杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因生物信息學(xué)分析及缺鐵脅迫對(duì)其表達(dá)的影響

郭獻(xiàn)平，吳中營(yíng)，王東升，張四普，牛佳佳

(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，河南 鄭州 450002)

杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因生物信息學(xué)分析及缺鐵脅迫對(duì)其表達(dá)的影響

郭獻(xiàn)平，吳中營(yíng)，王東升*，張四普，牛佳佳

(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，河南 鄭州 450002)

為了探究缺鐵脅迫對(duì)杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因表達(dá)的影響，對(duì)杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因三價(jià)鐵還原酶(PbFRO2)基因和鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(PbIRT1)基因的氨基酸序列進(jìn)行了多重序列比對(duì)和進(jìn)化樹(shù)分析；采用改良的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液水培杜梨的方法，研究了缺鐵脅迫對(duì)杜梨根系PbFRO2和PbIRT1基因相對(duì)表達(dá)量以及根系鐵和鋅含量的影響。結(jié)果表明，PbFRO2蛋白具有還原酶特性，PbIRT1蛋白屬于二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族—ZIP家族；缺鐵脅迫9 d內(nèi)，杜梨根系PbFRO2和PbIRT1的表達(dá)量整體上呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，脅迫3 d表達(dá)量達(dá)到最高點(diǎn)且與對(duì)照(加Fe-EDTA)差異顯著;缺鐵脅迫30 d，杜梨根系中鐵含量比對(duì)照降低77.46%，而鋅含量提高1 139.40%。綜上可知，缺鐵脅迫可誘導(dǎo)杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因表達(dá)量升高，進(jìn)而促進(jìn)二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性提高。

杜梨； 缺鐵脅迫； 鐵吸收； 三價(jià)鐵還原酶基因； 鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因

鐵作為一種重要的微量營(yíng)養(yǎng)元素，與果樹(shù)的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)[1]。鐵是植物光合作用和固氮作用2個(gè)重要的代謝途徑中必要的輔助因子，其利用效率極大地影響植物的生長(zhǎng)[2]。盡管自然界土壤中含有較多的鐵，但在堿性或石灰性土壤中，鐵易被氧化并以三價(jià)鐵(Fe3+)形態(tài)存在，F(xiàn)e3+溶解度較低，限制了鐵的利用率。在這種條件下，為了維持植物的正常生長(zhǎng)，在長(zhǎng)期的進(jìn)化中，植物從形態(tài)和生理上建立了一套適應(yīng)機(jī)制。目前，對(duì)植物鐵元素代謝的初期研究主要集中在根系的鐵吸收機(jī)制方面。

R?mheld等[3]1986年在總結(jié)前人研究的基礎(chǔ)上，提出了高等植物在長(zhǎng)期適應(yīng)缺鐵脅迫過(guò)程中所形成的2種適應(yīng)性機(jī)制，雙子葉植物以及非禾本科單子葉植物采用機(jī)制Ⅰ吸收鐵，而單子葉禾本科植物釆用機(jī)制Ⅱ吸收鐵。機(jī)制Ⅰ中，植物在進(jìn)行鐵吸收時(shí)，首先通過(guò)質(zhì)膜上的H+-ATPase向根際分泌H+，酸化根際土壤，增加土壤中Fe3+的溶解性。在鐵進(jìn)入根系細(xì)胞之前，植物會(huì)先通過(guò)鐵氧還原酶(FRO)將Fe3+還原為Fe2+，之后，再通過(guò)細(xì)胞膜上的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白IRT進(jìn)入細(xì)胞。機(jī)制Ⅱ中，植物鐵吸收的關(guān)鍵物質(zhì)是麥根酸類(lèi)植物鐵載體MAs。這類(lèi)植物發(fā)生缺鐵脅迫時(shí)會(huì)分泌MAs，其對(duì)Fe3+親和力強(qiáng)，能形成穩(wěn)定的三價(jià)鐵螯合物Fe3+-MAs，然后被運(yùn)入植物體內(nèi)。在番茄[4]、黃瓜[5]、豌豆[6-7]、水稻[8-9]、蘋(píng)果[10]等中均發(fā)現(xiàn)了三價(jià)鐵還原酶基因(PbFRO2)和二價(jià)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(PbIRT1)2種關(guān)鍵基因。

中國(guó)梨屬砧木資源豐富，華北、西北及華東的堿性土壤地區(qū)，多采用杜梨(Pyrusbetulifolia)作為砧木[11]。本試驗(yàn)在缺鐵脅迫下對(duì)杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因PbFRO2和PbIRT1進(jìn)行初步研究，為尋找提高堿性土壤中杜梨根系鐵吸收效率的途徑奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

2016年2月底選擇大小一致且飽滿的杜梨種子，將種子置于無(wú)菌河沙中，在4 ℃的環(huán)境中層積催芽。2016年3月露白后播種于溫室中，基質(zhì)配比為V草炭∶V珍珠巖∶V蛭石=3∶1∶1。

1.2 主要試劑和儀器

試劑：RNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司(目錄號(hào)：DP419)，反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司(目錄號(hào)：R211-01/02)。儀器：美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)的ABI StepOnePlus實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)，美國(guó)Teledyne Leeman Labs公司生產(chǎn)的ICP-Prodigy7等離子發(fā)射光譜儀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 缺鐵處理 杜梨苗長(zhǎng)出6片真葉后，進(jìn)行全營(yíng)養(yǎng)液水培，每小時(shí)通氣15 min。全營(yíng)養(yǎng)液利用改良的Hoagland溶液(表1)。全營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)2周后，進(jìn)行缺鐵處理(不加Fe-EDTA，即-Fe)，以加Fe-EDTA為對(duì)照(+Fe)。

表1 改良Hoagland溶液的組成

1.3.2 杜梨根系PbFRO2和PbIRT1多重序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析 在NCBI(美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心)中查詢到杜梨PbFRO2氨基酸序列(Accession no.AKI29081.1)和PbIRT1氨基酸序列(AMY26505.1)，通過(guò)NCBI中的BLASTp(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)序列比對(duì)，獲得擬南芥(Arabidopsisthaliana)AtFRO2(NP_171664.1)、小金海棠(Malusbaccatavar.xiaojinensis)MxFRO2(ABU54827.1)、番茄(Solanumlycopersicum)LeFRO1(AAP46144.1)、豌豆(Pisumsativum)PsFRO1(AAK95654.2)、黃瓜(Cucumissativus)CsFRO1(AAT01415.1)氨基酸序列，以及擬南芥AtIRT1(NP_567590.3)、AtIRT2(NP_001031670.1)，豆梨(Pyruscalleryana)PcIRT1(AMY26506.1)，小金海棠MxIRT1(AAO17059.1)，番茄LeIRT1(AAD30548.1)、LeIRT2(AAD30549.1)，豌豆PsRIT1(AAC17441.1),水稻(OryzasativaJaponica Group)OsIRT1 (XP_015632375.1)、OsIRT2(XP_015629246.1)氨基酸序列。

蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)和分析：利用在線工具(http://web.expasy.org/compute_pi/)預(yù)測(cè)分子量；利用CLUSTAL W(http://www.ebi.ac.uk/clustalw)和BOXSHADE (http://www.ch.embnet.org/software/BOX_form.html)進(jìn)行多重序列分析；利用在線工具(http://www.ch.embnet.org/software/TMPRED_form.html)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)域；利用在線工具(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)預(yù)測(cè)信號(hào)肽結(jié)構(gòu)。利用MEGA 4.0軟件以相鄰連接法(Neighbour Joining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.3.3 杜梨根系PbFRO2和PbIRT1在缺鐵脅迫不同時(shí)間的相對(duì)表達(dá)量 分別在缺鐵處理0、1、2、3、6、9 d取杜梨根系，放入-80 ℃液氮保存。在NCBI中獲得PbFRO2和PbIRT1 cDNA全長(zhǎng)的基礎(chǔ)上,利用Primer 5.0設(shè)計(jì)qPCR引物，以Actin為內(nèi)參基因，PbActinQ-F：5′-TCTTCTCAACAACGACCCCA-3′，PbActinQ-R：5′-CATGAAGTCGGCAGCAAGAA-3′，PbFRO2Q-F：5′-TCAAGCCGAACCCTTCAGAC-3′，PbFRO2Q-R：5′-TCATTCCAAGCCAGAGCCAG-3′，PbIRT1Q-F：5′-TGCAGCACTGAAAACACCTC-3′，PbIRT1Q-R：5′-AGAGGTTTCGATCAGGGTGG-3′。引物合成由南京金斯瑞生物科技有限公司完成。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系參照南京諾唯贊生物科技有限公司的SYBR Green Master Mix試劑盒，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。反應(yīng)程序:95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火延伸1 min，40個(gè)循環(huán)。采用2-△△CT方法進(jìn)行表達(dá)量分析。

印刷行業(yè)的質(zhì)量檢測(cè)，與其他行業(yè)有很大的不同，而且國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)于印刷質(zhì)量檢測(cè)的理解也有很大的差別。通常情況下，國(guó)內(nèi)企業(yè)在使用國(guó)外的質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，由于產(chǎn)品的要求比國(guó)外低，故導(dǎo)致廢品率很高。凌云考慮到了這一因素，于是為研發(fā)的質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)定了一個(gè)彈性的標(biāo)準(zhǔn)，從而解決了這一問(wèn)題，并可在一定程度上降低企業(yè)的成本和廢品率?！百|(zhì)量是最關(guān)鍵的，我們國(guó)內(nèi)的印刷企業(yè)不是做不好，而是對(duì)質(zhì)量缺乏‘敬畏’。”凌云總裁姚毅強(qiáng)調(diào)說(shuō)：“產(chǎn)品的質(zhì)量基準(zhǔn)設(shè)置好以后，大家都應(yīng)該遵循這一標(biāo)準(zhǔn)，是成品就是成品，是廢品就是廢品，這樣的意識(shí)正是國(guó)內(nèi)印刷企業(yè)所欠缺的。”姚毅真心希望國(guó)內(nèi)印刷企業(yè)能夠重視產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)。

1.3.4 根系鐵和鋅含量的測(cè)定 在缺鐵脅迫30 d，取對(duì)照和缺鐵杜梨苗根系測(cè)定鐵和鋅含量，測(cè)定方法為酸消解-ICP法。

1.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel和SPSS 22.0進(jìn)行方差分析，以LSD最小顯著性差異法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 PbFRO2和PbIRT1多重序列比對(duì)

杜梨PbFRO2基因 cDNA全長(zhǎng)2 163 bp，開(kāi)放閱讀框編碼PbFRO2蛋白具有720個(gè)氨基酸，分子質(zhì)量為80.70 ku。圖1顯示了杜梨與擬南芥、小金海棠、番茄FRO2蛋白的氨基酸序列比對(duì)，黑色部分表示完全相同的蛋白質(zhì)序列，灰色表示相似序列，其中，PbFRO2與擬南芥三價(jià)鐵還原酶蛋白AtFRO2的蛋白序列同源性達(dá)58%，相似度達(dá)76%，與小金海棠、番茄FRO2蛋白序列同源性達(dá)59%、62%，相似度達(dá)77%、79%。

圖1顯示，PbFRO2中445—458氨基酸序列含有氧化還原酶的標(biāo)識(shí)序列[12]。通過(guò)跨膜結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽預(yù)測(cè)，PbFRO2具有10個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，無(wú)信號(hào)肽序列。另外，在第七和第八跨膜結(jié)構(gòu)域之間，存在黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)結(jié)合位點(diǎn)(氨基酸序列337—382)，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)結(jié)合位點(diǎn)(427—432)。

杜梨PbIRT1 cDNA全長(zhǎng)1 188 bp，開(kāi)放閱讀框編碼PbIRT1蛋白具有364個(gè)氨基酸，分子質(zhì)量為39.10 ku。圖2顯示了杜梨與豆梨、小金海棠、番茄、豌豆、水稻IRT1蛋白的氨基酸序列比對(duì)，其中，PbIRT1與擬南芥鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白AtIRT1的蛋白序列同源性達(dá)59%，相似度達(dá)73%，與豆梨、小金海棠、番茄、豌豆、水稻IRT1蛋白序列同源性達(dá)99%、98%、73%、67%、55%，相似度達(dá)99%、98%、84%、80%、72%。

圖2顯示，PbIRT1中227—231氨基酸序列符合ZIP家族的標(biāo)識(shí)序列區(qū)域的氨基酸序列[LIVFA][GAS][LIVMD][LIVSCG][LIVFAS]H[SAN][LIVFA][LIVFMAT][LIVDE]G[LIVF][SAN][LIFVF][GS][13]。通過(guò)跨膜結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽預(yù)測(cè)，PbIRT1具有8個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，N端1—30為信號(hào)肽序列，在第三和第四跨膜結(jié)構(gòu)域間有一可變區(qū)，可變區(qū)方框內(nèi)富含組氨酸(His)。通過(guò)以上分析推理得出，PbIRT1具有ZIP家族的特征[14]，為家族成員之一。

2.2 PbFRO2和PbIRT1系統(tǒng)發(fā)育分析

2.3 缺鐵脅迫不同時(shí)間杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因表達(dá)特性分析

對(duì)杜梨進(jìn)行缺鐵脅迫9 d，檢測(cè)不同時(shí)期杜梨根系PbFRO2和PbIRT1相對(duì)表達(dá)量(圖4)，采用2-△△CT方法進(jìn)行表達(dá)量數(shù)據(jù)分析。結(jié)果表明，對(duì)照0 d二者相對(duì)表達(dá)量為1，缺鐵脅迫1 d，PbFRO2相對(duì)表達(dá)量比對(duì)照顯著降低，PbIRT1相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照無(wú)顯著差異。缺鐵脅迫2 d后，PbFRO2和PbIRT1逐漸升高，在3 d達(dá)到最高(分別為25.41和13.91)，之后二者的相對(duì)表達(dá)量降低，但均與對(duì)照差異顯著，在9 d分別為2.85和4.07。缺鐵脅迫9 d內(nèi)，對(duì)照之間的相對(duì)表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)。

TM1—10表示跨膜結(jié)構(gòu)域1—10；FAD-binding site表示黃素腺嘌呤二核苷酸結(jié)合位點(diǎn)；NADPH-binding site表示還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸結(jié)合位點(diǎn)；Oxidoreductase signature 表示氧化還原酶的標(biāo)識(shí)序列

TM1—8表示跨膜結(jié)構(gòu)域1—8；Variable region表示可變區(qū)，方框內(nèi)富含組氨酸殘基序列；Signal peptide 表示信號(hào)肽序列；ZIP signature 表示ZIP家族的標(biāo)識(shí)序列

圖3 PbFRO2和PbIRT1進(jìn)化樹(shù)分析

同一時(shí)間不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)

2.4 缺鐵脅迫30 d對(duì)杜梨根系鐵和鋅含量的影響

在缺鐵脅迫30 d時(shí)，對(duì)照和缺鐵處理的杜梨苗已有明顯的表型差異(圖5)，此時(shí)，缺鐵脅迫的杜梨根系鐵含量比對(duì)照降低77.46%，而鋅含量比對(duì)照提高1 139.40%，鐵和鋅含量均與對(duì)照差異顯著(圖6)。

圖5 缺鐵脅迫30 d對(duì)照(左)和缺鐵處理(右)杜梨表型差異

同一指標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，杜梨根系三價(jià)鐵還原酶PbFRO2具有還原酶特性，鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PbIRT1屬于二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族—ZIP家族。二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)基因家族—ZIP基因家族由IRT1和相關(guān)的金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因組成[15]，擬南芥AtIRT1是ZIP基因家族的第1個(gè)成員。該基因家族編碼一種長(zhǎng)度為309～476個(gè)氨基酸殘基的膜結(jié)合蛋白，具有8個(gè)疏水跨膜結(jié)構(gòu)域，每個(gè)結(jié)構(gòu)域都含有20多個(gè)氨基酸殘基[15]。二價(jià)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因IRT表達(dá)量升高，不僅增強(qiáng)轉(zhuǎn)運(yùn)鐵的效率，同時(shí)也提高了轉(zhuǎn)運(yùn)鋅和錳等二價(jià)金屬離子的能力，缺鐵脅迫下，擬南芥根系中鋅和錳含量均顯著高于對(duì)照[16]，豌豆根系中鋅、錳、銅含量以及有毒的鎘含量均顯著高于對(duì)照[17]。ZIP基因家族在跨膜結(jié)構(gòu)域3和4之間是一個(gè)與金屬離子結(jié)合的可變區(qū)，這個(gè)富含His的區(qū)域?qū)τ诮饘匐x子的結(jié)合和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是重要的，改變其內(nèi)的某些氨基酸殘基可以改變其對(duì)二價(jià)金屬離子結(jié)合的特性。將擬南芥AtIRT1氨基酸序列103位通過(guò)點(diǎn)突變由谷氨酸(E)改為丙氨酸(A)，在酵母二價(jià)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白突變體fet3fet4中相同表達(dá)量下，與對(duì)照相比，在鐵的吸收效率不降低的情況下，可有效減少鋅的吸收效率[18]。

本研究表明，缺鐵脅迫可誘導(dǎo)杜梨根系鐵吸收關(guān)鍵基因表達(dá)量升高，進(jìn)而促進(jìn)二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性提高。缺鐵脅迫9 d內(nèi)，杜梨根系PbFRO2和PbIRT1的表達(dá)量表現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，脅迫3 d表達(dá)量達(dá)到最高點(diǎn)且與對(duì)照差異顯著，對(duì)照之間表達(dá)量變化差異不顯著。缺鐵脅迫30 d，杜梨根系中鐵含量比對(duì)照降低77.46%，而鋅含量提高1 139.40%。擬南芥在缺鐵脅迫下AtFRO2和AtIRT1的表達(dá)量呈現(xiàn)先降低后增高再降低的趨勢(shì)，缺鐵處理6 hAtFRO2和AtIRT1表達(dá)量比對(duì)照降低，12 h后開(kāi)始上升，在24 h達(dá)到最高峰，之后逐漸降低[19]。小金海棠在缺鐵脅迫下2個(gè)關(guān)鍵基因的相對(duì)表達(dá)量也表現(xiàn)出與擬南芥相同的趨勢(shì)，缺鐵脅迫第2天表達(dá)量降低，第8天達(dá)到最高峰，之后降低[10]。有研究表明，F(xiàn)RO2和IRT1表達(dá)量受根際鐵含量和葉片鐵營(yíng)養(yǎng)狀況的雙重調(diào)控，擬南芥根系周?chē)蔫F本身可誘導(dǎo)AtFRO2和AtIRT1表達(dá)量的升高[20]。在缺鐵脅迫初期，根系周?chē)蔫F含量降低，植物根系反應(yīng)為植物不再需要吸收鐵，鐵吸收相關(guān)基因表達(dá)量降低，隨著脅迫時(shí)間延長(zhǎng)，葉片鐵含量不能滿足需求，產(chǎn)生信號(hào)物質(zhì)傳達(dá)到根系促使FRO2和IRT1表達(dá)量升高，進(jìn)而提高鐵的吸收效率。

本研究雖然對(duì)PbFRO2和PbIRT1進(jìn)行了分析，但其功能還需要通過(guò)超表達(dá)和RNA干擾進(jìn)行驗(yàn)證。另外，進(jìn)一步研究FRO2和IRT1轉(zhuǎn)錄前和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、鐵感受信號(hào)物質(zhì)等方面，對(duì)探索逆境條件下杜梨如何高效吸收鐵具有重要意義。

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Bioinformatics Analysis of Iron Uptake Key Gene in the Root ofPyrusbetulifoliaand the Effect of Iron Deficiency on Its Expression

GUO Xianping，WU Zhongying，WANG Dongsheng*，ZHANG Sipu，NIU Jiajia

(Institute of Horticulture，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China)

To explore the effect of iron deficiency on iron uptake key gene expression in the root ofPyrusbetulifolia,the amino acid sequences of ferric reduction oxidase gene(PbFRO2) and iron-regulated transporter gene(PbIRT1) ofPyrusbetulifoliawere separately compared with other plants，phylogenetic analysis was used to examine the evolutionary relationships，and the effects of iron deficiency on thePbFRO2 andPbIRT1 gene expression and Fe and zinc contents in the root ofPyrusbetulifoliawere studied by using the modified Hoagland nutrient solution for culture.The results showed that PbFRO2 protein had reductase features，and PbIRT1 protein was one of the members of the ZIP family.ThePbFRO2 andPbIRT1 gene expression showed a trend of increase first and then decrease under iron deficiency for 9 days，and the expression level reached its highest point on the 3rd day,with a significant difference from the control.Fe content in root was reduced by 77.46%，and the zinc content was increased by 1 139.40% on the 30th day under iron deficiency.In conclusion，the increase of iron uptake key gene expression in the root ofPyrusbetulifoliacan be induced under iron deficiency stress，which further promotes the activity of divalent metal ion transporters.

Pyrusbetulifolia; iron deficiency; iron uptake; ferric reduction oxidase gene; iron-regulated transporter gene

2017-02-20

河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目(162300410147)；國(guó)家梨產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-29-3)

郭獻(xiàn)平(1982-)，男，河南內(nèi)黃人，助理研究員，博士，主要從事梨樹(shù)栽培生理與分子生物學(xué)研究。 E-mail:xianping2005@163.com

*通訊作者：王東升(1966-)，男，河南武陟人，研究員，碩士，主要從事梨栽培生理研究。E-mail:wdse66@126.com

S661.2

A

1004-3268(2017)08-0096-06