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    不同劑型干擾素治療高危型HPV亞臨床感染的對(duì)比分析

    2017-08-31 12:01:23鄔賢鳳陳紅舟周吉航
    健康研究 2017年3期
    關(guān)鍵詞:泡騰干擾素宮頸癌

    鄔賢鳳,余 穎,陳紅舟,周吉航

    (浙江省舟山醫(yī)院 婦產(chǎn)科,浙江 舟山 316000)

    健康科學(xué)臨床研究

    不同劑型干擾素治療高危型HPV亞臨床感染的對(duì)比分析

    鄔賢鳳,余 穎,陳紅舟,周吉航

    (浙江省舟山醫(yī)院 婦產(chǎn)科,浙江 舟山 316000)

    目的 對(duì)比分析重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊和重組人干擾素α-2b栓治療高危人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)亞臨床感染的臨床療效和安全性。方法 將138例高危型HPV亞臨床感染患者隨機(jī)分為兩組:A組采用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊進(jìn)行治療,80萬(wàn)IU/d,每日一次,每月連續(xù)12 d;B組采用重組人干擾素α-2b栓治療,10萬(wàn)IU/d,隔日一次,每月連續(xù)20 d,均治療6個(gè)月;對(duì)比有效率和不良反應(yīng)發(fā)生率,并于治療前后取宮頸脫落細(xì)胞,采用實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)測(cè)定E6、E7 mRNA表達(dá)水平。結(jié)果 A組臨床有效率顯著高于B組(P<0.05),并發(fā)癥發(fā)生率與B組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療前,A、B兩組患者的E6、E7mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);治療后,兩組患者的E6、E7mRNA表達(dá)水平均顯著降低,且A組的降低幅度明顯大于B組(P<0.05)。結(jié)論 與重組人干擾素α-2b栓相比,重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊治療HR-HPV,能夠更加有效的下調(diào)E6、E7 mRNA表達(dá),提高用藥療效。

    重組人干擾素α-2b;泡騰膠囊;栓劑;高危人乳頭狀瘤病毒;亞臨床感染

    宮頸癌是威脅女性健康的第三大惡性腫瘤,高危型人乳頭狀瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)持續(xù)感染并整合入宿主細(xì)胞是其主要誘因。研究表明,HR-HPV基因整合后,E2基因斷裂,失去了對(duì)E6、E7基因的抑制作用,而E6、E7基因能夠破壞抑癌基因p53和pRb的蛋白形態(tài),使細(xì)胞進(jìn)入過(guò)度增生而誘發(fā)宮頸癌[1]。干擾素歷來(lái)是臨床治療HPV感染的一線藥物,由免疫細(xì)胞分泌,是一類高活性、多功能的免疫介質(zhì)。其劑型較多,應(yīng)用方式多樣[2-3]。本院在近兩年,主要應(yīng)用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊和重組人干擾素α-2b栓治療HR-HPV亞臨床感染,本研究將E6、E7表達(dá)狀態(tài)納入其臨床療效的考察范圍,比較這兩種藥物的應(yīng)用療效和安全性,以期為臨床合理用藥提供依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取本院2013年10月—2016年9月收治的138例HR-HPV亞臨床感染婦女,納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)陰道鏡、TCT和宮頸活檢確診為HR-HPV亞臨床感染;②年齡18~50周歲,經(jīng)期規(guī)律;③自愿簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):①宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變;②肉眼可見(jiàn)尖銳濕疣;③急性生殖道炎癥;④妊娠期及哺乳期。采用隨機(jī)數(shù)字表將患者分為兩組各69例,兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表1)。

    表1 兩組患者一般資料對(duì)比

    1.2 HPV分型方法 采用流式熒光雜交法進(jìn)行HPV分型檢測(cè),主要步驟:(1)取宮頸上皮脫落細(xì)胞,采用脫落細(xì)胞核酸釋放劑提取DNA。(2)用上海透景生命科技有限公司提供的試劑盒,添加通用引物、globin引物、內(nèi)參基因,加入PCR儀(TC-9600,LABNET公司)進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增條件95 ℃預(yù)變性5 min,(95 ℃ 30 s,58 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s)5個(gè)循環(huán),(95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s)35個(gè)循環(huán),72 ℃延伸3 min。(3)將3 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和22 μL微球雜交液進(jìn)行混合,并經(jīng)過(guò)95 ℃ 5 min變性,48 ℃ 30 min雜交后,加入75 μLSA-PE熒光素標(biāo)記48 ℃孵育15 min,迅速移至Luminex多功能流式點(diǎn)陣儀檢測(cè)分析。所有操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

    1.3 治療方法 A組患者予以重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊(上海華新生物高技術(shù)有限公司,S20050075),80萬(wàn)IU×4粒/盒,1粒/d,月經(jīng)干凈第3 d,睡前置入陰道深處,每月連續(xù)使用12 d,連用6個(gè)月。B組患者予以重組人干擾素α-2b栓(安徽安科生物工程股份有限公司,S20020103),10萬(wàn)IU×3粒/盒,1粒/d,月經(jīng)干凈第3 d,睡前注入陰道深處,隔日1次,每月連續(xù)使用20 d(10次),連用6個(gè)月。

    1.4 觀察指標(biāo)

    1.4.1 臨床療效和安全性 治療三個(gè)月后,根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)有效率。治愈:宮頸醋酸白上皮完全消失,HPV轉(zhuǎn)陰;緩解:宮頸醋酸白上皮面積減少或厚度變薄,HPV至少有一種亞型轉(zhuǎn)陰;無(wú)效:宮頸醋酸白上皮面積和厚度改變,HPV無(wú)轉(zhuǎn)陰或惡化。有效率=[(治愈+緩解)/總例數(shù)]×100%。并記錄用藥期間有無(wú)并發(fā)癥發(fā)生,干擾素常見(jiàn)并發(fā)癥包括:瘙癢、下腹墜脹、分泌物增多或局部灼痛感。

    1.4.2 E6、E7mRNA表達(dá) 采用新鄉(xiāng)科蒂亞生物技術(shù)有限公司提供的冷光儀及配套試劑盒(宮頸穩(wěn)態(tài)檢測(cè)試劑盒、HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)試劑盒)測(cè)定E6、E7 mRNA表達(dá)水平。主要步驟:(1)用宮頸穩(wěn)態(tài)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光)中裂解液將宮頸細(xì)胞裂解。(2)檢測(cè)緩沖液配置:1 μL封閉反應(yīng)液+17 μL裂解液+31 μL dd H2O+1 μL檢測(cè)探針。(3)布板:標(biāo)本(50 μL)+標(biāo)本檢測(cè)緩沖液(50 μL),用封條貼紙裹緊整塊板,放入55 ℃保溫箱保溫3.5 h。(4)3步信號(hào)放大。(5)上冷光儀檢測(cè)。

    2 結(jié) 果

    2.1 臨床療效和安全性 A組有效率顯著高于B組(P<0.05,表2)。治療期間,A組發(fā)生4例陰道瘙癢、4例局部疼痛、5例灼熱感,不良反應(yīng)發(fā)生率18.8%;B組發(fā)生3例陰道瘙癢、4例灼熱感,不良反應(yīng)發(fā)生率10.1%;兩組間不良反應(yīng)發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.105,P=0.147)。

    表2 兩組患者臨床療效對(duì)比[n(%)]

    2.2 E6、E7 mRNA表達(dá) 治療前,兩組患者E6、E7 mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);治療后,兩組的E6、E7 mRNA表達(dá)水平均顯著降低,且A組患者的降低幅度明顯大于B組(P<0.05);見(jiàn)表3。

    表3 兩組患者治療前后E6、E7 mRNA表達(dá)水平對(duì)比

    3 討 論

    干擾素是病毒進(jìn)入機(jī)體后宿主細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫活性物質(zhì),重組人干擾素α-2b具有廣譜抗病毒活性,其作用機(jī)制包含以下方面[4-5]:(1)提高機(jī)器免疫監(jiān)視和應(yīng)答功能,及時(shí)清除病毒;(2)與靶細(xì)胞表面的干擾素受體結(jié)合,阻止局部病毒蛋白質(zhì)合成;(3)調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)分泌功能,如雌二醇、孕酮等,改善生殖道內(nèi)環(huán)境,從而抵御病毒感染。重組人干擾素α-2b劑型眾多,不同劑型有不同的優(yōu)缺點(diǎn)。相較于栓劑,陰道泡騰膠囊的有效成分高出8倍,由于劑量差異較大,前者可能有效性更高,但副作用更明顯。本研究結(jié)果顯示,A組有效率明顯高于B組;兩組不良反應(yīng)均為干擾素相關(guān)不良反應(yīng),A組稍高于B組,但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這說(shuō)明重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊能夠在保障安全性的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)大劑量用藥。

    泡騰膠囊是含有泡騰崩解劑的一種新劑型,與栓劑相比體積小,攜帶方便,泡騰膠囊本身干燥不含水分,進(jìn)入機(jī)體后遇水迅速崩解和融化,崩解產(chǎn)生的大量泡沫,增加了藥物與病變部位的直接接觸面積[6],從而使有效成分均勻地分布于宮腔表面,包括宮頸口和陰道各側(cè)壁,故而不會(huì)因局部藥物濃度過(guò)高而誘發(fā)的副反應(yīng),這也是泡騰膠囊可以實(shí)現(xiàn)大劑量用藥的主要原因;而栓劑因無(wú)法在宮腔內(nèi)部涂抹均勻,故不適用于過(guò)大劑量用藥;作者認(rèn)為這是泡騰膠囊取得更高療效的主要原因。

    臨床調(diào)查結(jié)果顯示,99.0%以上的宮頸癌是由HR-HPV持續(xù)感染并與宿主細(xì)胞發(fā)生基因整合所致[7]。從DNA結(jié)構(gòu)來(lái)看,HPV包括早期基因區(qū)(E)、晚期基因區(qū)(L)和長(zhǎng)控制區(qū)(LCR)三個(gè)部分,負(fù)責(zé)病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯及細(xì)胞轉(zhuǎn)化的主要是E區(qū),包含E1~E7,其中與持續(xù)感染及DNA整合關(guān)系最為密切的是E6與E7。當(dāng)前研究已證實(shí)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)長(zhǎng)期、漸變的過(guò)程,其中HR-HPV E6與E7mRNA持續(xù)高表達(dá)是該過(guò)程的關(guān)鍵因素[8]。也有研究指出E6與E7陽(yáng)性表達(dá)率在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌中依次升高,其中在≧CINⅡ中達(dá)到93%以上,在宮頸癌中為100%[9]。近年研究證實(shí)除了E6和E7的mRNA表達(dá)水平以外,其基因突變也是與宮頸癌發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān),更是證實(shí)了兩者的重要性[10]。因此作者認(rèn)為評(píng)價(jià)HR-HPV感染的治療療效時(shí),E6與E7mRNA必不可少。本研究結(jié)果顯示,治療后,患者的E6、E7 mRNA表達(dá)水平均有降低,且A組患者的降低幅度明顯高于B組。該結(jié)果從病毒基因?qū)W角度證實(shí)了重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊的治療效果優(yōu)于重組人干擾素α-2b栓。

    綜上所述,與重組人干擾素α-2b栓相比,重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊治療HR-HPV,能夠更加有效地下調(diào)E6、E7 mRNA表達(dá),提高用藥療效。但本研究病例數(shù)較少,且隨訪時(shí)間較短;HR-HPV感染具有復(fù)發(fā)性,短期療效和中遠(yuǎn)期療效之間可能存在較大的差異;因此,在以后的研究中,還需設(shè)計(jì)大樣本、長(zhǎng)期隨訪的實(shí)驗(yàn)方案加以證實(shí)。

    [1]OH JE, KIM JO, SHIN JY,etal. Molecular genetic characterization of p53 mutated oropharyngeal squamous cell carcinoma cells transformed with human papillomavirus E6 and E7 oncogenes[J]. Int J Oncol,2013,43(2):383-393.

    [2]曾德瓊,李玲.苦參凝膠聯(lián)合重組人干擾素a-2b陰道泡騰膠囊治療宮頸糜爛臨床觀察[J].河北醫(yī)學(xué),2014,22(2):185-187.

    [3]杜善平,李靜,雷永紅,等.重組人干擾素α-2b凝膠聯(lián)合保婦康栓治療宮頸炎的療效觀察[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2013,12(12):1661-1662.

    [4]Scott M, Ma Y, Farhat S,etal. Expression of nucleic acid-sensing Toll-like receptors predicts HPV16 clearance associated with an E6-directed cell-mediated response[J]. Int J Cancer,2015,136(10):2402-2408.

    [5]金平安.重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊聯(lián)合苦參凝膠治療宮頸人乳頭瘤病毒亞臨床感染[J].中國(guó)藥師,2014,17(12):2095-2097.

    [6]沈姚琴,王華,鄧娟.自擬除濕解毒湯聯(lián)合重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊治療宮頸高危型HPV感染的療效觀察[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2014,31(5):603-606.

    [7]陳紅舟,查瑤,周吉航,等.浙江省舟山醫(yī)院997例就診的女性宮頸炎患者人乳頭瘤病毒感染狀況及其基因型分布[J].疾病監(jiān)測(cè),2014,29(9):709-712.

    [8]劉甚佳,尹利榮,李洪林.高危型HPV感染宮頸病變中E6/E7 mRNA的表達(dá)水平[J].天津醫(yī)藥,2015,43(2):186-188.

    [9]莫小亮,羅殿中,黨裔武,等.不同程度宮頸病變單一、多重高危型HPV感染狀態(tài)下E6/E7 mRNA的表達(dá)[J].重慶醫(yī)學(xué),2014,43(18):2268-2271.

    [10]殷復(fù)粉,王寧,于嘯,等.宮頸癌細(xì)胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7基因?qū)TK31基因甲基化狀態(tài)及表達(dá)的影響[J].中國(guó)癌癥雜志,2015,25(9):641-651.

    Effects of different formulations of interferon in treating high risk HPV: a comparative study

    WU Xian-feng, YU Ying, CHEN Hong-zhou, ZHOU Jie-hang

    (DepartmentofObstetrics&Gynecology,ZhoushanHospital,Zhoushan316000,China)

    Objective To evaluate the clinical effects and sec urity of recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule and human recombinant interferonα-2b turunda in treating high-risk human papillomavirus (HR-HPV) subclinical infection. Method 138 patients with HR-HPV infection were divided into 2 groups. Group A were treated with recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule, 800, 000 IU/d, QD, 12d/months for 6 months. Group B were treated with recombinant interferonα-2b turunda, 100,000 IU/d, QID, 20d/months for 6 months. The effective rate and complications rate between groups were compared. The exfoliated cells were extracted to detect E6、E7 mRNA expression by PCR assay. Findings The clinical effective rate of Group A was higher than Group B (94.6% VS 72.2%,P<0.05). No significant difference was found between the two groups in complications rate (18.8% VS 10.1%,P>0.05). Before treatment, the E6 and E7 mRNA expression levels of Group A and B were 0.625±0.103 VS 0.633±0.114 and 0.437±0.053 VS 0.420±0.061. There was no significant difference between the two groups (P>0.05). After treatment, the E6 and E7 mRNA expression levels of Group A and B were 0.175±0.026 VS 0.294±0.034 and 0.214±0.036 VS 0.304±0.049 respectively, with those of Group A being lower than those of Group B. The difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion Compared to human recombinant interferonα-2b turunda, the recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule has higher ability to down regulate E6、E7 mRNA expression and improve the effect in treating HR-HPV subclinical infection.

    recombinant human interferonα-2b; vaginal effervescent capsule; turunda; HR-HPV; subclinical infection

    2016-11-19

    鄔賢鳳(1982-),女,浙江舟山人,本科,主治醫(yī)師。

    10.3969/j.issn.1674-6449.2017.03.014

    R452

    A

    1674-6449(2017)03-0283-04

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