響應(yīng)面法優(yōu)化纖維素酶輔助提取淫羊藿多糖工藝

顧歡歡，褚秀玲，蘇建青

(聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東聊城 252059 )

響應(yīng)面法優(yōu)化纖維素酶輔助提取淫羊藿多糖工藝

顧歡歡，褚秀玲*，蘇建青

(聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東聊城 252059 )

為優(yōu)化淫羊藿多糖的提取工藝，采用纖維素酶輔助熱水浸提法從淫羊藿中提取淫羊藿多糖，在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，選擇酶濃度、酶提溫度、酶提時(shí)間為自變量，采用三因素三水平的Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)，優(yōu)化淫羊藿多糖的提取工藝。試驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿多糖酶輔助提取的最佳工藝參數(shù)為：酶濃度110 U/μL，酶提溫度60 ℃，酶提時(shí)間100 min，且酶提溫度對(duì)多糖提取率的影響最大。在最佳優(yōu)化條件下淫羊藿多糖提取率為10.06%，接近模型的最大預(yù)測(cè)值(10.199%)。試驗(yàn)為淫羊藿多糖的臨床開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供了依據(jù)。

淫羊藿多糖；酶輔助法；響應(yīng)面法

淫羊藿又名仙靈脾，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是小檗科(Berberidacea)淫羊藿屬(Epimedium)多年生草本植物?！侗静菥V目》記載其莖、葉入藥，辛溫?zé)o毒，有堅(jiān)筋骨、益精氣、補(bǔ)腰膝和強(qiáng)心力等作用，是我國(guó)傳統(tǒng)的補(bǔ)益類中藥[1]。淫羊藿中主要含有黃酮、木質(zhì)素、生物堿及多糖等多種生物活性物質(zhì)，其中淫羊藿多糖是淫羊藿總提取物中較重要的活性成分[2]。根據(jù)藥理學(xué)研究證明：多糖具有抗腫瘤[3]、調(diào)節(jié)免疫[4-5]、抗氧化[6]、抗病毒[7]、延緩衰老[8]等多種生理活性。淫羊藿多糖在淫羊藿中含量豐富，但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)淫羊藿多糖的研究報(bào)道較少。而傳統(tǒng)的提取多糖的方法時(shí)間長(zhǎng)、效率低、溫度高，容易造成多糖的降解及生物活性的降低[9]。因此，建立和優(yōu)化多糖的提取工藝具有重要的意義。本文采用酶輔助法提取淫羊藿多糖，利用響應(yīng)面法優(yōu)化其提取工藝參數(shù)，旨在為進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)淫羊藿多糖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

1.1.1 儀器 722可見(jiàn)分光光度計(jì)為上海欣茂儀器有限公司產(chǎn)品；FW-200高速萬(wàn)能粉碎機(jī)為南京九州干燥設(shè)備廠產(chǎn)品；HH-8恒溫水浴鍋為金壇市新航儀器廠產(chǎn)品。

1.1.2 材料 淫羊藿飲片(批號(hào)：20160302)，購(gòu)自聊城利民大藥店。淫羊藿經(jīng)50 ℃烘干12 h后，高速粉碎，過(guò)60目篩備用。葡萄糖(分析純)、濃硫酸(分析純)和苯酚(分析純)均為萊陽(yáng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠產(chǎn)品；纖維素酶(C109262)購(gòu)自阿拉丁。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備 精密稱取烘干的分析純葡萄糖0.2 g，置于100 mL容量瓶中，加重蒸水定容，搖勻，即得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(2 mg/mL)。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備參考文獻(xiàn)[10]，略有改動(dòng)：精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL分別置于100 mL容量瓶中，加重蒸水定容，搖勻，即得濃度分別為20、40、60、80、100、120、140、160 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。各取1 mL于干燥潔凈試管中，加入5%的苯酚溶液1 mL，迅速加入濃硫酸5 mL，振蕩混勻，冷水浴10 min后，在490 nm處測(cè)定其吸光度。以葡萄糖的濃度(x)為橫坐標(biāo)，吸光度(y)為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

1.2.3 酶溶液制備 精密稱取纖維素酶5.0 g，置于燒杯中，加純凈水溶解后，將其轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，定容，搖勻，即得1000 U/mL的纖維素酶溶液。

1.2.4 酶法提取 酶法提取參考文獻(xiàn)[11]，略有改進(jìn)，具體方法如下：精確稱取淫羊藿粉末1.00 g，加入25 mL純凈水，調(diào)節(jié)pH=5，加入適量的纖維素酶，置于一定溫度條件下進(jìn)行淫羊藿多糖的提取，提取一定時(shí)間后沸水浴滅活5 min，冷卻后加入25 mL純凈水，90 ℃恒溫水浴2 h，冷卻后過(guò)濾，最后定容于100 mL容量瓶中，用于總多糖含量測(cè)定。

1.2.5 多糖的含量測(cè)定 多糖含量測(cè)定的方法為苯酚-硫酸法[12]。樣品溶液10倍稀釋后，取1 mL于10 mL試管中，按1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線下的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.6 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇酶濃度、酶提溫度、酶提時(shí)間這3個(gè)對(duì)淫羊藿總多糖提取工藝有影響的參數(shù)進(jìn)行單因素試驗(yàn)。具體條件見(jiàn)表1。

表1 單因素設(shè)計(jì)Tab 1 The single factors design condition

1.2.7 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)單因素試驗(yàn)選擇的響應(yīng)面試驗(yàn)范圍，利用Design-Expert10.0.4軟件，以酶濃度(X1，U/μL)、酶提溫度(X2，℃)、酶提時(shí)間(X3，min)作為變量，以-1、0、1代表變量水平，進(jìn)行Box-Behnken設(shè)計(jì)三因素三水平實(shí)驗(yàn)方案，見(jiàn)表2。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Design Expert軟件進(jìn)行回歸分析，優(yōu)化出各因素對(duì)提取得率影響的回歸方程，分析各個(gè)因素對(duì)多糖提取率的影響，并做出響應(yīng)面和等高圖。

表2 淫羊藿總多糖提取因素與水平Tab 2 Factors and level of total polysaccharides extraction from Epimedium

2 結(jié) 果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。以吸光度x(OD)為橫坐標(biāo)，葡萄糖濃度y為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，葡萄糖葡萄糖線性回歸方程為y=115.04x-13.953，R2=0.9989，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為20～160 ug/mL范圍時(shí)，線性關(guān)系良好。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 1 Standard curve of glucose

2.2 單因素對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響

2.2.1 酶濃度對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響 酶濃度對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響結(jié)果見(jiàn)圖2?？梢钥闯?，隨著纖維素酶濃度的增加淫羊藿多糖的提取率也逐漸增大，110 U/μL時(shí)提取率最高，但90 U/μL到110 U/μL提取率增幅不大，考慮到經(jīng)濟(jì)因素選取最優(yōu)酶濃度為90 U/μL為宜。

2.2.2 酶提溫度對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響 酶提溫度對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響結(jié)果見(jiàn)圖3。可以看出，當(dāng)溫度在30～50 ℃之間時(shí)，淫羊藿總多糖提取率隨溫度的升高而呈上升趨勢(shì)，當(dāng)溫度超過(guò)50 ℃時(shí)，總多糖提取率隨溫度的升高而逐漸降低。因此，酶提溫度選擇50 ℃為宜。

圖2 酶濃度對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響Fig 2 Effect of enzyme concentration on extraction rate of total polysaccharides from Epimedium

圖3 酶提溫度對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響Fig 3 Effect of extraction temperature on extraction rate of total polysaccharides from Epimedium

2.2.3 酶提時(shí)間對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響 酶提時(shí)間對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響結(jié)果見(jiàn)圖4?？梢钥闯?，酶提時(shí)間在20～80 min，隨著酶提時(shí)間的增加，淫羊藿總多糖的提取率也呈增加的趨勢(shì)，在80 min達(dá)到最大，酶提時(shí)間再增加，多糖提取率呈下降的趨勢(shì)。

圖4 酶提時(shí)間對(duì)淫羊藿總多糖提取率的影響Fig 4 Effect of enzyme extraction time on extraction rate of total polysaccharides from Epimedium

2.3 淫羊藿總多糖提取工藝優(yōu)化

2.3.1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 根據(jù)Box-Benhn-ken中心組合設(shè)計(jì)原理，綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取酶濃度、酶提溫度、酶提時(shí)間3個(gè)因素，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用三因素三水平的響應(yīng)面分析方法，研究三因素不同組合對(duì)淫羊藿多糖提取率的影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 淫羊藿多糖提取的響應(yīng)面設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 3 Response surface design and total polysaccharides extraction from Epimedium

對(duì)表3試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得到各因素影響多糖提取率的一次效應(yīng)、二次方效應(yīng)及其交互效應(yīng)的回歸方程：Y(%)=9.88+0.24X1+0.52X2-8.75X3+0.087X1X2+0.055X1X3+0.053X2X3-0.068X12-0.55X22-0.12X32，其中Y代表淫羊藿多糖提取率(%)，X1纖維素酶濃度(U/μL)，X2酶提溫度(℃)，X3酶提時(shí)間(min)。利用Design-Expert10.0.4軟件對(duì)表3中的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 響應(yīng)面二次回歸模型的方差分析Tab 4 Result of analysis of variance to the response surface quadratic model

續(xù)表

*P<0.05差異顯著，**P<0.01差異極顯著，/差異不顯著

*P<0.05 was significant,**P<0.01 was extremely significant, / has no significant difference

由表4可以看出，各因素中纖維素酶濃度一次項(xiàng)X1極顯著，酶提溫度一次項(xiàng)X2極顯著，酶提溫度二次項(xiàng)X22極顯著，酶提時(shí)間二次項(xiàng)X32顯著。在本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，R2=0.8669，校正后的R2=0.9607，模型F=44.50，該模型回歸顯著性P<0.0001，說(shuō)明建立的模型極顯著；失擬項(xiàng)F值為1.00，P=0.4792>0.05，不顯著，說(shuō)明模型的擬合程度良好，未知因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果干擾較小，該模型可以用于淫羊藿多糖的提取優(yōu)化。

2.3.2 相應(yīng)曲面分析與優(yōu)化 根據(jù)回歸方程，作出響應(yīng)面圖，考察所擬合的響應(yīng)曲面的形狀，分析酶濃度(X1)、酶提溫度(X2)和酶提時(shí)間(X3)對(duì)淫羊藿多糖提取率的影響，相應(yīng)曲面的三維立體見(jiàn)圖5.a-c與等高圖見(jiàn)圖6.d-f。

由圖5.a和圖6.d可以看出，隨著酶濃度的增加，提取得率緩慢增加，說(shuō)明增加酶濃度有利于提高提取率，但增加的速度相對(duì)較小，當(dāng)酶濃度超過(guò)90 U/μL后出現(xiàn)提取得率趨于平穩(wěn)的趨勢(shì)；而提取得率隨著提取溫度的增加而快速增大，當(dāng)提取溫度在50 ℃時(shí)，提取率達(dá)到最大值，之后隨溫度的增加，提取率呈下降趨勢(shì)。說(shuō)明提取溫度對(duì)提取率的影響較大。

由圖5.b和圖6.e可以看出，提取率隨酶提時(shí)間的增加緩慢增大，在80 min時(shí)達(dá)到最大值，之后隨時(shí)間的增大而緩慢降低，可能是隨著酶解的進(jìn)行，有非多糖類物質(zhì)析出，影響多糖得率的測(cè)定；而隨著酶濃度的增加提取率同樣是緩慢增長(zhǎng)的趨勢(shì)，說(shuō)明酶提時(shí)間和酶濃度對(duì)提取率的影響相對(duì)較小。

由圖5.c和圖6.f可以看出，酶提溫度在40～50 ℃之間時(shí)，提取率隨溫度的升高而迅速增大，溫度在50 ℃后，提取率呈明顯的下降趨勢(shì)；而隨著酶提時(shí)間的增大，提取率變化趨勢(shì)不明顯，說(shuō)明相對(duì)于酶提時(shí)間，酶提溫度對(duì)提取率的影響較大。

2.3.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 為驗(yàn)證試驗(yàn)的可操作性，選取同一樣品，在纖維素酶濃度110 U/μL、酶提溫度60 ℃、酶提時(shí)間100 min的最佳提取條件下進(jìn)行驗(yàn)證性試驗(yàn)，提取3次，計(jì)算淫羊藿多糖的平均提取率為10.06%，非常接近理論預(yù)測(cè)值10.199%。因此，采用響應(yīng)面優(yōu)化方法對(duì)淫羊藿多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，可得到最優(yōu)的工藝參數(shù)，為進(jìn)一步的試驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)，為淫羊藿的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

3 討 論

多糖是存在于生物體內(nèi)的一類生物大分子物質(zhì)，具有重要的生物活性。多糖傳統(tǒng)的提取方法是水煮、水提醇沉法，這些傳統(tǒng)的提取方法時(shí)間長(zhǎng)、效率低。而酶輔助提取法具有時(shí)間短、效率高、能耗低等優(yōu)點(diǎn)，克服了傳統(tǒng)提取法的一些缺點(diǎn)。本研究基于酶法在提取中藥時(shí)的優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)單因素和響應(yīng)面法討論了淫羊藿多糖的提取工藝條件，以期達(dá)到高效從淫羊藿中提取多糖的目的。

圖5 兩因素之間交互作用對(duì)淫羊藿多糖提取率影響的響應(yīng)面三維立體圖Fig 5 Response surface three dimensional showing the effects of two factors interaction on the extraction rate of polysaccharide from Epimedium

圖6 兩因素之間交互作用對(duì)淫羊藿多糖提取率影響的響應(yīng)面等高線圖Fig 6 Response surface contour map showing the effects of two factors interaction on the extraction rate of polysaccharide from Epimedium

在單因素試驗(yàn)中，就酶濃度而言，淫羊藿多糖的提取率隨著酶濃度的增加而增大，但酶濃度在90～110 U/μL之間增長(zhǎng)趨勢(shì)變緩，這是由于隨著酶濃度的增加，促進(jìn)了酶對(duì)淫羊藿植物細(xì)胞壁的降解，增加了多糖的溶出量，當(dāng)酶濃度超過(guò)90 U/μL后，纖維素酶與底物的作用點(diǎn)達(dá)到飽和；就酶提溫度而言，淫羊藿多糖提取率隨溫度的升高而增加，當(dāng)溫度超過(guò)50 ℃時(shí)，總多糖提取率隨溫度的升高而程下降趨勢(shì)，這是由于酶屬于蛋白質(zhì)，其活性受溫度的影響，溫度升高可促進(jìn)酶活性的增強(qiáng)，當(dāng)超過(guò)最適溫度時(shí)可導(dǎo)致酶蛋白質(zhì)變性失活，從而降低酶的活性，影響多糖提取率；就酶提時(shí)間而言，隨著酶提時(shí)間的增加多糖提取率升高，超過(guò)80 min時(shí)，多糖提取率程下降趨勢(shì)，這可能是酶解過(guò)程中細(xì)胞透性不斷增加，隨著酶解的不斷進(jìn)行，一些非多糖類可溶性物質(zhì)不斷析出，干擾多糖的測(cè)定，導(dǎo)致多糖提取率降低。

通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)，利用Design-Expert軟件建立了淫羊藿多糖提取率與纖維素酶濃度、酶提溫度及酶提時(shí)間的二次多項(xiàng)回歸模型，驗(yàn)證結(jié)果表明該模型合理可靠，能較好的預(yù)測(cè)淫羊藿多糖的提取率。優(yōu)化出淫羊藿多糖酶輔助提取的最佳工藝參數(shù)為：纖維素酶濃度110 U/μL，酶提溫度60 ℃，酶提時(shí)間100 min，淫羊藿多糖的提取率為10.06%，與預(yù)測(cè)值10.199%非常接近，可達(dá)預(yù)測(cè)值的98.6%。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，劉曉鵬等[13]用微波輔助法提取淫羊藿多糖，多糖得率為1.8%；姜虹等[14]報(bào)道，用響應(yīng)面法優(yōu)化淫羊藿多糖超聲提取提取工藝，其多糖提取率為5.62%。與微波輔助法及超聲提取法相比，本研究相對(duì)省時(shí)，且淫羊藿多糖提取率較高。試驗(yàn)結(jié)果表明該回歸方程可以較好的預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，選擇響應(yīng)面法來(lái)優(yōu)化淫羊藿多糖的提取工藝是可行的。

該提取工藝中的試驗(yàn)條件具有容易控制、安全環(huán)保，且提取效率高、時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)提取工藝的缺點(diǎn)，可為淫羊藿多糖的工業(yè)化大生產(chǎn)提供參考。

[1] 李時(shí)珍. 本草綱目[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社,1977:750.

Li S Z. Compendium of materia medica[M]. Beijing: People's Medical Publishing House, 1977:750.

[2] Cao H, Fan Y, Wang D,etal. Optimization on preparation condition ofEpimediumpolysaccharide liposome and evaluation of its adjuvant activity [J]. Int J Biol Macromol, 2012, 50(1): 207-213.

[3] 王程成,蘇嘉炎,蔡繼炎,等.響應(yīng)面優(yōu)化朝鮮淫羊藿多糖提取條件及腫瘤免疫活性研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2016,51(9):1464-1471.

Wang C C, Su J Y, Cai J Y,etal. Response surface analysis for the optimization of extraction condition for polysaccharides fromEpimediumpolysaccharides and studies on its tumor immune activities[J]. Acta Pharm Sin, 2016,51(9):1464-1471.

[4] 李得鑫,陳偉毅,周霄楠,等.淫羊藿對(duì)動(dòng)物機(jī)體免疫功能的研究進(jìn)展[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志,2015,5:68-70.

Li D X, Chen W Y, Zhou X N,etal. Research progress ofEpimediumon immune function in animals[J]. Chinese Journal of Traditional Veterinary Science, 2015,5:68-70.

[5] 付亮,袁璟亞,周永紅,等. 淫羊藿多糖的研究進(jìn)展及開(kāi)發(fā)前景[J].食品科學(xué),2012,33(03):261-266.

Fu L, Yuan J Y, Zhou Y H,etal. Research progress and development prospect ofEpimediumpolysaccharides[J]. Food Science, 2012,33(03):261-266.

[6] 李秋瑩,陳守哲,李波,等. 淫羊藿多糖抗氧化性研究[J].亞太傳統(tǒng)中藥,2016,12(18):24-26.

Li Q Y, Chen S Z, Li B,etal. Research on oxidation-resistance activity ofEpimediumpolysaccharides[J]. Asia-Pacific Traditional Medicine,2016,12(18):24-26.

[7] 任宇皓,胡元亮,劉家國(guó),等. 黃芪多糖、淫羊藿多糖和淫羊藿總黃酮對(duì)新城疫病毒感染細(xì)胞的影響[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,24(2):102-105.

Ren H Y, Hu Y L, Liu J G,etal. The effects of astragalus polysaccharide,Epimediumpolysaccharide andEpimediumflavone on cell-infecting of NDV[J]. Journal of Nanjing Agricultural University, 2001,24(2):102-105.

[8] 胡元亮,任宇皓,宋大魯,等. 黃芪多糖和淫羊藿多糖對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞增殖和衰老的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2005, 25(3):304-306.

Hu Y L, Ren Y H, Song D L,etal. Effects of astragalus polysaccharide andEpimediumpolysaccharide on proliferation and decrepitude of CEF[J]. Chinese Journal of Veterinary Science, 2005,25(3):304-306.

[9] Hromadkova, Z, Ebringerova, A, Valachovic, P. Ultrasound-assisted extraction of water-soluble polysaccharides from the roots of valerian(ValerianaofficinalisL)[J]. Ultrason Sonochem, 2002, 9(1): 37-42.

[10]于紅梅,陳芬芳,王瑞,等. 正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化淫羊藿多糖的提取工藝[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,36(3):64-67.

Yu H M, Chen F F, Wang R,etal. Extraction technology optimization of polysaccharides fromEpimediumbrevicornumUsing Orthogonal Design[J]. Progress in Veterinary Medicine, 2015, 36(3):64-67.

[11]楊瑞花,張玥莉. 響應(yīng)面法優(yōu)化纖維素酶提取丹參多糖工藝[J].中國(guó)藥師,2016,19(1):43-46.

Yang R H, Zhang Y L. Optimization of cellulase extraction process for polysaccharide by response surface analysis[J]. China Pharmacist, 2016,19(1):43-46.

[12]于瑞詩(shī),朱鵬程,陶燕鐸,等.苯酚硫酸法測(cè)定迷果芹多糖的含量[J].分析試驗(yàn)室,2008, 27(S):222-224.

Yu R S, Zhu P C, Tao Y D,etal. Determination of polysaccharides in pistachios sulfuric acid method[J]. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2008,27(S):222-224.

[13]劉曉鵬,姜寧,劉志彪,等. 微波輔助提取淫羊藿多糖研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2014,10(16):16-18.

Liu X P, Jiang N, Liu Z B,etal. A Study on the microwave extraction for polysaccharides fromEpimediumsagittatum(Sieb. Et Zucc.)Maxim[J]. Asia-Pacific Traditional Medicine,2014,10(16):16-18.

[14]姜虹,李新龍,李海平,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化淫羊藿多糖超聲提取工藝的研究[J].長(zhǎng)春師范學(xué)院學(xué)報(bào),2013,32(1):59-64.

Jiang H, Li X L, Li H P,etal. Optimization of ultrasonic extraction of polysaccharides from driedEpimediumleaves using response surface methodology[J]. Journal of Changchun Normal University(Natural Science), 2013,32(1):59-64.

(編輯：李文平)

Optimization ofEpimediumPolysaccharide by Response Surface Methodology

GU Huan-huan, CHU Xiu-ling*, SU Jian-qing

(College of Agriculture, Liaocheng University, Liaocheng Shandong 252059)

CHU Xiu-ling, E-mail: chuxiul@163.com

To optimize the extraction technology ofEpimediumpolysaccharide from HerbaEpimedii. The extraction technology was used by using ultrasonic-assisted extraction technology and hot water extraction technology. On the basis of single factor test results, enzyme concentration, enzyme extraction temperature, enzyme extraction time were selected as independent variables. Three factors and three levels of the Box-Behnken response surface design was used to that of optimizing extraction ofEpimediumpolysaccharide. The results showed that the optimum parameters for extractingEpimediumpolysaccharide, enzyme concentration was 110 U/μL, temprature of enzyme extraction is 60 ℃, enzyme extraction time is 10 minutes. The enzyme extraction temperature had the greatest effect on the extraction rate of polysaccharide. Under the optimum conditions, the extraction rate of polysaccharide was 10.06%, which closes to the maximum expected value of extraction(10.199%)of the model. The experiment had provided the basis for the clinical application ofEpimediumpolysaccharide.

Epidmedium; polysaccharide; enzyme assistant method; response surface methodology

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.8.09

山東省自然科學(xué)基金(ZR2013CL010)

顧歡歡，碩士研究生，從事動(dòng)物疫病發(fā)生機(jī)理及防控研究。

褚秀玲。E-mail:chuxiul@163.com

2017-03-04

A

1002-1280 (2017) 08-0052-07

S853.7