three，respectively was AA and CC homozygotes and AC type a heterozygous and AA type enzyme digestion performance 77 bp 1 a belt，CC type enzyme digestion is performance for a 107 bp，77 bp two bands，AC enzyme digestion is a 107 bp and 77 bp and 30 bp with three.The experimental group CC genotype was significantly higher than the control group，the experimental group，the frequency of C allele was higher than the control group（P＜0.05），the difference was statistically significant.Conclusion PAPP-A in patients with coronary heart disease（CHD）genotypes in occurred obvious change，mainly as an increase in the CC genotype，increase the frequency of C allele，so PAPP-A may has some relation with the incidence of CHD，provides a certain basis for clinical diagnosis and treatment.

Coronary heart disease； Pregnancy associated white A； Gene polymorphism

李雪芹，E-mail：366931697@qq.com

10．3969/j．issn．1672－5301．2017．05．018

R541.4

A

1672-5301（2017）05-0450-04

2016-08-06）