冠狀動脈粥樣硬化患者血小板衍化生長因子血清水平表達(dá)和臨床監(jiān)控意義

趙立巖 欒麗平 邵峰

臨床研究

冠狀動脈粥樣硬化患者血小板衍化生長因子血清水平表達(dá)和臨床監(jiān)控意義

趙立巖 欒麗平 邵峰

目的 探討冠狀動脈粥樣硬化患者血小板衍化生長因子（PDGF）血清水平表達(dá)和臨床監(jiān)控意義。方法 選擇進(jìn)行冠脈造影及血管內(nèi)超聲（IVUS）檢查的190例患者作為研究對象，按照冠脈造影及IVUS檢查結(jié)果分為穩(wěn)定斑塊組（56例）、易損斑塊組（44例）、混合斑塊組（50例）及冠脈造影未見異常組（40例）。使用RT-PCR法檢測血清PDGF-mRNA表達(dá)水平，同時對患者總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、載脂蛋白 A（apoaA）、載脂蛋白B（apoaB）進(jìn)行檢測，并根據(jù)每一患者動脈造影檢查結(jié)果，使用Gensini積分系統(tǒng)對每一支冠脈血管進(jìn)行定量評價，分析PDGF-mRNA表達(dá)水平與上述因素的相關(guān)性。結(jié)果 ①各組患者PDGF-mRNA表達(dá)水平存在顯著性差異，且易損斑塊組水平＞混合斑塊組＞穩(wěn)定斑塊組＞未見異常組（P均＜0.05）。②TC、TG、UA水平比較，易損斑塊組最高，其他依次為混合斑塊組、穩(wěn)定斑塊組、未見異常組，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。出現(xiàn)血管狹窄的三組患者，易損斑塊組Gensini得分最高，混合斑塊組次之，穩(wěn)定斑塊組最低（P＜0.05）。③Pearson雙變量相關(guān)分析顯示，PDGF-mRNA表達(dá)水平與 Gensini得分（r=0.34，P=0.003）、BMI（r=0.15，P=0.032）、TG（r=0.21，P=0.011）、TC（r=0.17，P=0.015）呈正相關(guān)，與 HDL-C 呈負(fù)相關(guān)（r=-0.25，P=0.013），與年齡（r=0.05，P＞0.05）、性別（r=0.09，P＞0.05）、BUN（r=0.07，P＞0.05）、UA（r=0.03，P＞0.05）、apoaA（r=0.06，P＞0.05）及 apoaB（r=0.10，P＞0.05）不相關(guān)。④Logistic回歸分析結(jié)果顯示，Gensini得分（β=0.31）、BMI（β=0.23）、TG（β=0.13）、TC（β=0.10）越高，PDGF-mRNA 值越大，而 HDL-C 表達(dá)水平（β=-0.17）對 PDGF-mRNA形成負(fù)向調(diào)節(jié)（P＜0.05）。結(jié)論 血小板衍化生長因子是冠狀動脈粥樣硬化的獨立影響因子，其表達(dá)水平與冠脈病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)。密切監(jiān)測患者PDGF-mRNA表達(dá)水平，可實現(xiàn)對患者冠脈病變的客觀評估。

冠狀動脈粥樣硬化； 血小板衍化生長因子； PDGF-mRNA； Gensini積分； Pearson相關(guān)； Logistics回歸分析

冠狀動脈粥樣硬化（coronary atherosclerotic）是冠狀動脈發(fā)生粥樣硬化。其病理基礎(chǔ)是由于受多種因素的影響，類脂質(zhì)不斷在受累冠狀動脈內(nèi)膜沉著并伴有復(fù)合糖類的積聚，導(dǎo)致纖維組織增生和鈣沉著，并引起受損動脈中層發(fā)生病變，形成粥樣硬化斑塊并使冠脈管腔不斷狹窄[1-3]。作為常見心血管疾病，冠狀動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生破裂以及血栓形成是導(dǎo)致心絞痛、心肌梗死、冠狀動脈性猝死等各種急性心血管事件的病理基礎(chǔ)。如何客觀準(zhǔn)確地判斷動脈粥樣硬化病理生理發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，成為有效預(yù)防和控制冠脈粥樣硬化的關(guān)注重點和熱點之一[4,5]。研究發(fā)現(xiàn)，作為特異性血管壁細(xì)胞分裂素之一的血小板衍化生長因子（platelet derived growth factors，PDGF）是平滑肌細(xì)胞的趨化因子，能促進(jìn)冠脈血管平滑肌細(xì)胞不斷積聚，并在受體的共同作用下促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)聚集、細(xì)胞外基質(zhì)沉積的發(fā)生，是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展以及血管發(fā)生慢性炎癥重構(gòu)的重要生長因子，近年來已成為醫(yī)學(xué)研究的一個重點[6]。本研究通過對存在不同穩(wěn)定狀態(tài)斑塊的冠狀動脈粥樣硬化患者的PDGF-mRNA水平進(jìn)行測定，探討其表達(dá)水平與冠脈病變程度以及冠脈造影Gensini積分、體重指數(shù)（BMI）、血脂、血糖代謝等容易導(dǎo)致冠脈粥樣硬化的傳統(tǒng)危險因素的相關(guān)性，以期對冠狀動脈粥樣硬化臨床診療提供客觀支持。現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月至2015年3月在我院進(jìn)行冠脈造影及血管內(nèi)超聲（IVUS）檢查的190例患者作為研究對象。按照冠脈造影及IVUS檢查結(jié)果[7]將研究對象分為：①穩(wěn)定斑塊組56例，其中男性34例、女性12例，平均年齡（61.55±8.90）歲；②易損斑塊組44例，其中男性28例、女性16例，平均年齡（62.45±11.22）歲；③混合斑塊組50例，其中男性32例、女性18例，平均年齡（62.80±10.80）歲；④冠脈造影未見異常組40例，其中男性25例、女性15例，平均年齡（60.90±12.45）歲。四組患者年齡、性別、煙酒史、BMI指數(shù)、高血壓、糖尿病病史構(gòu)成等比較，未見統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見表1。排除腫瘤、肝腎功能嚴(yán)重異常、感染性疾病、血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病患者。入選患者均簽署知情同意書。

表1 四組患者一般資料比較（±s）

表1 四組患者一般資料比較（±s）

飲酒（是/否）穩(wěn)定斑塊組 56 34/12 61.55±8.90 29.60±3.12 31/25 36/20 34/22 27/29 32/24易損斑塊組 44 28/16 62.45±11.22 30.15±2.77 27/17 24/20 26/18 22/22 28/16混合斑塊組 50 32/18 62.80±10.80 29.32±1.70 34/16 28/22 27/23 26/24 30/20未見異常組 40 25/15 60.90±12.45 28.80.±3.45 24/16 23/17 22/18 21/19 25/15組別 例數(shù) 男/女 年齡（歲）BMI（kg/m2）高血壓（是/否）糖尿?。ㄊ?否）高血脂（是/否）吸煙（是/否）

1.2 方法

1.2.1 PDGF-mRNA檢測[8]所有患者入院后均抽取靜脈血3 ml，經(jīng)3000 r/min離心15 min后，取上清液，放入1.5 ml Eppendorf管中存儲于-80℃冰箱備用。使用RT-PCR法檢測血清PDGF-mRNA表達(dá)水平。在94℃下變性1 min后，在60℃下退火2 min，在72℃下延伸3 min，共進(jìn)行35個循環(huán)；后經(jīng)電泳、照相及圖像處理系統(tǒng)計算機掃描測定平均光密度，后者與PDGF-mRNA水平成正比。使用Oligo 6.0軟件設(shè)計引物，由中國奧科生物公司合成。引物 1序列為：5′-TAC TCC TCT TAA GCT GCG TATT CGG-3′；引物 2 序列為：3′-ACA CCA GCA AGT TGGCATT-GGTGCG-5′，PCR 擴增片段長度320 bp。

1.2.2 主要試劑 采用北京天根生化科技有限公司生產(chǎn)的組織DNA提取試劑盒及PCR檢測相關(guān)試劑，使用美國NEB公司生產(chǎn)的HinfⅠ、BsmAⅠ限制性內(nèi)切酶。

1.3 相關(guān)實驗室檢測 所有患者入院次日清晨空腹抽取靜脈血5 ml，使用全自動生化分析儀測定總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、載脂蛋白 A（apoaA）、載脂蛋白 B（apoaB）。

1.4 冠脈血管Gensini積分評價[9]根據(jù)每一位患者動脈造影檢查結(jié)果，使用Gensini積分系統(tǒng)對每一支冠脈血管進(jìn)行定量評價。評價由兩部分組成：①基本評分根據(jù)冠脈狹窄程度進(jìn)行評價，冠脈狹窄度≤25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為4分，76%～90%為 8分，91%～99%為 16分，100%狹窄得分為32分。②評分系數(shù)根據(jù)冠狀動脈病變部位予以確定，左冠狀動脈主干發(fā)生病變時系數(shù)為5.0，前降支近段病變系數(shù)為2.5，中段病變系數(shù)為1.5，心尖支病變系數(shù)為1.0；第一對角支發(fā)生病變時系數(shù)為1.0，第二對角支病變系數(shù)為0.5；回旋支近段發(fā)生病變系數(shù)為2.5，病變發(fā)生于鈍緣支時系數(shù)為1.0，遠(yuǎn)端發(fā)生病變系數(shù)為1.0；后降支發(fā)生病變時系數(shù)為1.0。每一冠脈血管Gensisi積分=血管狹窄程度所得基本積分×病變部位系數(shù)?；颊吖诿}血管總Gensini積分=各病變血管Gensini積分總和。冠脈造影均由有經(jīng)驗的2名放射科醫(yī)師進(jìn)行檢查，在不掌握患者臨床信息和相關(guān)實驗室檢測結(jié)果的前提下對動脈造影檢查結(jié)果進(jìn)行分析。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 19.0對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計量資料采用±s表示，多個樣本均數(shù)比較進(jìn)行單因素方差分析；計數(shù)資料采用χ2檢驗，使用Pearson相關(guān)分析對兩變量間相關(guān)性予以評價。PDGF-mRNA表達(dá)水平與各心血管危險因素指標(biāo)及Gensini積分的因果關(guān)系，采用多元回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者PDGF-mRNA表達(dá)水平比較 經(jīng)檢測結(jié)果比較，各組患者PDGF-mRNA表達(dá)水平存在顯著性差異，且易損斑塊組水平＞混合斑塊組＞穩(wěn)定斑塊組＞未見異常組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），見表 2。

表2 各組患者PDGF-mRNA表達(dá)水平比較（±s）

表2 各組患者PDGF-mRNA表達(dá)水平比較（±s）

注：各組經(jīng)LSD兩兩比較，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

組別 例數(shù) PDGF-mRNA（pg/ml）穩(wěn)定斑塊組 56 11520.78±4312.56易損斑塊組 44 14782.90±3212.80混合斑塊組 50 13532.76±2317.78未見異常組 40 10026.45±22390.12 F值 34.56 P值 ＜0.05

2.2 各組相關(guān)檢測結(jié)果比較 四組患者LDL-C、BUN、apoaA、apoaB檢測結(jié)果比較未見統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；TC、TG、UA 水平比較，易損斑塊組最高，其他依次為混合斑塊組、穩(wěn)定斑塊組、未見異常組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。出現(xiàn)血管狹窄的三組患者，易損斑塊組Gensini得分最高，混合斑塊組次之，穩(wěn)定斑塊組最低（P＜0.05）。見表3。

2.3 PDGF-mRNA與各危險因素間的相關(guān)性分析

Pearson雙變量相關(guān)分析顯示，PDGF-mRNA表達(dá)水平與 Gensini得分（r=0.34，P=0.003）、BMI（r=0.15，P=0.032）、TG（r=0.21，P=0.011）、TC（r=0.17，P=0.015）呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)（r=-0.25，P=0.013）；與年齡（r=0.05，P＞0.05）、性別（r=0.09，P＞0.05）、BUN （r=0.07，P＞0.05）、UA （r=0.03，P＞0.05）、apoaA（r=0.06，P＞0.05）及 apoaB（r=0.10，P＞0.05）不相關(guān)。

2.4 PDGF-mRNA與各心血管危險因素間的多元回歸分析 以PDGF-mRNA為應(yīng)變量，2.3中與之相關(guān)的各心血管危險因素為自變量，使用逐步前進(jìn)法進(jìn)行篩選，Logisitic回歸分析結(jié)果顯示，Gensini得分（β=0.31）、BMI（β=0.23）、TG（β=0.13）、TC（β=0.10）越高，PDGF-mRNA值越大，而HDL-C表達(dá)水平（β=-0.17）對PDGF-mRNA形成負(fù)向調(diào)節(jié)（P＜0.05），見表 4。

表3 各組相關(guān)檢測結(jié)果比較（±s）

表3 各組相關(guān)檢測結(jié)果比較（±s）

注：TC：總膽固醇；TG：甘油三酯；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；UA：血尿酸；BUN：尿素氮；apoaA：載脂蛋白A；apoaB：載脂蛋白B。*各組LSD兩兩比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

Gensini得分*穩(wěn)定斑塊組 56 4.02±0.56 1.78±0.54 1.32±0.32 2.11±0.65 5.56±1.21 311.76±78.75 1.15±0.23 0.87±0.21 21.80±5.35易損斑塊組 44 4.97±1.01 2.61±1.05 1.03±0.55 2.09±0.45 5.61±1.33 345.12±56.89 1.21±0.45 0.91±0.32 51.50±6.60混合斑塊組 50 4.54±0.78 2.11±0.63 1.21±0.27 2.17±0.77 5.49±1.09 321.11±87.13 1.09±0.32 0.89±0.21 39.65±10.30未見異常組 40 3.43±0.65 1.54±0.43 1.56±0.97 2.14±0.43 5.43±1.25 301.23±89.09 1.26±0.11 0.82±0.24 0 F值 6.87 3.11 3.92 0.78 1.01 12.12 0.65 0.78 14.87 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05組別 例數(shù) TC*（mmol/L）TG*（mmol/L）HDL-C*（mmol/L）LDL-C（mmol/L）BUN（μmol/L）UA*（μmol/L）apoaA（g/L）apoaB（g/L）

表4 PDGF-mRNA與各心血管危險因素間的多元回歸分析

3 討論

冠狀動脈粥樣硬化是最常見的狹窄性冠狀動脈疾病，特別是心肌壁外冠狀動脈支更容易發(fā)生[10]。近年來，我國人群心血管事件好發(fā)、頻繁，對群眾健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅[11]。研究已證實導(dǎo)致急性冠脈綜合征、急性心梗等主要心血管事件發(fā)生的病理基礎(chǔ)就是冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂或者侵襲，繼而出現(xiàn)完全或者不完全的閉塞性血栓[12]。臨床實踐發(fā)現(xiàn)，患者只有出現(xiàn)相應(yīng)癥狀后經(jīng)過冠脈造影才會確認(rèn)冠狀動脈粥樣硬化的存在以及冠脈受損情況，且冠脈造影屬于有創(chuàng)操作，無癥狀患者接受度受到影響[13]。

血小板衍化生長因子（PDGF）作為血管內(nèi)皮生長因子家族成員，在健康人群中表達(dá)水平極低，最早是在人們尋找血清中促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分化物質(zhì)過程中發(fā)現(xiàn)，并首選在血小板α顆粒中純化，其相對分子質(zhì)量為28～35 KD，是體內(nèi)較強的促細(xì)胞增長調(diào)節(jié)因子，可在血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生和釋放，可參與冠脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展[14]。上述研究發(fā)現(xiàn)，在出現(xiàn)冠脈粥樣硬化斑塊的患者PDGF表達(dá)水平均明顯高于未出現(xiàn)斑塊組患者，提示發(fā)生動脈粥樣硬化特征性纖維增殖性炎癥反應(yīng)時，體內(nèi)將產(chǎn)生大量的PDGF。這主要在于機體發(fā)生動脈粥樣硬化時，由于血管內(nèi)皮細(xì)胞受損及功能異常，導(dǎo)致受損內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、單核巨噬細(xì)胞通過自分泌與旁分泌方式釋放大量PDGF[15]。同時，易損斑塊組PDGF水平最高，隨后是混合斑塊組、穩(wěn)定斑塊組，未見異常組表達(dá)水平最低；而易損斑塊組TC、TG、UA表達(dá)水平最高，其他依次為混合斑塊組、穩(wěn)定斑塊組、未見異常組。這可能與患者血管損傷程度大小不同有關(guān)[16]。與國內(nèi)相關(guān)報道[17,18]類似，通過Pearson雙變量相關(guān)分析、Logisitic回歸分析發(fā)現(xiàn)，PDGF-mRNA表達(dá)水平與Gensini得分呈正相關(guān)，提示PDGF-mRNA是Gensini積分的獨立影響因子，可用于預(yù)測冠脈病變嚴(yán)重程度。同時，患者BMI、TG、TC表達(dá)水平越高，患者PDGF-mRNA值也隨之上升，這可能與體內(nèi)脂肪的增加進(jìn)一步增加了腫瘤壞死因子、IL-6等炎性因子的分泌，促進(jìn)了PDGF-mRNA的表達(dá)有關(guān)[19]。而HDL-C水平與PDGF-mRNA水平呈負(fù)相關(guān)，提示HDL-C作為冠心病保護(hù)因子減緩了疾病的發(fā)生、發(fā)展[20]。另外本研究發(fā)現(xiàn)，所有受試對象間LDL-C表達(dá)水平無明顯差異，與國內(nèi)慈維蘋等[21]、任潔等[22]的研究顯示冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者LDL-C明顯高于健康對照組，是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病危險因子的結(jié)果不同，這可能與本研究研究例數(shù)相對較小、研究對象中可能存在部分患者進(jìn)入研究隊列前服用過降脂藥物，以及人群特殊差異有關(guān)。本研究將繼續(xù)收集相關(guān)病例，進(jìn)一步觀察分析，以期尋找造成研究結(jié)果差異的真正原因。

綜上所述，血小板衍化生長因子（PDGF）是冠狀動脈粥樣硬化的獨立影響因子，其表達(dá)水平與冠脈病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)。通過密切監(jiān)測患者PDGF-mRNA表達(dá)水平，可實現(xiàn)對患者冠脈病變的客觀評估。

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Analysis on the expression of platelet derived growth factor（PDGF）in patients with coronary atherosclerosis and its clinical monitoring significance

ZHAO Li-yan＊，LUAN Li-ping，SHAO Feng.＊Internal Medicine，Traditional Chinese Medical Hospital of Dezhou City，Dezhou 253000，China

SHAO Feng，E-mail：9498318@qq.com

Objective To explore the expression of platelet derived growth factor（PDGF）in patients with coronary atherosclerosis and its clinical monitoring significance.Methods190 patients with coronary angiography and IVUS examination were selected as study subjects，they were divided into stable plaque group（56 cases），vulnerable plaque group（44 cases），mixed plaque group（50 cases） and coronary angiography no abnormal group（40 cases）according to coronary angiography and IVUS examination results.The expression level of serum PDGF-mRNA was detected by RT-PCR method，the total cholesterol（TC），triglyceride（TG），high density lipoprotein（HDL-C），low density lipoprotein（LDL-C），blood uric acid（UA），blood urea nitrogen（BUN），carrying lipoprotein A（apoaA），set the apolipoprotein B（apoaB）were detected at the same time.The Gensini integral system was used for quantitative evaluation of each coronary artery according to the results of each patient′s arterial angiogra－phy.The correlation between PDGF-mRNA expression level and the above factors was analyzed.Results⑴There were significant differences in the level of PDGF-mRNA expression in each group，and the value of the Vulnerable plaque group ＞ the mixed plaque group ＞ the stable plaque group ＞ the no abnormal group（P＜0.05）.⑵The TC，TG，UA levels were compared among the groups，in which the values of vulnerable plaque group was the highest，the other was mixed plaque group，stable plaque group，no abnormal group，the difference was statistically significant.The Gensini score of the vulnerable plaque group was highest，and followed by the mixed plaque group，the value of stable plaque group was lowest（P＜0.05）.⑶Pearson bivariate correlation analysis showed that：PDGF-mRNA expression levels were positively correlated with Gensini score（r=0.34，P=0.003），BMI（r=0.15，P=0.032），TG （r=0.21，P=0.011），TC（r=0.17，P=0.015）；PDGF-mRNA expression levels were negatively correlated with HDL-C（r=-0.25，P=0.013），and were not related with age（r=0.05，P＞0.05），gender（r=0.09，P＞0.05），BUN（r=0.07，P＞0.05），UA（r=0.03，P＞0.05），apoaA（r=0.06，P＞0.05）and apoaB（r=0.10，P＞0.05）.⑷Logistic regression analysis showed that the higher of Gensini score（β=0.31），BMI（β=0.23），TG（β=0.13），TC（β=0.10），the greater of PDGF-mRNA value.The expression level of HDL-C （β=-0.17）was negatively correlated with the level of PDGF-mRNA.ConclusionPlatelet-derived growth factor（PDGF）was the independent risk factor of coronary atherosclerosis，whose expression level was closely related to the severity of coronary artery disease.Close monitoring of patients with PDGF-mRNA expression levels can objectively assess the extent of coronary lesions.

Coronary Atherosclerotic； Platelet-derived growth factor； PDGF-mRNA； Gensini score； Pearson correlation； Logistics regression analysis

253000 山東省德州市，德州市中醫(yī)院內(nèi)一科（趙立巖、邵峰），腦病科（欒麗平）

邵峰，E-mail：9498318@qq.com

10.3969/j.issn.1672－5301.2017.06.012

R541.4

A

1672-5301（2017）06-0523-05

2016-09-12）